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文档简介

考点2动物细胞工程(5年9考)(2013安徽卷、浙江卷、重庆卷、海南卷)1动物细胞培养过程:2动物细胞培养的条件(1)无菌、无毒:对培养液和所用培养用具无菌处理,添加抗生素;定期更换培养液以清除代谢产物。(2)营养:除糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素之外通常还需加入血清血浆等天然成分。(3)适宜的温度和ph:温度为36.50.5_(哺乳动物),ph为7.27.4。(4)气体环境95%空气5%co2(维持培养液的ph)3动物体细胞核移植及克隆技术引发的伦理问题(1)原理:动物细胞核具有全能性(2)核移植过程(以高产奶牛克隆为例)(3)克隆人的类型及其伦理问题类型项目治疗性克隆生殖性克隆区别目的治疗人类疾病用于生育,产生新个体水平细胞水平个体水平联系都属无性繁殖;产生新个体、新组织,遗传信息相同中国政府的态度中国政府的观点:不赞成,不允许,不支持,不接受任何生殖性克隆人的实验,不反对治疗性克隆4.单克隆抗体制备(1)诱导动物细胞融合的原理:细胞膜具有一定的流动性。(2)诱导动物细胞融合的方法:物理法离心、振动、电激等;化学法聚乙二醇;生物法灭活病毒。(3)单克隆抗体制备过程(4)单克隆抗体的优点:特异性强、灵敏度高,可大量制备。(5)单克隆抗体的应用:作为诊断试剂;用于治疗疾病和运载药物。5比较动物细胞培养、核移植与动物细胞融合比较动物细胞培养核移植动物细胞融合原理细胞增殖动物细胞核的全能性细胞膜的流动性过程结果相同分化程度的细胞群与供体基本相同的个体杂交细胞关键环节细胞增殖(分裂)、细胞癌变核融合、细胞分化人工诱导细胞膜融合应用生产生物制品基因工程检测有毒物质加速良种繁育保护濒危物种生产医用蛋白提供克隆器官、组织等获得杂种细胞,制备细胞产物如单克隆抗体思维激活判断正误(1)植物组织培养常用液体培养基,动物细胞培养常用固体培养基()。(2)具有包含物种完整基因组的细胞核的活细胞是生物克隆的重要条件之一()。(3)一般血清中的抗体是一群识别不同抗原部位的抗体混合物,单抗则识别抗原分子的特殊部位,具专一性()。(4)细胞克隆的基本要求是:必须保证分离出来的细胞是一个而不是多个()。(5)在培养瓶中要定期用胰蛋白酶处理使细胞从瓶壁上脱离,制成悬浮液()。(6)二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的()。(7)核移植过程中供体理论上是提供细胞核,但操作过程中可以把整个体细胞注入去核的卵母细胞中去()。答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)思考与填空仔细阅读图示及相关内容辨析并填充其含义从a、b到c的过程可以表示不同的含义(如图所示):若a、b为动物细胞,则该过程表示细胞融合;若b为精子,a为卵细胞,则该过程表示受精;若a为除去细胞核的卵母细胞,b为细胞核,则该过程表示核移植。动物细胞培养技术1(2013浙江理综,6)实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基本过程如图所示。下列叙述错误的是()。a甲过程需要对实验小鼠进行消毒b乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化c丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型d丁过程得到的细胞具有异质性解析取小鼠皮肤组织进行培养时需对实验小鼠进行消毒;通过胰蛋白酶消化皮肤组织可获得皮肤细胞;丙过程为最初的传代培养,得到的细胞大多具有正常二倍体核型;来源于多个细胞的非克隆培养所得到的细胞系具有异质性,该实验小鼠皮肤细胞属于非克隆培养,丁过程得到的细胞具有异质性。答案c题后归纳(1)动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养的原因:幼龄动物组织或胚胎的细胞分化程度低,增殖能力很强,更易于培养。(2)在动物细胞培养过程中两次用到胰蛋白酶:第一次是将剪碎的组织分散成单个细胞;第二次是将贴壁细胞从瓶壁上分离下来,目的是避免动物细胞的接触抑制现象。(3)细胞贴壁和接触抑制悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。(4)原代培养与传代培养原代培养:细胞悬液第一次在瓶中培养,没有分瓶培养之前的细胞培养。传代培养:原代培养的细胞生长、繁殖一定时间后,由于空间不足或细胞密度过大导致营养枯竭,影响细胞的生长,因此需要重新用胰蛋白酶等处理,进行分瓶扩大培养,即传代培养。