中药材夏枯草规范化栽培过程中几项关键技术研究与质量评价优秀毕业论文 可复制黏贴.pdf

湖南中医药大学 硕士学位论文 中药材夏枯草规范化栽培过程中几项关键技术研究与质量评价 姓名：罗目和 申请学位级别：硕士 专业：中药学 指导教师：周日宝 20060501 中文摘要 中药材夏枯草来源于唇形科( l a b i a t a e ) 夏枯草属( p r u n e ll a ) 植物夏 枯草厅删e j 妇 v u g a r i sl 的干燥果稳。性味苦辛寒，具有清肝明目，消肿 散结之功效。用于目赤肿痛、目珠夜痛、羞明流泪、头痛眩晕、瘰疬、瘿瘤、 乳痈肿痛。 夏枯草是湖南省的大宗道地药材，随着中药现代化进程的推进，夏枯草 的生产逐渐向着规范化、集约化发展。益阳市现在已经成为国家科技部夏枯 草g a p ( g o o da r g r i c u l t u r ep r a c t i c e ) 规范化种植和研究基地和湖南省规范 化种植示范基地。 目前，关于夏枯草栽培方面的研究较少，并且没有成文的规范化操作规 程( s t a n d a r do p e r a ti o np r a c ti c es o p ) ，本实验根据夏枯草的生物学特性， 参考夏枯草产地传统栽培技术经验及其他药材规范化栽培资料研究夏枯草规 范化栽培的几项关键技术，结合产量和质量分析，确定最佳播种时间、播种方 法、施肥方法、采收时间，测定夏枯草水分、灰分、酸不溶性灰分及浸出物 含量进行夏枯草质量评价，为制订合理的夏枯草g a p 生产方案和质量标准提 供科学依据。 实验研究表明：9 月1 5 日采用条播栽培夏枯草；施肥以基肥为主，使用充 足的农家肥，促茎期、发枝期使用适量的氮肥，促花期追施适量的钾肥和磷 肥：6 月2 0 日前后采收果穗，5 月3 1 日左右采收茎叶，夏枯草的产量最高、质 量最优。 质量研究表明：夏枯草含水量以不得超过9 9 ，总灰分不得高于8 7 ， 酸不溶性灰分不得高于0 5 1 ，冷浸法水溶性浸出物量不得低于1 5 4 ，7 0 乙醇浸出物量不得低于1 5 8 ，齐墩果酸含量不低于0 4 ，熊果酸含量不 低于1 2 o 。 关键词：夏枯草，g a p ，关键技术，质量 乎价。 s t u d yo i ls o m ek e yt e c h n o l o g yo f g a p p r u n e l l av u g a f i s l a n dq u a l i t ya s s e s s p o s t g r a d u a t e ：l u om u h e a d v i s o r ：p r o f e s s o rz h o ur i b a o ( r i u n a nu n i v e r s i t yo ft c m ，d e p a r t m e n tp h a r m a c yc h a n g s h a4 1 0 0 0 4 ) a b s t r a c t t h et r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i d n ep m n e h av u l g a f i so r i g i n a t e si nd r i e dc o b so f p r u n e l l av u g a r i s 毛。i ti si sc o l di nn a t u r e ，a n dh a st h ee f f e c t so fc l e a r i n gl i v e r , c l e a r i n gv i s i o n ，r e l i e v i n gc o n g e s t i o n ，l e s s e n i n gt h es w o l l e na r e a , s t o p p i n gp a i n t h e p m n e u av u l g a r i si st h et r a d i t i o n a lm e d i c i n ei nt h ef u l ls c a l ei nh u n a n t h ep r o d u c to ft h ep r u n e l l av t t l g a r i si sb e c o m i n gs t a n d a r da n di n t e r s i n ew i t ht h e s t e p so nt h em o d e r i z a t i o ng o i n go n n o w y 谤a n gc i t yi st h ed e m o n s t r a t i n g b a s eo f g a ps t u d y i n gs t a n d a r d i z e dp l a n t i n ga p p r o v e db yt h em i n i s t r yo fs c i e n c ea