实验六：枯草芽孢杆菌生长曲线测定.docx

微生物学实验报告开课时间室：A区文科楼510 2012年11月22日学院生物工程学院年级、专业、班10级生工01班姓名吕亚慧成绩课程名称微生物学实验实验名称枯草芽孢杆菌生长曲线测定实验指导教师李苹教师评语教师签字： 年 月 日 实验目的：1、 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代代；2、 学习液体培养基的配置以及接种方法； 3、 反复学习无菌操作技术；4、 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5、 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；6、 学习光电比浊法测量细菌数量的方法；7、 学习平板涂布技术。实验原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。实验器材(1)活材料：枯草芽孢杆菌(E.coli)。(2)培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基10支(每支试管培养基量相同)(3)器材：1mL无菌移液枪、恒温培养箱、冰箱、光电比色计、标签等。实验方法1. LB液体培养基的配制：500ml 称取:酵母膏 蛋白胨 氯化钠 混合后加去离子水（或注射用水）水400ml，待加热充分溶解后加去离子水定容至500ml将其分装至三个锥形瓶内，在分装至小试管内，高压灭菌。2.接种：取10支装有牛肉膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签(注明菌名、培养处理、培养时间、组号)。按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2mL的枯草芽孢杆菌培养液，接种后，轻轻摇荡，使菌体混匀。3.培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37下振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、2、4、6、8、16、18、20和24h后取出，放冰箱中贮存，待测定。接种时间安排：管号生长时间（h）生长时间段冷藏时间10-14:002218:00-20:0014:00 20:003418:00-22:0014:00 22:004614:00-20:0020:005814:00-22:0022:0061622:00-次日14：0014:00 次日14:0071820:00-次日14:0014:00 次日14:0082018:00-次日14:0014:00 次日14:0092414:00-次日14:00次日14:0010重复试管5（8h）14:00-22:0022:004.比浊：将培养不同时间、形成不同细胞浓度的细菌培养液，以蒸馏水作空白对照，选用540560nm波长进行光电比浊测定。从最稀浓度的菌悬液开始依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使