传染病实验：实验室诊断.doc

传染病实验报告一、实验材料：病鸭、镊子、剪刀、托盘、普通平板、麦康凯平板、血平皿、接种环、酒精灯、药敏纸片、生化管、注射器、小白鼠二、实验方法：病理解剖观察、病料接种培养、特殊平板培养、生化实验、药敏试验、动物实验、玻板凝集实验（演示）三、实验内容及步骤:(1) 病理解剖观察：1、 观察鸭子的天然孔道，是否有异常黏液分泌2、打开病鸭腹腔，采用“三刀法”打开腹腔（两只鸭腿与腹部交接的地方各剪一刀，腹部中间再剪一刀）。同时注意观察皮下及胸、腿部肌肉有无异常（如出血、皮下水肿等）。3、检查皮下及肌肉：观察皮下与肌肉是否有出血坏死，皮下是否有渗出物等。4、检查体腔与内脏：注意体腔内、气囊是否有异物，是否增厚、有绿斑、出血等现象，内脏器官的体积、颜色、性质是否异常。（1）呼吸系统：主要检查鼻腔内是否有异常分泌物；气管是否有出血环，有异常黏液分泌；肺脏颜色形状是否正常，是否有出血坏死肿大等现象。（2）消化系统：口腔是否有黏液；食道是否有出血，坏死灶溃疡；肌胃腺胃是否出血有坏死灶，乳头是否肿胀；肠道是否有充血出血坏死灶；肝脏是否发坏生变性，肿大，有无出血点，出血斑，坏死等异常；胰脏是否有出血，坏死。 （3）泌尿系统：主要检查肾脏，是否肿大，有出血坏死尿酸盐沉积。 （4）心血管系统：心脏的颜色，是否有心包积液；各处血管是否有充血现象。 （5）淋巴系统：检查胸腺、法氏囊是否肿大出血；肠道淋巴结及盲肠扁桃体是否异常。 （6）神经系统：检查颅腔脑是否肿大，积液，脑膜有无异常；神经粗细颜色。（2） 病料接种培养 1、选取病变明显典型的部位接种，大鸭子选取脑、肝、脾、肺接种，小鸭子选取接种，并将血平皿划分成相应的几部分做好标记。 2、将接种环酒精灯灭菌，蘸取相应部位，使用“Z”形划线接种法划线接种。每蘸取一个部位后都要进行酒精灯燃烧灭菌，接种时应在酒精灯周围进行。 3、将接种好的血平皿放置在37恒温下培养24小时后取出观察菌落生长情况。 （三）特殊平板培养 1、选取病变明显典型的部位接种，大鸭子选取脑、肝、脾、肺接种，小鸭子选取接种，并将麦康凯平板划分成相应的几部分做好标记。 2、将接种环酒精灯灭菌，蘸取相应部位，使用“Z”形划线接种法划线接种。 3、将接种好的麦康凯平板放置在37恒温下培养24小时后取出观察其生长情况。 （四）生化实验 1、选取（二）.3中培养好的细菌，大鸭子选取 接种的细菌，小鸭子选取两种不同菌落形态的细菌。 2、将接种环灭菌蘸取相应细菌至生化管，37恒温，24小时后拿出观察。 （五）药敏试验1取适量培养的细菌与一定生理盐水混合均匀，用棉签蘸取后涂布于普通平板上；2待平板上的菌液晾干后，将带有卡那霉素、氨苄西林、氟苯尼考、头孢曲松、多西霉素、恩诺沙星、磺胺甲基异恶唑的药敏纸片贴于平板上；3将贴好药敏纸片的平板放于37恒温箱中培养24小时后观察结果。 （六）动物试验 1、在EP管中加入适量的生理盐水，选取（二）.3中培养好的细菌，大鸭子选取 接种的细菌，小鸭子选取两种不同菌落形态的细菌，用灭菌后的接种环分别蘸取至EP管中，混匀制成菌液。 2、分别用一次性注射器将三种菌液分别注入三只小鼠体内（皮下注射，注射时要缓慢推进以防局部积液），并将小鼠做好标记。24小时后观察小鼠病理特征。 （七）玻板凝集实验（演示实验） 1、分别编号1号，2号，3号。再分别往1号，2号，3号玻片中加入40ul抗原,40ul抗原,40ul生理盐水。其中3号作为对照。 2、分别往1号，2号加入10ul血清,5ul血清,3号不加血清。一段时间后观察现象。四、实验结果（1） 病理解剖观察1、大鸭子：呼吸系统：气管出血；肺脏有出血点。消化系统: 食道充血；胃浆膜面出血；，肠道表面充血出血，肠系膜出血；肝脏肿胀，质脆易碎，表面斑驳有针尖大小的坏死灶；胰脏有透明样坏死灶；气囊广泛出血。泌尿系统: 肾脏质脆易碎，花斑肾。心血管系统：心包黄色积液，有出血点，心冠脂肪出血。淋巴系统：胸腺肿大；法氏囊有出血斑；脾脏肿大，呈大理石样变。