乙肝病毒检测的方法学评价.ppt

乙肝病毒检测 方法学评价 乙肝病毒结构 一 乙型肝炎病毒结构特点 HBsAg 是HBV感染的主要标志HBsAb 保护性抗体HBcAg 仅存于感染的肝细胞核内 一般不存在于血循环中HBcAb 非保护性抗体 HBcAb IgM提示HBV处于复制状态HBeAg HBV复制及强感染性的指标HBeAb 有一定的保护作用 预后良好 患者血清中存在三种基本形态 大球型颗粒 又称Dane颗粒 小球型颗粒 管型颗粒小球型颗粒 管型颗粒管型颗粒 乙型肝炎病毒的实验室诊断 一 血清学检查 二 生化学检查 三 HBVDNA 基因型和变异检查 血清学检查 项目 HBsAg 抗 HBs HBeAg 抗 HBe 抗 HBc以及抗 HBcIgM方法ELISA enzyme linkedimmunosorbentassay 最常用 定性 HBsAg 感染的标志Anti HBs 既往感染 接种疫苗Anti HBcIgM 急性感染标志Anti HBcIgG 既往或慢性感染HBeAg 急性病毒复制 有传染性Anti HBe 病毒不再复制HBV DNA 急性病毒复制 比HBeAg更准确 主要用于监测治疗反应 HBV血清学标志物的临床意义 两对半的意义 乙型肝炎的诊断 判断传染性 判断预后 筛查献血员 流行病学调查 乙肝三系定性检查是用来判断是否感染乙肝或粗略估计病毒复制水平的初步检查 对患者病情程度的评估参考性不大 所以乙肝患者在做乙肝三系定性检查的时候 应结合肝功能检查 乙肝病毒DNA检查 B超检查等来判定病情的轻重 ELISA检测灵敏低的原因及局限 ELISA法受其自身敏感性和特异性的限制 HBVS和前C基因区出现位点突变导致HBsAg和HBeAg表达缺陷 影响因素多 如加样时间 试剂平衡时间 样本溶血程度等等 特别是低浓度样本易导致假阴性结果 使弱阳性样本漏检 急性感染的窗口期 HBsAg检测方法灵敏度不足 血清亚型的漏检等 标本中病毒颗粒少 血清学检测的局限性 HBV具有 检测窗口期假阴性结果无法检测突变株及抗体 乙肝病毒的定量检测 1 乙肝表面抗原 HBsAg 定量检测 1 参考值 0 0 05IU mL2 临床意义 1 可作为HBV携带者乙肝病毒复制的参考指标 2 评价拉美呋定的治疗效果 3 监测应用alpha 干扰素治疗病人的乙肝病毒复制 4 确定肝移植病人免疫球蛋白的使用剂量 2 乙肝表面抗体 抗 HBs 定量测定 是HBsAg刺激机体产生的特异性抗体 是一种保护性抗体 能中和HBV 1 抗 HBs含量在0 10mIU ml 表示不具有保护性 需要注射乙肝疫苗 3针 0 1 6方案 2 抗 HBs含量在10 100mIU ml 表示具有保护性 但较弱 需要乙肝疫苗强化注射 1针 3 抗 HBs含量大于100mIU ml 表示具有很强的保护性 不需要注射乙肝疫苗 3 乙肝病毒e抗原 HBeAg HBeAg增高说明病毒复制 具有很强的传染性 4 乙肝病毒e抗体 抗 HBe 抗 HBe阳性说明病毒复制减少 传染性弱 但并非没有传染性 抗HBe不是保护性抗体 5 乙肝病毒核心抗体 抗 HBc 抗 HBc 不是中和抗体 有IgG和IgM两种形式 IgM在早期出现 而IgG在恢复期出现 可持续多年或终身存在 乙肝五项定量检测的优点 由于乙肝病毒容易发生变异 再加上乙肝定性检测方法的局限性 会出现假阴性结果 导致不能及时发现乙肝的感染 也就不能得到及时的治疗 对医护人员和其他患者也存在着被感染的威胁 乙肝五项定量应用目前最先进的化学发光法检测 避免了假阴性和漏检的问题 而且准确 尤其对乙肝病人的疗效观察提供了依据 这是检验发展的趋势 两对半定量检测极大地提高了检测的灵敏度 LiCa技术检测HBsAg灵敏度可达0 5ng ml 而ELISA检测HBsAg达到2ng ml时才会阳性 急性乙肝早期定量能及早检出HBsAg 确证HBV感染 几乎能与PreSi同时检测 在病程观察中大大缩短了 