n d t e c h n o l o g yd e p a r t m e n t a tp r e s e n t ，s t u d yo nc u l t i v a t i n ga n db r e e d i n gi sf e wa b o u tp r u n e l l av u l g a r i s ，a n d d o e sn o th a v et h es t a n d a r do p e r a t i o np r a c t i c e ( s o p ) t h ee x p e r i m e n t sr e f e r r i n gt o t h eh a b i t a t 拄a 盛童i o 珏簇t e c h n i c a le x p e r i e n c ea n d t h er e s e a r c ho fs t a n d a r d i z e d c u l t i v a t i o nf o ro t h e rh e r b ss t u d yo ns e v e r a lk e yc u l t i v a t i o n t e c h n o l o g i e sa n d c o m b i n i n gp r o d u c t i o na n dq u a l i t ya n a l y s i st od e t e r m i n et h eb e s tp l a n t i n gt i m e ， p l a n t i n gm e t h o d s ，f e r t i l i z a t i o nm e t h o d s ，h a r v e s tt i m e ，t od r a wu par e a s o n a b l eg a p p r o g r a m ；a n dm e a s u r i n gm o i s t u r ec o n t e n t ，a s ha n ds o u ri n s o l u b l ea s hc o n t e n ta n d o o z e sc o n t e n tf o rq u a l i t ye v a l u a t i o n ，t od r a wu pq u a l i t ys t a n d a r d s 。 e x p e r i m e n t a ls t u d i e sh a v es h o w n ：o ns e p t e m b e r1 5 ，b yu s i n g & f i l i n gc u l t i v a t i o n ， b a s ef e r t i l i z e rp r i m a r i l y , s u f f i c i e n tf a r mm a n u r ed u r i n gt h es t e mt i m e ，t h er i g h t a m o u n tn i t r o g e n o u sf e r t i l i z e rd u r i n gt h ef l o w e r i n gs e a s o n ，t h er i g h ta m o u n t p o t a s s i u mf e r t i l i z e ra n dt h ep h o s p h a t ef e r t i l i z e r , a n dh a r v e s t i n gc o bo nj u n e2 0 ， s t e m sa n dl e a v e so nm a y3 1 ，t h eo u t p u to ft h ep r u n e l l av u l g a r i si st h eh i g h e s ta n d t h eq u a l i t yi st h eb e s t q u a l i t a t i v er e s e a r c hs h o w s ：w a t e rc o n t e n ti sn om o r et h a n1 0 ，o ft h et o t a la s h c o n t e n ts h o u l dn o te x c e e d9 9 s o u ri n s o l u b l ea s hc o n t e n ts h o u l dn o te x c e e d 1 6 ，t h ec o l d w a t e r - s o l u b i l i t y o o z e ss h o u l db eh i g h e r t h a n 1 5 a ， 7 0 e t h y l a l c o h o lo o z es h o u l dn o tb el o w e r t h a n1 5 8 w h i c ha r es u i t a b l e k e y w o r d sp r u n e l l av u l g a r i s ，g a p , k e yt e c h n o l o g y , q u a l i t ya s s e s s 写言 中药耪夏枯草来溅于唇形祷( l a b i a t a e ) 夏枯草属( p r u n e l l a ) 蕴物夏 枯草p r u n e l l av u g a r i sl 的干燥果稳。