神经系统：脑充血，神经无明显症状。2、小鸭子：呼吸系统：气管出血；肺脏出血；气囊均有出血斑。消化系统: 食道充血；腺胃肌胃出血；肝脏肿大，有针尖大小坏死灶，颜色布局不均匀，质脆；肠道黏膜充血出血，肠系膜出血；泄殖腔出血，胰腺有针尖大小坏死灶，透明样坏死。泌尿系统: 肾脏质脆，花斑肾。心血管系统：心脏心包积液，心冠脂肪出血，心脏有出血点，充血严重。淋巴系统：胸腺肿大；脾脏肿大有坏死灶，成大理石样；法氏囊有出血点。神经系统：神经无明显症状。（2） 病料接种培养（血平皿培养）1、大鸭子平板：菌落均呈乳白色，光滑，圆形菌落，无溶血现象。2、小鸭子平板；有两种形态菌落，一种呈光滑透明圆形菌落，一种呈光滑灰白菌落有溶血现象。（三）特殊平板培养麦康凯培养基培养：大鸭子接种菌生长较好，呈红色；小鸭子接种菌白色菌呈灰白色生长。（四）生化实验实验中接种的三套可疑菌落生化管为如下结果：试剂/菌种甘露醇鼠李糖蔗糖半乳糖果糖葡萄糖大鸭，+，+，+，+，+-小鸭（白色菌落），+，+，+，+，+-小鸭（透明菌落），+，+，+，+，+-注：+ 阳性或产酸；+ 产酸又产气；- 阴性或不发酵。大肠杆菌：能发酵多种碳水化合物产酸产气，大多数菌种可迅速发酵乳糖和山梨醇，仅极少数迟发酵或不发酵；约半数菌株不分解蔗糖。沙门氏菌：发酵葡萄糖，麦芽糖，甘露醇和山梨醇产气；不发酵乳糖、蔗糖链球菌：能发酵简单的糖类，产酸不产气。巴氏杆菌：可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，产酸不产气；一般发酵乳糖、鼠李糖、水杨苷、肌醇、菊糖。（五）药敏试验2、 实验结果（1）大鸭抑菌圈直径（mm）判定标准耐药 中介 敏感卡那霉素2413 1417 18氨苄西林15 13 1416 17氟苯尼考24 12 1317 18头孢曲松27 19 2022 23多西环素21 12 1315 16恩诺沙星3515 1620 21磺胺甲基异恶唑2812 1316 17（2） 小鸭（白色菌落）抑菌圈直径（mm）判定标准耐药 中介 敏感卡那霉素1313 1417 18氨苄西林713 1416 17氟苯尼考1312 1317 18头孢曲松1519 2022 23多西环素1112 1315 16恩诺沙星1015 1620 21磺胺甲基异恶唑3012 1316 17（3） 小鸭（透明菌落）抑菌圈直径（mm）判定标准耐药 中介 敏感卡那霉素713 1417 18氨苄西林713 1416 17氟苯尼考712 1317 18头孢曲松719 2022 23多西环素712 1315 16恩诺沙星715 1620 21磺胺甲基异恶唑712 1316 17（六）动物实验解剖后病理特征：1、小鼠1号（接种大鸭子菌）：皮下出血，有胶冻样物质；心脏出血严重；肝脏出血肿大；肠粘膜出血；肾脏出血；肺脏出血；胃出血；脾脏肿大。2、小鼠2号（接种小鸭子无色菌）：打开腹腔有恶臭味；皮下有胶冻样物质；心脏有出血充血；肝脏表面斑驳，有坏死灶；胃充血；肠道充血；肺脏充血出血；肾脏肿大。3、小鼠3号（接种小鸭子白色菌）：心脏出血；肺脏出血；肝脏肿大出血；胃出血；脾脏肿大；肠系膜出血；胰腺出血质脆易碎；肾脏肿大出血。 （七）玻板凝集实验（演示实验）1号凝集现象最明显，2号凝集现象不明显，3号无凝集现象。5、 结果与分析1、 大鸭子的分析：特征病理病变为肝脏肿胀，质脆易碎，表面斑驳有针尖大小的坏死灶；胰脏有透明样坏死灶。心脏心包积液；肺脏出血；气囊出血。其菌落在麦康凯上生长为红色生长良好。其动物实验病理症状呈全身性败血变化和皮下胶冻样渗出。综合生化与药敏，初步怀疑为沙门氏菌与大肠杆菌的混合感染。沙门氏菌造成全身性败血变化，大肠杆菌可能造成皮下腹腔胶冻样渗出。2、小鸭子分离出两种菌落。白色菌落在血平皿上有溶血现象，镜检形态为球状，呈链状排列。接种动物病变呈全身性败血，初步怀疑为链球菌。小鸭病理病变主要有全身性败血变化，胰腺有针尖大小坏死灶， 肾脏质脆，花斑肾。心脏心包积液，胸腺肿大；脾脏肿大