SSR法鉴定水稻两系杂交种纯度的运用与探讨Ⅲ两个形态学差异较大的品种间掺杂回收试验.doc

SSR法鉴定水稻两系杂交种纯度的运用与探讨。两个形态学差异较大的品种间掺杂回收试验摘要：在两系杂交稻两优培九的大群体田间纯度鉴定中，定向掺入形态学差异较大的两系杂交稻新两优，逐株抽取田间植株叶片样品，运用法进行鉴定。结果表明，运用法能够准确地检测出掺入的新两优。在室内检测的谱带中发现，新两优的带型与两优培九不育系带型的位置相同。关键词：两系杂交稻；大群体；掺杂回收；带型比对 ： ： ； ； ； 由于提取方法的简化、琼脂糖凝胶电泳技术的运用，以及分子标记鉴定两系杂交水稻种子纯度具有快速、重复性好、多态性高等优点，使得法成为目前室内鉴定两系杂交水稻种子纯度时应用最为广泛的分子标记方法。但是琼脂糖凝胶电泳成像的谱带分辨率低，信息量不充分，谱带的主带一般表现为不育系、恢复系和杂交种种类型，不能区分不同的杂株类型。为验证该方法的可靠性和准确性，前人的研究一般是在鉴定时，采取人为在鉴定样品中掺入该组合的恢复系、保持系、不育系的方法来检验。但在田间正季种植鉴定条件下，用两系杂交水稻种子大群体定位掺杂回收，且对掺入的杂交种子杂株谱带特征的研究目前鲜有报道。此次研究的目的在于了解单对引物对亲缘关系较远的品种的识别率，验证单对引物法测定亲缘较远的两系杂交水稻种子纯度的准确性和可靠性，同时探讨样品中混入其他杂交种的谱带特征。 材料与方法 材料试验材料是在通过系谱比较后，选用遗传背景不同、亲缘关系较远的两优培九（培矮）和新两优（）两个品种。这两个品种由荆州市种子管理局从市场上抽取商品种子，并经生产企业确认。所用引物及试剂均由北京鼎国生物有限公司提供。 反应体系扩增反应总体积： ， ， ， 酶， ， 。反应条件为：预变性；然后进行个循环的扩增，循环参数为、，、，、；最后在下延伸。扩增产物在含的琼脂糖凝胶中进行电泳后，应用凝胶成像系统观察记录。 掺杂和抽样方法试验于年月日播种，月日移栽。小区单本栽植株苗，行，每行株，行距，株距。每个植株用位数编号，前两位数表示所在的行数，后两位数表示所在行的位置，例如表示第行的第株。在两优培九田间鉴定移栽时，每隔9株混栽株新两优。两个品种之间的植株特征特性差别较大，易于田间识别（表）；同时两个品种之间的遗传背景差异较大，易于室内检出。返青后按对应编号采取田间各植株的倒二叶叶片，用对两优培九进行室内分子检测，为了防止人为因素干扰，试验过程中将掺杂、田间鉴定和室内检测的操作分别由批不同的专业人员独立完成。 结果比对在抽穗前及齐穗后分两次按 进行田间纯度鉴定，并将田间结果与室内法的纯度检出结果进行比对，验证室内与田间结果的一致性。 结果与分析 混入的杂株田间和室内鉴定结果室内法将小区的所有植株都抽样检测，共检出杂株株，其中掺入的新两优共株，样品自有杂株株，掺入株的检出率为。掺入的新两优谱带特征如图所示。从表中可见，两优培九田间鉴定中，共发现杂株株，其中掺入的新两优共株，样品自有杂株株，掺入株的检出率为。 杂株谱带与两优培九及其亲本的谱带比较引物筛选时，两优培九的不育系带型在杂交种互补带型的下方，恢复系带型在杂交种互补带型的上方。掺入的新两优的带型均在互补带型的下方，与两优培九不育系的谱带位置相同。 小结与讨论研究表明，应用法对两系种子纯度进行鉴定时，虽能准确地把掺入的亲缘关系较远的其他两系杂交稻品种识别出来，但不能仅根据室内法电泳得到的杂株谱带类型简单地推断其田间形态为不育系或恢复系类型杂株，必须进行田间比对才能作出准确判断。结合文献的结论可以看出，对特定品种及适宜的引物而言，如果田间杂株为真实的不育系或恢复系，法的谱带一定为不育系或恢复系的特征谱带，反之，如果谱带表现为不育系或恢复系的特征谱带，植株田间表现型并不一定是不育系或恢复系。对与亲缘关系较近的品种，因为亲本间遗传差异较小，而法标记的是一些无意义的重复序列，这些片段很可能都会在亲缘关系较近的品种中普遍存在，从而使亲缘关系较近但田间表现型差异明显的品种显示出相同的带谱，从而产生种子纯度误判风险，这方面还需进一步研究。参考文献：辛业芸，张 展，熊易平，等应用分子标记鉴定超级杂交水稻组合及其纯度中国水稻科学，（）：马秀芳，华泽田，隋国民，等利用微卫星标记鉴定北方杂交粳稻种子纯度的研究杂交水稻，（）：黄成志，黄文章，严明建，等利用分子标记鉴定杂交水稻真伪与纯度安徽农业科学，（）： 谭智丹，余显权，高健强，等利用鉴定杂交水稻种子纯度的研究种子，（）： 刘之熙，陈祖武，朱克永，等利用分子标记快速鉴定杂交水稻种子纯度技术体系的优化杂交水稻，（）： 樊叶杨，庄杰云应用微卫星标记鉴别水稻籼粳亚种遗传，（）： 李稳香，詹庆才杂交水稻种子纯度指纹图谱标记鉴定技术研究中国种业，（）： 詹庆才利用微卫星标记进行杂交水稻种子纯度鉴定的研究杂交水稻，（）： 薛灿辉，朱克永，陈祖武，等利用微卫星标记鉴定金优杂种纯度技术研究湖南农业科学，（）： 金伟栋，洪德林杂交水稻品种纯度鉴定研究进展种子，（）： 陈兆贵，梁展鹏杂交水稻种子纯度分子鉴定技术研究中国种业，（）： 张 辉，姜 勇杂交水稻品种鉴定和纯度分析技术研究进展