性味苦辛寒，具有潦肝明瞬，消肿 散结之功效。用于目赤肿痛、目珠夜痛、豢明流泪、头痛眩晕、瘰疬、瘿瘤、 乳痈肿痛8 一。 中药糖夏枯摹最早记载于诤农本草经，列为下品。朱震亨谓：“夏曩 后即桔故有此名。”“1 夏枯草野生资源分布广泛，全国大部分地区均有分 布，主要分布于湖南、江苏、安徽等省。其中湖南主要分布在益阳、常德、 岳阳、测阳、湘西及自治州、张家界等地。 夏枯草为常惩中药，近年来由于其在蕊病毒方西穗特殊疗效，弱葵舞发璐 保健品也备受人们的亲睐。野生资源已不能满足临床需要及市场需求，而且 野生资源由于产地和采收时间等原因，无法控制夏枯草的质量。虽然以湖南 省菔阳市为主酌夏枯草规范化种植基地逐渐建立起来。但由于栽培历史不久， 栽培过程孛还存在译多问题：一、栽培精采鑫于野生种，龄表霄纯良盼栽培茹 赞，有待于进一步舞展夏枯草优良嚣种的逸育研究工作；二、栽培、采收加工 技术不规范；三、农药残留、有害重金属厦微生物超标；四、质量不稳定或低 劣；五、缺乏龙头企业带动，产业化程度低；六、缺乏品牌意识。这些严重的影 镌了夏枯草的产量及品质，为生产蠢高产、抗震的夏枯草，夏枯草的g a p 研究 势在必行。 第一章夏枯草的g a p 研究 基地简介： 湖南省是夏枯草的主要产区之一，益阳市现在已经成为国家科技部夏枯 草g a p 规范化种植和研究基地乖湖南省规范化种植示范基地，为最大栽培基 地。湖南省益阳市夏枯草规范化栽培基地，位于湘中偏北，洞庭湖西南，资 水中下游，沅水，澧水尾闾，属于雪峰山余脉和湘中丘陵向洞庭湖平原过渡 的倾斜地面带。地理位置东经10 8 。3 77 1 1 2 0 157 ，北纬2 6 0 3 8 ，2 8 0 1 2 ，属亚 热带大陆季风性温润气候，并随着3 级台阶的下降而有规律地形成不同地域 性气候，全年具有气温总体偏高，冬暖夏凉明显，降水年年偏丰，日照普遍 偏少，春寒阴雨突出等特征，年平均气温1 6 2 1 6 9 。c ，日照1 3 7 4 1 7 7 6 小 时，无霜期2 6 2 2 7 6 天，年雨日1 3 4 17 2 天，年降雨量1 23 7 i 6 9 1 2 毫i n 该市土地质量好，土壤肥沃，多属板页岩风化而成，呈酸性，以砂壤土为主， 耕作层深厚疏松，有机质含量丰富，适合夏枯草生长。夏枯草规范化栽培基地 空气、土壤、农田灌溉水等基地环境质量经过技术检测均达到中华人民共和 国对外贸易经济合作部( ( 药用植物以及制剂进出口绿色行业标准对应标准： 达到绿色食品农田灌溉才顺标准g b 5 0 8 4 - 1 9 9 2 ，绿色食品( ( 土壤环境质量 标准g b l 5 6 1 8 1 9 9 5 的二级标准，绿色食品( 环境空气质量标准) ) g b 3 0 9 5 1 9 9 6 的二级标准，( ( 大气环境质量标准g b 3 0 9 5 - 1 9 8 2 ，( ( 大气污染物最高允许浓度 标准g b 9 13 7 1 9 8 8 ，国家地面水环境质量标准g b 3 8 3 8 1 9 8 8 。 第一带夏枯草不同播种方法的研究 1 材料与方法 1 1 选地螫地 选择地势高爽，阳光充足，排水畅通，虫地有* w l - 含量丰富的砂壤土。 在播种或移栽前，每6 6 6 7m 2 施腐熟厩肥2 0 0 0 k g 。深耕土壤2 5 c mv x _ k ，耙细 鏊乎，作高娃，畦宽1 2 m ，畦高3 0 c m ，严格儆列畦沟，腰沟，田头沟三沟配 套，沟宽3 0 c m 。 1 2 选秘 选择分技多，果穗长，无病虫害的健壮母林，加强管理。当夏枯草花穗 变黄褐色时，撼下果穗，在疆垫土旗子，抖下赞子，去埝杂震，选取鬏觳饱 满，黄褐色戴褐色的种子。 l ，3 实验谈诗 选择生态环境条件相同的12 块地，随机分成4 组，每组3 块地， 在掭种期和四闻管理胡同的条传下，采用不同播种方法种植蔑枯草， 根据药材产量选择最佳播种雳法见表1 表4 表1 设计方案1 ( 条播) ( 胪3 ) 播种时问 3 8 j - 5 ) 6 播种面积 6 6 7r n 2 6 6 7 m 2 6 6 7 m 。 沟幅 7 1 0c m 7 一1 0c 越7 1 0c m 型! ! ! 篓 i ! 兰一。竺三一 表2 设计方案2 ( 点播) ( n = 3 ) 播种面积 6 6 ，7 0 6 6 ，7 t a 6 6 7 m 熊! ! ! ! 垡! 竺 ! ! ! ! 堕! ! 一型竺旦塑一 袭3 设计方案3 ( 撩撬)辆锶) 1 。4 播辩按第3 矮蜜验设计搽锋。 l 。4 。