窗口期 而酶标检测在乙肝早期往往HBsAg呈阴性 慢性乙肝一些患者由于机体常缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答 HBsAg表达较低 酶标检测可出现HBsAg和HBsAb均阴性的情况 而定量检测则可避免这些情况的出现 为正确判断病情提供依据 灵敏度如病毒发生变异后 表达量较低 常规ELISA测不出抗原 而定量检测具有极高的灵敏度 可发现极有可能同时检测出HBsAg和HBsAb 血清中HBsAg含量与病人对HBsAg细胞免疫成反比关系 而肝功能改变则与此种细胞免疫成正比 定量HBsAg是反映这一关系的唯一手段 可发现低浓度的HBsAg携带者 特别是一些群体如医务工作者及病人家属等 定量检测意义 监测疾病发展评估药物疗效指导疫苗接种 国内疫苗评价标准 无应答者 无抗体产生 5 加强计量复种低应答者 100IU L 20 无须复种 PCR技术在乙肝方面的应用 乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科 hepadnaviridae 基因组长度3 2kb目前感染人类最小的DNA病毒部分双链环状DNA 定量PCR的特点 可定量结果 准确灵敏地反应了病原体的感染和治疗恢复情况光谱分析仪直读结果 自动分析 增强了灵敏性和客观性 HBV基因及编码蛋白 HBV DNA定量检测的临床应用 慢性乙肝诊断治疗监测和疗效评价跟踪随访预后判断 二 HBV DNA与 两对半 1 两对半 机体的免疫反应状态 FQ PCR 检测的是HBV本身的遗传物质 DNA 是病毒存在和复制的最可靠 最直接的指标 2 携带者 大三阳 小三阳 等免疫学指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度 3 血清学指标 不能排除HBV感染 4 也可能出现HBsAg HBV DNA 5 HBsAb HBcAb HBeAb 三抗体阳性与HBVDNA2 5 103copy ml结果解释 HBV DNA检测的临床意义 诊断方面 HBVDNA是HBV存在最直接的依据 HBVDNA是HBV复制的标志 HBVDNA是患者具有传染性的标志 对HBV M起补充作用 HBeAg 抗HBe 乙型肝炎 前C区变异 HBsAg 乙型肝炎 S区变异 低水平感染单项抗HBc 乙型肝炎 疗效判断 HBVDNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 预后判断HBVDNA水平与病情有一定的关系 一 乙肝病毒DNA检查可检查乙肝病毒的复制状况 如乙肝病毒DNA测定值 1000copies ml 就提示乙肝病毒有复制 而且病毒数量的高低与病毒复制的程度成正相关 若结果阴性 则表明病毒处于不活跃阶段 病情比较平稳 二 乙肝病毒DNA检查还是判断乙肝病毒传染性的重要指标 如果乙肝病毒DNA测定值 1000copies ml 常提示具有传染性 且检测值越高就说明乙肝病毒复制越活跃 传染性越强 三 乙肝病毒DNA检查可以作为肝病患者确诊病情的主要依据 乙肝病毒DNA阳性者 即使肝功能正常 必要时也应考虑进行抗病毒治疗 乙肝抗病毒治疗的标准就是乙肝病毒DNA 1000copies ml 且患者转氨酶超过正常值两倍 此时是肝病患者抗病毒治疗的最佳时机 四 乙肝病毒DNA检查结果还可以在一定程度上辅助判断乙肝病毒是否产生了变异 如在治疗过程中乙肝病毒DNA检测结果由阴性转为阳性时 则提示病毒已发生变异 应结合具体病情重新选择抗病毒药物 基因检测在乙肝诊疗各阶段的应用 药物治疗方案的确定 用药 干扰素 拉米夫定 阿德福韦 恩替卡韦 药物治疗 疗效评价 前C区1896位点突变检测 跟踪随访 乙肝病毒定量检测 确诊 病毒学分析 乙肝病毒分型检测 拉米夫定耐药检测 阿德福韦耐药检测 共价闭合环状DNA cccDNA 检测 恩