水提---醇萃法.docx

水提-醇萃法：是目前较为理想的提取茶皂素的方法，具有工艺简单、产率和纯度较高的特点。水提-醇萃法是根据茶皂素易溶于热水和95的乙醇，不溶于冷水性质，用热水浸提茶饼，然后于浸提液中加入絮凝剂 Al 2(SO4 )3，沉降除杂冷却后，再用95的乙醇转萃提纯一种方法。茶皂甙为多糖萜类化合物，与香草醛在浓硫酸作用下表现呈色反应，茶皂素的含量和吸光度值成线性关系，且在一定浓度范围内符合比耳定律。 茶皂素提取工艺流程图茶皂素提取步骤（1）油茶饼粕的预处理由浸取的原理可知，破坏植物的细胞壁有利于提高浸取速率，但如果全部的细胞壁遭到深度破坏，则一些分子量较大的物质也被浸取出来，使杂质增多，造成后续操作困难。为了使油茶饼粕中的茶皂素很快接触到浸取剂，将茶叶放入高速万能粉碎机中粉碎，打成茶叶粉末，但不可过细，不利于下一步的过滤。一般茶籽饼的粉碎粒度在 l3 mm为宜。（2）浸提剂的选择根据茶皂素难溶于冷水而易溶于热水和的性质（特点），我们选用蒸馏水作为提取茶皂素的浸提试剂。（3）恒温热水浴浸提按一定的料液比，即称取一定的茶粕粉末，加入一定比例蒸馏水，置入不同温度下的恒温水浴锅中，每次浸泡一定的时间，一定浸泡次数，过滤，得茶皂素浸取液。浸提得到的滤液要趁热用纱布过滤（茶皂素难溶于冷水，放置冷却后将导致产率下降），将滤渣继续加蒸馏水再次进行恒温水浴浸提，然后趁热用纱布过滤，反复操作三次，将得到的滤液合并。（4）加絮凝剂（Al 2(SO4 )3）除杂絮凝剂可以将浸提液中鞣质、蛋白质、蜡质等不稳定杂质除去，而对于茶皂素的溶解则不会产生影响。（5）抽滤抽滤可以将上述的杂质与茶皂素滤液迅速分离。（6）减压恒温蒸发浓缩将抽滤除杂后的滤液置于RE 52-99 旋转蒸发其中进行减压恒温蒸发浓缩至稠状，温度8090 。减压恒温(8090 )蒸发,既可以使滤液快速浓缩，又使得茶皂素不会遭到高温破坏。（7）乙醇转萃将上述稠状液体置于分液漏斗中，加适量的95乙醇萃取三次，取上层萃取液，合并三次的萃取液。茶皂素在95乙醇中的溶解度很高，而在冷水中的溶解度较低，所以茶皂素转入乙醇中。而其它杂质在乙醇中溶解度较低，就留在下层液中。（8）脱色将转萃后的液体置于烧杯中，加入少量活性炭进行脱色处理。为了增强脱色效果，可将烧杯中液体加热煮沸，并不断搅拌两三分钟，然后用过滤的方法除去活性炭。（9）蒸发乙醇将脱色后的滤液置于RE 52-99 旋转蒸发其中进行减压恒温蒸发乙醇，温度55，蒸发至稠状时停止。（10）恒温干燥将上述稠状物置于表面容器中，放入电热恒温鼓风干燥箱进行干燥，温度5060 。（11）称重，得到粗茶皂素 测定：最大吸收波长的确定 茶皂素标准品溶液与香草醛一硫酸显色，以定容空白液为参比液，在 uV2800紫外可见分光光度计上扫描，其吸收曲线下图所示。由图可以看出，在波长为545 nm时吸光度最大，因此茶皂素的测定波长为545 nm. 标准溶液的配置称取0.1 g ( 精确到0.0001 g )茶皂素标准品， 用95乙醇溶解后置入100 mL容量瓶，并用95乙醇定容。分别吸取0.9，1.8，2.7，3.6，4.5mL于10 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，则得含茶皂素 0.09、0.18、0.27、0.36、0.45 mg/mL五种不同浓度的标准溶液。标准曲线的制作在最大吸收波长545 nm 处测定不同浓度的 茶皂素标准液的吸光度，以茶皂素含量为横坐标，吸光度为纵坐标，作标准曲线（如图2-3），并计算回归方程为：A=0.0008 x+0.0257，相关系数 r = 0.9993，由R2 =0.9987开方而得。茶皂素含量的测定准确称取1g茶皂素粗产品，用95乙醇完全溶解，定容至100 ml,得1 mg/ml的茶皂素粗产品溶液。吸取供试液5mL，置50 mL容量瓶中，加香草醛一硫酸显色，充分混匀，用95乙醇定容，以定容空白液作参比，于545nm处测定吸光度(A)。根据茶皂素标准工作曲线，计算出茶皂素含量。水提醇萃发提取茶皂素的最优实验条件为：浸提温度为90 ，浸提时间为1.5 h，液料比为1：7，pH为5。正交实验结果分析（1）茶皂素的提取率按照上述水提醇萃法的结果，茶皂素的最佳工艺条件提取率接近9%。（2）正交实验优化最佳条件分析根据正交实验结果，得到在油茶饼粕中用水提醇萃法提取茶皂素的最佳工艺条件，此条件下茶皂素的产量大于2.5 g。茶皂素易溶于热水，随着浸提水温的升高，茶皂素的溶解性将增强，但温度不宜超过95，这是因为茶皂素本身具有一定的生物活性，如果温度过高，将破坏其生物成分。此外，温度过高，浸提液将大量蒸发，一定程度上影响了茶皂素的溶解和实验的操作。因此，水提醇萃法提取茶皂素的最佳浸提温度在90 左右。最佳浸提时间为1.5 h，这是因为时间如果过短，茶皂素将不能完全从茶粕中析出，