l 絷播在整好的地上，按实验设计旁嶷l 霞沟，施人畜龚水赡，每6 6 6 m 2 用种蚤5 0 0 9 ，与火土灰5 0 一l o o k g 和适量的人畜粪水拌成种予灰，均匀撒 在祷释海惫，最后盖欠土灰，汉不见爨子势度。 1 4 2 点播在整好的地上，按实验设计方案2 挖浅穴，穴内土松、底平，深 约6 c m ，施人畜粪水艨，每6 6 6 7n 1 2 用种毂3 0 0 9 ，与火土灰5 0 1 0 0 k g 和邈 量酌人富粪水辩成赞予灰，均每缀在穴内，最君盖灾点灰，泼幂霓静子灰楚 度。经常浇水，保持点壤滋润。 1 。4 ，3 撒瓣在整好斡楚左，施人富粪水髫，每6 6 6 70 髑神3 0 0 9 ，与天土炭 5 0 1 0 0 k g 和适量的人富粪承捧成辩子灰，均瓤撒整好的地点，最蘑菇火土旋 泼不霓辩予灰秀疫。缀常浇拳，保持土壤滋澜。 1 4 4 育苗移栽法选土层松厚、3 - 质肥沃、有机质含量较高，排渍条件良好， 管理方馒媳媳块作苗床。在播秘髓，每6 6 6 ，? 费旄腐热魏勰3 0 0 0 k g 。深耕土 壤2 5 c m 以上，耙纽鏊乎，谗高囔，蛙宽1 2 m ，畦高3 0 c m ，髑拳缎覆乎秣菇 紧后播簿。鹰6 6 6 ，7 叠鼹神量l k g ，与l 火点廒2 0 0 3 0 0 k g 淞适量媳人畜粪水 拌成种子灰，均匀撒在畦瀚上，蘸火土灰以不见种子灰为度。最后厢面上均 匀覆盖一层薄薄的稻草，洒水于稻草上面使稻草湿润。出苗前，如遇于旱经 常洒水于稻草上面，保持稻草湿澜，以剃虫蓊。待夏黏摹苗高1 0 c m 左右时进 行移栽。按实验设计方案4 穴栽，每穴栽苗2 3 株，用细土压紧，浇透水。 1 。5 霹耀管理 1 5 1匀诸 幼苗过于稠蜜楚适囊匀蔷。 1 5 2 中耕除草 夏枯草在生长前期，因葛较联小，加之春雨较多、气温适宜、杂草容易 生长，因此每隔一定时间后，中耕除草一次，一直到苗封行，封行詹只除草， 不中耕。中耕宜浅，勿饬根。 1 5 3 追鹣 夏枯草根系发达，发棵较多，生育期短，需肥量较大。施肥时以基肥为 主，结合适肥。施蒡巴默有机船秀主，适时施麓化学舞巴粹，追肥主要分为三个 时期，分别为促茎肥、发枝肥和促花肥。 1 。5 。莲灌溉 夏枯草分株繁殖移栽后，要保持土壤湿润，以利缓留和发根，缓苗以后 少浇拳。遣黟后也要及对浇水，跌烬证夏枯草正常生长。灌水方法舞浇灌， 灌溉量视降雨量并口土地湿度而定，一般田间土壤含水量控制在2 0 左右。否则 撼造成烂报，如含水量过少，及时灌水。夏枯草盎苗期，灌溉方法只能用洒 浇，以防止种子露出地面。梅雨季节注意清理沟系，以便及时排水防渍。 1 + s 。5 病虫害防治 夏枯草病害主要是圆星病、褐斑病；虫害童要是菜青溆、5 - 6 月夏枯草易 发生病虫害，这段时间加强防治j 爵施，适时清洁园地，发病前喷施适量的彳氐毒 农药。 。6 采糊茸王 选晴天，露水干后分期分批剪下呈棕红色的果穗。除去杂质，及时晒干 2 结柒 采用五点法( 甥周和中央) 各取6 林共3 0 椿样品，剪下呈棕红色的果穗。 除去杂质，及时晒干称出重量，以此测定各个试验区干燥蔑枯草果穗的产量， 结果( 见表5 ) 表5 不霆援釉方法蔓旗蕈秘声蠢辞3 由表5 可知：不阏播秸方法中等密度栽培夏枯草时产量最高，且贫条播 点 播 檄播 育苗移栽，最高产量分别为1 9 7 、1 9 3 、1 8 9 、1 6 3k g 6 6 7 砰。 3 讨论 夏枯草为向阳、需肥羹大植物。光照强度影响蔑枯草的产量和品质；种植 密度过大，不利于夏枯草获得光照，种植过密度小，则不利于其充分利用阳光， 适宜密度既可充分利用阳光，也可充分利用水肥。从几种播种方法可知中等密 度夏耩草秘产量最离，条播按行鼹3 0c n l 、湾幅1 0c l n 接种产量最筠，为1 9 7 k g 6 6 。7m 2 ：点播按行株距2 5c n l 2 5e 撼播种产量最蕊，势1 9 3k g 6 6 。7 疗； 撒播户量最低，为1 6 3k g 6 6 7m 2 ；育苗移栽按行株距2 5c m 2 5c m 播种 产量最高，为1 8 。9k g 6 6 7m 2 ；辙播不便于巾耕除草和施肥育苗移栽费时 费力，泰播和点播崔喊鸯办最便于申耩除辇静施肥。由姥可凳条撂优于其撼 播种方法，最德行距为3 0g m 、沟幅1 0c l l l 。沭网地方光照强度不一棒，水肥夺 传也不一样，秀稂壹： 逸瓢麓竞照和拳鼹，蔑潼鲢密度要霉遗剃寅。跨度赛、向 阳、水肥菇的地方种植密度应稍火；纬度低、背阳、水肥好的地方种植密度 威梢小。 耪料等蠢法 1 1 选地整地 第二节夏稽萆不阍播种期豹研究 港“夏枯草幂藏疆释方法褥研究”选魏整地磺。 i ，2 选种 同“笈枯草不慝播辨方法酶研究”选种蠛； 1 3 实验谈计 选择生态嚣境条箨趣露转1 8 决地，随瓠分成6 至嚣，每纽3 个重复， 在播种期和瓣间管理相同的条4 昝- - f ，爨验从9 月1 ：5 秘曩第二年的3 月 15 日共设计5 个播种时间播种植夏枯草，根据采收产量确定最佳播种时 麓。霓表6 表6 夏糖蕈播种射勰设计 秩络 奏播 播种时间 9 。