单克隆抗体的制备过程及选择培养基的制备2(2013海南卷,31)单纯疱疹病毒型(hsv1)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗hsv1的单克隆抗体可快速检测hsv1。回答下列问题:(1)在制备抗hsv1的单克隆抗体的过程中,先给小鼠注射一种纯化的hsv1蛋白,一段时间后,若小鼠血清中抗_的抗体检测呈阳性,说明小鼠体内产生了_反应,再从小鼠的_中获取b淋巴细胞。将该b淋巴细胞与小鼠的_细胞融合,再经过筛选、检测,最终可获得所需的杂交瘤细胞,该细胞具有的特点是_。(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体,可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的_中使其增殖,再从_中提取、纯化获得。(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种hsv1蛋白,其原因是该抗体具有_和_等特性。解析(1)制备单克隆抗体时,需要先给小鼠注射特定抗原(hsv1蛋白),当小鼠血清中抗hsv1蛋白的抗体检测呈阳性时,就可从小鼠脾脏中获取b淋巴细胞,将b淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,经过筛选和克隆化培养,最终获得既能无限增殖又能产生专一抗体的杂交瘤细胞。(2)单克隆抗体的获取有两条途径,一是从体外细胞培养液中提纯获得,二是将杂交瘤细胞注射到小鼠的腹腔中使其增殖,再从腹水中提取、纯化获得。(3)单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、纯度高等特点。答案(1)hsv1蛋白体液免疫脾脏(其他合理答案也可)骨髓瘤无限增殖且产生专一抗体(其他合理答案也可)(2)腹腔腹水(3)纯度高特异性强(其他合理答案也可)题后归纳(1)血清抗体与单克隆抗体名称产生特点血清抗体由浆细胞分泌一般从血清中分离,产量低、纯度低、特异性差单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌特异性强,灵敏度高,能大量制备(2)比较制备单克隆抗体过程中的几种细胞细胞特点浆细胞能产生单一抗体,但不能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖,但不能产生抗体杂交瘤细胞即能产生单一抗体,又能在体外培养条件下无限增殖(3)单克隆抗体制备过程中两次筛选的比较项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞,另外还有未融合的细胞由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激,所以经选择性培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞续表筛选方法用特定的选择培养基筛选:未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞(“bb”细胞、“瘤瘤”细胞)都会死亡,只有融合的杂交瘤细胞(“b瘤”细胞)才能生长用多孔培养皿培养,在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测,经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞(4)选择培养基的制备依据筛选目标,制备选择培养基时应“只让杂交瘤细胞”存活,其余细胞(包括未融合的b细胞,未融合的骨髓瘤细胞及融合的bb细胞,瘤瘤细胞)均不能存活(如题组专训2)生物技术伦理问题3(2013南通中学调研)有关“治疗性克隆”的说法错误的是()。a可解决临床上供体器官不足和器官移植后免疫排斥问题b其核心技术是胚胎干细胞培养技术c胚胎干细胞可以克隆出不同组织细胞的根本原因是基因的选择性表达d中国政府既反对生殖性克隆人,也反对治疗性克隆解析用患者自身的胚胎干细胞克隆器官,可以克服供体器官不足,器官移植后又不会发生免疫排斥反应;治疗性克隆的核心是胚胎干细胞的培养;胚胎干细胞克隆出不同组织细胞属于细胞分化,细胞分化是基因的选择性表达;中国政府禁止生殖性克隆人,但不反对治疗性克隆。答案d题后反思(1)克隆技术形成重组细胞发育成一个新个体,体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。(2)克隆属于无性繁殖,产生新个体的性别、绝大多

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