几种常用的染色方法.doc

几种常用的染色方法1美蓝染色法 在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经12min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。2革兰氏染色法 （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经12min，水洗。（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用13min，水洗。（3）加95酒精于抹片上脱色，约30s-1min，水洗。（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10-30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。3抗酸性染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经35min，水洗。（2）用3盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。（3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1美蓝染色液复染约20s，水洗。对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。4瑞氏染色法（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些，或看情况补充滴加，经13min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法 抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3-5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。5姬姆萨染色法（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加510滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。6克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制美蓝溶液 美蓝1g，95酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 碱性复红溶液 碱性复红0.03g，95酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 （2）染色法涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 水洗，以碱性复红溶液复染1530s。 水洗后、吸干、镜检。 染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。 7.结晶紫福尔马林荚膜染色法 （1）染色配制 结晶紫福尔马林染色液 结晶紫10g，福尔马林溶液100ml。混合使其完全溶解，隔夜过滤。碱性复红溶液 见前：克利特氏荚膜染色法（2）染色法涂片用结晶紫福尔马林染色液染色0.51min。 水洗后，以碱性复红染色液复染1530s。 水洗、吸干、镜检。 染色后，菌体呈深蓝色，荚膜呈淡红色。 8.番红染色液荚膜染色法 （1）染液配制 番红（或沙黄）0.7g，95酒精20ml，蒸馏水15ml。 将番红溶解于酒精内，再加蒸馏水混合而成。（2）染色法涂片滴加番红染色液，将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。 水洗、吸干、镜检。 染色后，菌体呈暗红色，荚膜呈淡黄色。 9.赫斯氏荚膜染色法 （1）染色液配制 龙胆紫酒精溶液 龙胆紫酒精饱和液5ml，蒸馏水95ml。 硫酸铜水溶液 硫酸铜20g，蒸馏水100ml。 （2）染色法 涂片加热固定，将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。 用硫酸铜液代替水冲洗染液，用吸水纸吸干、镜检。 染色后，菌体呈深紫色，荚膜呈浅蓝色。 10安沙尼氏荚膜染色法 （1）染色液配制 1结晶紫水溶液。 20硫酸铜水溶液。 （2）染色法 将涂片在空气中自然干燥。 以1结晶紫水溶液染色2min（不必加热），再以20硫酸铜代水冲洗染液。 吸干、镜检。 染色后，菌体呈紫色，荚膜呈淡紫色。 11苗列尔氏芽孢染色法 （1）染色液配制 媒染液 5铬酸液（铬酸5ml，加蒸馏水95ml） 染色液 石炭酸复红液 脱色液 2硫酸液（纯硫酸2ml，加蒸馏水98ml） 复染液 碱性美蓝 （2）染色法 涂片，干燥，火焰固定，用媒染液染色10min，充分水洗，用炭酸酸复红液加温染色（最好在标本上覆盖一张滤纸）2min，水洗，用脱色剂脱色10s，水洗，用美蓝液复染1min，水洗，干燥、镜检。 结果：芽孢呈红色，菌体呈蓝色。12孔雀绿沙黄芽孢染色法（1）染色液 5孔雀绿液，0.5沙黄液。（2）染色法涂片火焰固定，加5孔雀绿液微微加温染色30s1min，至发生蒸气为止，待冷后水洗，再加沙黄液复染30s，水洗，干燥后镜检。结果：芽孢呈绿色，菌体其它部分呈淡红色。13李富逊氏鞭毛染色法（1）染色液配制 5钾明矾水溶液10ml，20鞣酸水溶液10ml，1碱性复红酒杯精溶液10ml。将上述三种溶液按次混合配成，如发生沉淀，用其上清液，本染液保存1周，复染液可用下列染液：美蓝0.1g，硼砂0.5g，蒸馏水100ml。 （2）染色法所用的载玻片必须十分清洁无油脂、无划痕。可将玻片先浸于重铬酸钾清洁液数天，用镊子取出后以清水冲洗干净（冲洗时切勿用手捏玻片），然后斜插于木架上，置37度温箱中任其干燥后备用。 菌液最好用1016h的幼年肉汤培养物。若取自琼脂培养基上的菌落，则用接种环挑取少许，置蒸馏水中制成轻度混浊的细菌悬液，切忌用接种环多作搅动，以免损伤鞭毛。 挑取肉汤培养物或细菌悬液一环，轻置于玻片一滴，玻片作倾斜放置，使菌液沿玻片面顺向下流，自成一薄菌膜，置37度恒温箱内干燥。 将上述染液滴加于涂片上，染1015min，染色时间的长短随室温的高低而不同，如在冬季，可置于37度温箱内染色。 轻轻地水洗12min。 在室温或37度温箱内任其干燥后作镜检，细菌菌体及鞭毛呈红色。 如需复染色，则用上述美蓝硼砂复染液在水洗后，染色10min，用水冲洗，干燥后作镜检。菌体呈蓝色，鞭毛呈红色。 良好的鞭毛染色涂片，应在显微镜的视野中见到大部分细菌菌体均附有鞭毛。 14过碘酸锡夫氏真菌染色法 （1）染色液配制 甲液：1过碘酸液 乙液：碱性复红0.1g，95乙醇5ml，蒸馏水95ml 丙液：亚硫酸氢锌1g，酒石酸0.5g，蒸馏水100ml 丁液：1.22饱和苦味酸液 （2）染色法 将标本在甲液中染10min，水洗后再用乙液染23min，置丙液中染3040min，至玻片呈淡红色为合适，水洗1min，再置于丁液中染3min。充分水洗至无黄色液体为止。脱水、透明，树胶封固后镜检。 结果：真菌组织染色鲜红色。 15中国蓝真菌染色法（1）染色液 纯石炭酸20ml，乳酸20ml，甘油40ml，蒸馏水20ml。将上述成分混合，加温溶解后加入中国蓝0.05g，混合振荡即成。（2）染色法 先将染色液加在载玻片上，将培养物被检样放在玻片上的染色液中，涂匀后覆盖盖玻片，微加温后镜检。16黑色素螺旋体染色法（1）染色液配制 黑色素5g，蒸馏水50ml。混合加热使其溶解，在溶液中加1福