1 5 1 1 1 5 2 t 5 2 2 53 5 3 15 h_ 一一_ m m m 一 5 l 备注：每小区面积l8 5 m 1 2 m = 2 2 2m 2 1 4 播种 播种时间按表6 实验设计，播种方法采用条播，在整好的地上，按行距3 0 c m ，沟幅7 1 0c ：m 开沟，施人畜粪水后，每6 6 6 7 m 2 亩用种5 0 0 9 ，与火土灰 5 0 1 o o k g 和适量的人畜粪水拌成种子灰，均匀撒在沟内，最后盖火土灰以不 见种子灰为度，浇透水。 1 5 田间管理 同“夏枯草不同播种方法的研究”田问管理项。 1 6 采收加工 同“夏枯草不同播种方法的研究”采收加工项。 2 结果 每小区选出3 0 株，选晴天，露水干后分期分批剪下呈棕红色的果穗除 去杂质，及时晒干。称出各个试验组干燥夏枯草的重量，结果( 见表7 ) 表7 不同播种时间夏枯草的产量 ( n - - a ) 播种时间 第一次采摘 第二次采摘( k g ) 第三次采摘( k g ) 合计 ( k g )( k g ) l 9 1 5 6 1l2 84 62 3 5 21 1 155 11 2 24 82 2 1 32 1 54 4l0 56 72 1 7 4 2 2 54 2 9 87 4 2 1 4 53 5 3 3 8 9 7 82 0 o 6 3 152 58 78 01 9 2 由表7 知9 月1 5 日至第二年3 月1 5 日各个不同播种时间的平均总产量 分别为23 5 、2 2 1 、2 1 7 、2 1 4 、2 0 0 、1 9 2k g ，9 月15 日栽培的最高。 3 讨论 耐寒性强，生长期长或种子需休眠的植物黛秋播夏枯草植株在o 以上 缝生长，莠黥忍受霜冻，在一1 5 c 以雨巍鑫然越冬，磊耐寒埴物，宜秋褡。双 舞睑结果可知：各个播种期种植夏枯草的产量1 号 2 号 3 号 4 号 5 号 6 号， 秘9 月中鸯秘植馥产量最高，舞- i - 秋播占地时阉长，土地复赞螽数底，蚕裁于 土地的充分利用，同时秋播田间管理费时费力多，投入成本大于春播，敌生 产实践中往往采凰奏播，有利于土地穗充分利鼹争降底成本。春播宣旱。不曩 的地方气候不同，同一时间温度不一样，栽培夏枯草播种时间的选择还应根据 栽培基地的气候条件，并结合当地的生产习惯确定。 第三节夏枯草施肥实验研究 1 材料与方法 1 1 选施整地 同“夏枯草不问播种方法的研究”选地整地项。 i 。2 选种 同“夏枯草不同播种方法的研究”选种项 1 + 3 播种 采用奈播。在整好的地上，按沟心距2 7 c m 开横沟，深约6 c m ，播幅1 0 c m ， 施人畜粪水詹，每6 6 6 。7 m 2 用种量5 0 0 9 ，与火土灰5 0 l o o k g 和适量的人畜粪 水棒成种子灰，均匀撒在沟内，最屉矗火土灰以不见种子发为度。经常浇水， 保持土壤湿润。1 4 18 天出苗。 1 4 实验设诗 田问设计1 2 个试验小区，4 个小区为一组，每组设置3 个重复组，前期 施相同基肥，后期追加不同的肥料种类( 见表8 ) ，计算单位面积果穗干品的产 量，并采用h p l c 法测定施用不同的肥料种类的夏枯草果穗中齐墩果酸和熊果 酸含量。以此确定不同时期夏枯草施肥的种类及其重量。 表8 施肥试验方案 l ( k g 亩) 2 ( k g 亩)3 ( k g 亩) 4 ( k g 亩) 处理a + b 处理 b 处理 基肥腐熟厩肥2 0 0 0腐熟厩肥20 0 0 腐熟厩肥2 0 0 0腐熟厩肥2 0 0 0 3 月3 0 日 人畜粪尿50 0人畜粪尿50 0 人畜粪尿5 0 0人畜粪尿5 0 0 “已茎肥) 尿素1 5尿素1 5 尿素1 5尿素1 5 4 月2 5 日人畜粪尿10 0 0人畜粪尿1 0 0 0 人畜粪尿10 0 0人畜粪尿1 0 0 0 泼枝肥)尿素1 0尿素1 0 尿素l o尿素10 5 月2 5 日尿素5尿素5 尿素5尿素5 ( 促花肥) 硫酸钾15过磷酸钙5 0过磷酸钙5 0 硫酸钾1 5 n2 0 2 52 0 2 52 0 2 52 0 2 5 p 2 0 j3 7 51 4 251 4 2 53 7 5 k 2 01 4 251 4 2 56 7 56 7 5 注：腐熟厩肥、人畜粪尿为农户自制发酵腐熟而得化学肥料分别从当地化肥公司购得 1 5 田间管理 夏枯草根系发达，发棵较多，生育期短，需肥量较大。施肥时以基肥为 主，结合施用追肥。施肥应以有机肥为主，适时施用化学肥料，追肥主要分 为三个时期，分别为促茎肥、发枝肥和促花肥( 方案见表8 ) 夏枯草分株繁殖 移栽后，要保持土壤湿润，以利缓苗和发根，缓苗以后少浇水。追肥后也要 及时浇水，以保证夏枯草正常生长。其它田间管理方法同“夏枯草不同播种 方法的研究”。 1 6 采收加工 同夏枯草不同播种方法的研究”采收加工项。 2 实验与结果 2 1 产量测定及结果 9 每小区选出3 0 株，选晴天，露水干后分期分批剪下呈棕红色的果穗。除 去杂质，及时晒干。称重，计算出出各个试验区干燥夏枯草的重量，结果( 见 表1 0 ) 2 2 化学成分测定及结果 2 2 1 仪器、试剂 仪器：高效液相色谱仪( 美国w a s t e r s 公司，检测器w a s t e r s 2 4 7 8 ) ， d h g 一9 0 3 0 a 型电热恒温鼓风干燥箱( 上海精密实验设备有限公司) ，v a b l 0 4 一n 电子天平( 梅特勒拖力多有限公司) 。 试剂：乙醚、石油醚、冰乙酸、二乙胺、甲醇均为a r 级，甲醇液为相色 谱醇( 湖南化工研究院) 。 对照品：齐墩果酸购于中国药品生物捡定所，熊果酸购于德国s t e i n h e i m 公司。 2 2 2 实验与结果 2 2 2 1 色谱条件 o d s 柱c 1 85 u ( 2 5 0 x4 6 舢) ，流动相：甲醇：水：冰乙酸：二乙胺( 8 5 ：1 5 ：o 4 ：0 2 ) ，流速：0 8 m l m i n ，检测波长2 13 n m ，柱温2 5 c 。 2 2 2 2 样品溶液的制备 精密称取1 0 5o c 条件下干燥恒重的夏枯草粉末( 过4 0 目) 2 0 0 0 9 ，用滤 纸包好，置索氏提取器中，另精密量取6 0 m l 乙醚于1 0 0 m l 圆底烧瓶中，装好 装置，5 0 6 0 。c 水浴回流2 h ；回收乙醚，残渣加2 0 r a l 石油醚分两次冲洗，倒 去石油醚，加2 0 m l 甲醇溶解残渣，转移至2 5 m l 容量瓶中定容成2 5 m l 溶液， 过0 4 5 1 a m 微孔滤膜，滤液保持在4 。c 冰箱中即为样品制备液。 2 2 2 3 对照品溶液的配置 媾密称 驭于爆恒蚤的棼准品齐墩果酸4 。7 5 m g ，熬暴酸1 6 。4 0 r a g ，加5 0 m l 色谱甲醇配成对照品溶液，溶液含齐墩果酸0 0 9 5 m g m l ，熊果酸0 3 2 8 m g m l 。 从h p l c 圆谱可知：齐墩果酸的儇馨时间约为4 3 分赞，熊暴酸约为4 5 分钟。 2 2 2 4 标准曲线的绘制 精密吸取上述对照品溶液1 。0 、2 。0 、4 。0 、6 。0 、8 。o 肛在2 2 。2 。1 色谱 条件下进样，以峰面积值为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线( 见图1 ， 图2 ) 回归方程分别为齐墩果酸：y = 3 9 7 1 0 2 x 一8 6x1 0 3r = 0 9 9 9 7 7 4 ，熊果 酸：y = 4 0 1 1 02 x 一2 0 1 1 0 4r = o 9 9 9 9 2 2 ，其中y 为峰褥积积分值，x 为相对 应的微克数，回归方程及r 值表明齐墩果酸在9 5 盹一7 6 0 p g 具有良好的线性 荧系，熊暴酸在3 2 8 驻g 一2 6 2 4 g 盼英有良好戆线栏关系。 网1 齐墩果酸标准曲线图 2 。2 。2 5 重藐性试验 图2 靛秉藏标准曲线圈 精密称取同一样品5 份，每份2 o o g ，进行5 次平行实验，实验结果计算 谨齐墩果酸彝蕊果酸的l i s d 位分另i j 为2 。0 9 ，0 。5 8 ，表明本法重现性良好。 2 2 2 6 稳定性试验 精密吸取已知的同一样品溶液在0 、l 、2 、4 、6 h 分别选样i o p l 得5 次， 奏验结果计算得齐墩采酸和熊果酸的r s d 值分别为：0 8 0 ，1 2 2 4 篱，表孵样 品溶液稳定性良好。 2 。2 。2 。7 精密度试验 取对照榉品溶液选样的lo l _ t l ，重复进样5 次，实验结暴诗算得齐墩暴酸 和熊果酸的r s d 值分别为：0 7 1 ，0 6 6 表明本实验精密性良好。 2 2 2 8 回收率试验 精密称取已知含t - e j 麓一夏枯草祥菇1 0 0g 分蒡 j 加入对照品溶液( 含齐 墩果酸和熊暴酸分别隽：0 8 m g m l ，3 。3 m g m 1 ) 1 2 。0 、1 2 。5 、1 3 。0 、1 3 。5 、1 4 。o m l 做5 次平行实验，测得结装见表9 表9 回收率测定结粜 有效成序号 样品量( r a g )加入量 测出薰( r a g )回收率 平均回收 c v ( ) 分泌)( 篙)零鳓 齐墩果 酸 熊暴 酸 i 1 0 179 6 01 9 7 91 0 0 0 2t 0 ，l71 0 。0 02 0 3 l1 0 t 。4 31 0 1 71 0 4 02 0 7 31 0 1 61 甜00 8 0 410 171 0 8 02 1 13i 0 2 0 51 0 1 7l l 。2 02 1 4 21 0 0 ，0 13 0 5 63 9 5 07 0 0 69 9 9 23 0 5 64 1 2 57 1 7 59 9 s 33 0 5 62 9 07 3 ，1 29 9 ，2卵。5 80 3 5 43 0 5 64 4 5 57 4 7 89 9 2 53 0 。5 6毒6 。2 e7 6 6 6空9 8 2 2 2 9 样品测定岛结果 精密吸取备样品溶液lo g l ，在2 2 2 1 色谱条俘下进样，高效液相色谱 缝( 觅耀3 ) ，拣据峰爨：织计算盘搬对百分含量。霓袁1 0 追施彝端追施帮怨_ 和磷肥遣施磷肥锯肥和瞵躲空鸯 图3 促花期追施不同肥料滚相色谱图 表 o 施艚对夏枯革产薰瓤有效成分禽量的彰晌 ( n = 1 2 ) 3 分橱与讨论 对表10 产量进行2 2 析因分析，菇结果见表1 1 表1 12 2 析医产豢分析 变异来源 s su) a sfp 值 总变异 处理间 交互作用 楚理 b 处理 误差 6622 3 60 19 4 14 l8 。5 24 0 4 。l 2 19 6 8 20 2 1 4 20 0 6 4 1 4 1 8 5 2 4 0 4 1 2 l9 6 8 255 4 7 8 6 5 。5 5 9 。4 8 6 0 0 5 0 0 5 0 。0 5 没鹰显著性意义，其他均有显著挂意义。 5 个不同采收时间果穗中熊果酸含量排序见表1 4 。 。一一一童! ! ! 尘至旦墨：! 笺盟塑：墨堡生缝墨墼壁查塑墼壁壁 纽名 6 蠢2 0 日6 胃l0 霹6 轰3 0 强5 舅3 0 霹 5 月z ”鞫 垫墨! !l i 。_ 卫一 m s 误差= m s 组内一( n ；- 1 ) s t2 ( 15 5 ) = o 0 0 1 2 q 一( x 。一x o 【m s 谥差( 1 3 + 1 3 ) t 2 7 2 5 个不同采收时间果穗中熊果酸样本均数两两比较见表1 5 对比纽差数级数q 位歪垡 r 但 a 与bx 一x 。 a p = o 0 5p - 0 0 1 1501 8 56 446 5 61 40 1 一9 + 7 u 0 。0 i 0 。0 5 0 。0 5 0 0 5 0 0 5 0 。0 5 p o 0 5 没有显著性意义，其他均有显著性意义。 1 8 7 7 8 7 7 8 7 g 8 7 2 4 7 2 4 2 4 一 _ 4 5 4 4 5 4 5 4 4 4 j o o s t o 0 0 5 8 5 5 3 8 1 3 8 1 8 1 i 一 h 5 3 3 5 3 3 3 3 3 一 t ，5 9 u 7 5 5 3 5 5 1 9 v 4 o o o 2 7 一 + h s 4 3 4 2 o 3 l l 一 4 3 2 4 3 2 3 2 2 3 7 8 n ”5 9 l 5 5 6 3 1 8 4 1 6 2 3 0 o o e 8 o o o 一 s 4 3 5 。q 5 4 3 2 一 一 一 一 一 二 一 一 一2 2 2 3 3 4 一 一一一一一一一一 5 个不弱采收时溜茎叶串齐墩黎酸含量排序霓表t 6 。 表165 个不同采收时间茎叶中齐墩果酸样本均数排序 样本由大到小0 203 0 1600 1600 13 4 0 1 13 级名 5 月3 0 日s 月2o 日6 月10 日6 月20 目6 月3 0 日 编烈 12 345 m s 谥盖= m s 虹 = ( 1 l i - - 1 ) s i2 ( 1 5 5 ) = 0 。0 0 0 3 q = ( x 一x 。) 【m s 误差( 1 3 + 1 3 ) 2 1 1 t2 5 个不同采收时间茎叶中齐墩暴酸样本均数两两比较，见表1 7 。 表175 令袋收时闰茎静孛舞墩果蘸撵本秀秀垮数跑较列表 露池缀差数缎教莲蓬g 歪焦p 经 a 与bx 。一x 。 a p ；0 0 5p = 0 0 1 囝 1 5 0 0 905 9 004 656 14 0 0 1 1 40 0 594 5 905 3 3 4 77 0 。0 1 1 3 o 。0 433 4 3 03 + 8 8 5 。2 7 0 0 5 2 3 02 03 15 4 48 0 05 3 5 0 0 473 4 703 88 5 27 0 。0 5 垒! 二! ：! ! ! ! ：! ! i ：! ! ! ：堡一一垫羔l ap 0 0 5 没有照著牲意义，其他均有显著槛意义。 5 个不同采收时间茎叶中熊果酸舍量排序见表1 8 表1 生! 尘至曼墨堕堕堂董壁空熊墨熊堂查些墼壁鏖 一一一 气夏i i 磊_ _ 五蕊i 百，霸鬲_ i 丽f ：0 。5 0 3 褥本蠹大到小 ! ：! ! ! ：! ! ! 一! ：! ! ! ! ：! ! ! 一一二一 丽i 百i r i 1 。i 。丢 6 秀2 一6蠢305 3 0 52 0 0 e l霹 照名曩 瑶囊 e6 蠢l i6 囊z # 月 ，! ! ：! ! - 二二i _ 盖l m s 谖堇= m s 姐 = ( n i - 1 ) s t 2 ( 15 5 ) = 0 0 0 0 9 a 。( x ；一x ；) m s 遥盖( 1 3 + 1 3 ) 2 】“2 5 个不同采收时溺茎叶幸熊果酸祥本均数裁灏怼较，霓表1 9 - 1 9 畿1 9个采收时阊茎时巾熊粜酸样本鞭两均数比较鲫寰 p o 。0 5 没有显著褴意叉，其镪均有鼓舞慷意叉。 由表1 1 可知聂枯草孛有皴成分含量妁积累 逛英生长发育富一定的消瓣规 律，穰摄这一怒箨默含量秀缀塞禄，采没魏为撩垒标可绘盘英动态突纯藩残蹒， 见图8 强8擞横蕈齐墩果羧和赧暴黻禽羹动态变化捆绫稠 夏糖摹孛含霄多舞三萜类成分，双翥墩果酸和熊幕酸霹含蚤最蒸，炎 量，的蒜理研究表明夏轱草的有效成分为齐墩暴酸和熊装羧1 ，本舆 验汉务墩果酸和熊果酸的念璧作为评价褥漆。 螽表1 1 数撼分橱可知：6 月2 0e t 采收酶与其他4 个采牧时瓣皋收的蓑枯 2 0 草中有效成分含量有显著的差异性( p o 0 1 ) ，含量最商。由图8 可知：有 效成分含量在孛蠢材震枯草孛的积累随葜垒长发育呈瑰一定港长规律：夏糟 草果穗中有效成分齐墩果酸和熊果酸在5 月2 0 至6 月2 0 日呈增加趋势，且 在6 月初至6 月2 0e l 增加幅度较大，在6 冀2 0 霪达最灏，双后呈递减趋势； 而其茎叶中有效成分齐款果酸和熊果酸在5 月初至5 月3 0e l 呈增加趋势，5 晨3 0 霹速藏高，以后黑递减趋势，历代本革和2 0 0 0 版药典记载夏枯草 的采收期果穗在7 月半，莲叶在6 月；王海波订3 取苗圆夏枯草做质量评价时发现 爱牯草最佳采收期与历代本草扣2 0 0 0 版药典记载一致。本实验结暴与传 统采收期相比，两者均有提前夏枯草分布范潮广泛，历来以采收野艇夏枯草 入药。历代本革和20 0 0 版药典记载的夏枯草采收期均指野生麓枯草，规 范辱匕栽垮的夏枯草由于人工栽涪的精细管理，种子萌舞c - v - ，其生育期较野生夏 枯草提前，互申、下旬茧叶以全部枯萎，故人工栽培夏枯草较野生夏枯草采收 觏提雷。果穗和茎哼的最佳采牧霸藏分莠l l 在5 月底争6 篾2 0 霹左右 由表1 1 可知夏枯草果穗在6 月20 日采收有效成分含蚤最高，齐墩果酸为 0 。1 7 9 o ，熊基酸为0 。6 9 9 ；茎哼在5 莠3 0 瓣最高，齐墩暴酸秀0 。2 0 3 0 0 ，熊 果酸为o 8 5 0 。传统记载及2 0 0 0 版( 药典) ) 记载夏枯草药用部位为果穗， 逶违实验发烧，在各彝最佳采浚糍拳收时，茎咔较暴穗有效成分含量均高，秀 充分利用药用资源，夏枯草可全草用药，全草的最佳采收期有待进一步研究。 豺瓣与方滚 1 1 选地整地 第五节夏桔孳不同生育期的研究 同“不同播种方法的研究”选地整地项。 i 。2 选耱 露“不同播种方法的研究”选种项。 1 3 实验设计 实验小区的种植密度、栽种日期和其它试验田管理方法一致，暴穗采收 设计四令生育期( 始花期、盛花藏、来威熬期、成熟期) ，每个生育期各驭3 份样品。测定各令不阁生育期夏枯攀果穗样品申赛墩暴酸和熊果酸舍量。 1 4 播种 3 月8 日，采用条播，具体方法“不同播种方法的研究”条播项。 l + 5 田瀚管理 “不蕊磐秘方法的霹 究”霭溺管理矮。 l 。6 采收力口工 按实验设计采收，加工“不同播种方法的研究”加工项。 2 实验每结栗 2 。l 测定方法 按“夏枯草施肥实验研究”有效成分的测定方法测定高效液相色谱图见图 9 。 始花翻 盎熟期 成熟残 已菇授 2 2 结果 圉g 爱辖辇不嗣生育鞭采穑有效成分蔫效液稆色谱围 根据峰面积值计算出不同生育期夏枯草果穗有效成分含量见表2 0 表2 04 个不同生育期夏枯草粜穗柱毁成分含羹 齐敦果酸0 1 8 3 0 0 3 5 0 2 5 9 0 0 4 60 4 2 5 0 0 5 30 2 0 0 土0 0 3 1 熊果酸0 5 0 6 0 0 3 2 0 8 7 1 0 0 6 8 1 2 2 3 0 0 7 50 53 8 土0 0 4 2 3 分祈与讨论 根据表2 0 实验结果进行单因素方差分析。 4 个不同生育期果穗申齐墩果酸含量均数排序，见表2 1 。 重! ! ! 尘至旦生童塑墨登史壹燮墨璧鳖查望塑挂曼_ 一 组名成熟期盛藐裳 已桔期 始露期 m s 误差= m s 扭 = ( 3 - 1 ) s i2 ( 12 - 4 ) = o 0 0 1 8 a ：( x 。一x 。) m s 诞盖1 1 3 + 1 3 ) 2 】2 4 令琴霹生育裳暴穗申齐墩暴酸含量均数鼹涎比较见表2 2 ； 对比组差数 组数q 值g 丕焦 r 值 a 与bx a - x 。 a p - o 0 5 p = o 。0 1 堕望 塑鱼一一 i r 百面r 1 1 百r 下了r 一6 2 0 o 0 1 1 - 3 0 。2 2 5 3 9 。2 04 。0 4 5 。6 4 0 0 5 垒! 二! ! ：! ! ! ! ! ：! ! ：! ! j 立l 坐 ap 0 05 没有显著性意义，其他均有是著性意叉。 对4 个不问生育期果稳中熊暴酸含量均数排序，见表23 。 表2 34 个不同生育鞘果穗中熊幕酸样本均数排序 赫s 误差= m s 扭 = ( 3 - 1 ) s ；2 ( 12 - 4 ) = o 0 0 1 8 q = ( x 一x 。) fm s 谖盖( 1 3 + 1 3 ) 2 】“2 对4 个不同生育期果穗中熊暴酸样本两两均数比较，见表2 4 。 表2 44 个不问生育期果穗中熊果酸样本两两均数比较列袭 p o 05 没有漫著