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河河 南南 科科 技技 大大 学学 高等教育自学考试毕业论文高等教育自学考试毕业论文 题目题目三种肺炎支原体检测法三种肺炎支原体检测法 的临床应用分析的临床应用分析 地地 市市: 学学 校校: 准考证号准考证号: 考生姓名考生姓名: 指导老师指导老师: 年年 月月 日日 河南科技大学高等教育自学考试办公室 - 2 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 三种肺炎支原体检测法的临床应用分析三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 摘摘 要要 目的目的 探讨肺炎支原体（探讨肺炎支原体（MPMP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反 应（应（PCRPCR）法和血清）法和血清 MPMP 被动凝集法（被动凝集法（MP-AbMP-Ab）等方法在儿童）等方法在儿童 MPMP 感染诊断治疗过感染诊断治疗过 程中的敏感性方法程中的敏感性方法 采用采用 3MP3MP 检测法对检测法对 362362 例临床拟诊呼吸道（非细菌性）感染例临床拟诊呼吸道（非细菌性）感染 的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和 PCRPCR，同时取血清做，同时取血清做 MP-AbMP-Ab 检测，对检测，对 3 3 种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进 行回顾性分析。结果行回顾性分析。结果 回顾临床病例诊断回顾临床病例诊断 MPMP 感染患儿感染患儿 152152 例。例。MPMP 快速培养法检快速培养法检 出阳性出阳性 7878 例，阳性率为例，阳性率为 51.3%51.3%，病程为（，病程为（4.52.64.52.6）天；）天；PCRPCR 法检测出阳性法检测出阳性 103103 例，阳性率为例，阳性率为 67.8%67.8%，病程为（，病程为（6.23.56.23.5）天；）天；MP-AbMP-Ab 法检测出阳性法检测出阳性 127127 例，例， 阳性率阳性率 83.5%83.5%，病程（，病程（8.14.58.14.5）天。结论）天。结论 3 3 种种 MPMP 检测法的敏感性与病程有相检测法的敏感性与病程有相 关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。 关键词关键词 肺炎支原体，快速培养法，咽拭子聚合酶链反应，血清抗体，配对肺炎支原体，快速培养法，咽拭子聚合酶链反应，血清抗体，配对 研究研究 - 3 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 目目 录录 前前 言言.5 第一章第一章 文献综述文献综述.6 1.1 肺炎支原体的定义.6 1.2 肺炎支原体的发病机制.6 1.3 肺炎支原体的分类.6 1.4 肺炎支原体的临床表现.6 1.5 肺炎支原体的临床诊断.7 1.6 肺炎支原体的实验室检查.7 第二章第二章 材料和方法材料和方法.8 2.1 样本.8 2.2 方法概述.8 2.3 临床诊断 MP 感染的诊断标准.8 2.4 实验方法.9 2.5 统计学方法.9 第三章第三章 结果结果.10 第四章第四章 讨论讨论.11 - 4 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 结结 论论.12 参考文献参考文献.12 致致 谢谢.13 附录附录.14 。 - 5 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 前前 言言 肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）是婴幼儿、青少年急道感染的 主要病原体之，临床上表现为呼吸道感染综合征，其中约 3%10%可发展为支 原体肺炎。但只根据临床症状很难鉴别由 MP 或病毒、细菌等病原体引起的儿童 呼吸道感染，给临床治疗带来一定的困难。笔者采用 3 种 MP 检测法对 362 例临 床拟诊为呼吸道（非细菌性）感染患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，通 过病例回顾来探索对支原体肺炎敏感的实验室诊断方法，以协助临床准确做出 诊治。 - 6 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 第一章第一章 文献综述文献综述 1.1 肺炎支原体的定义 小儿肺炎支原体肺炎多见于 515 岁儿童，婴幼儿患病常表现为毛细支气管 炎。多数为亚急性起病，发热无定型，或体温正常，咳嗽较重，初期为刺激性 干咳，常有咽痛，头痛等症状。X 线改变明显，多为单侧病变，也可见双侧病 变，以下叶为多见，有时病灶呈游走性，少数呈大叶性阴影；病程 23 周不等， X 线阴影完全消失比症状消退更延长 23 周之久，偶有延长至 6 周者。 1.2 肺炎支原体的发病机制 肺炎支原体肺炎（Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，MPP）的发病机制 仍不十分清楚，目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP 直接侵入和免疫学发病机 制等学说，其中免疫调节异常在 MPP 的发生发展中可能起重要作用 1.3 肺炎支原体的临床表现 1. 多数为亚急性起病，发热无定型，或体温正常，咳嗽较重，初期为刺激性干 咳，常有咽痛，头痛等症状。 2. 可出现多系统多器官的损害，皮肤粘膜表现为麻疹样或猩红热样皮疹；偶见 非特异性肌痛和游走性关节痛；也有表现心血管系统、神经系统损害、血尿及 溶血性贫血等。 3. 全身症状比胸部体征明显。体检肺部体征不明显，偶有呼吸音稍低及少许干 湿罗音者 1.4 肺炎支原体的临床诊断 病原学诊断 - 7 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 肺炎支原体快速鉴定培养法优于被动凝集法，在肺炎支原体肺炎感染的早 期可提供重要的依据，可做为临床诊断 MP 感染的优先试验8；气管肺泡灌洗 液 MP-DNA 测定不仅能诊断 MP 感染,且支气管肺泡灌洗术可促进呼吸道症状的改 善及体征恢复，且通过纤维支气管镜收集支气管肺泡灌洗液 MP-DNA，痰液 MP- DNA 及血清 MP 抗体检测阳性率没有差异。CRP 的检测是肺炎病原体的辅助诊断 方法，一定程度可区分细菌性肺炎和支原体肺炎。聚合酶链反应(PCR)技术检测 MP 具有可靠、特异性高的特点，逐渐成为早期特异诊断的有力武器。 1.5 肺炎支原体的实验室检查 急性期 MPP 患儿血清 hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG 明显升高，IgA 明显降低；而 恢复期 hs-CR、IgG 仍然较高，而 IgM 和 IgA 均没有明显变化，补体 C3、C4 在 恢复期内也没有明显变化，因此血清 C-反应蛋白、免疫球蛋白和血清补体的监 测对诊断急性期或恢复期 MPP 有重要意义。MP-IgM 和冷凝集试验同时检测可提 高小儿支原体肺炎实验诊断的准确率；支原体肺炎患儿外周血白细胞大多正常 占 80%，中性粒细胞增高占 61%；65.6%患儿 C-反应蛋白增高；53.6%患儿血沉 增快；58.4%患儿心肌酶谱增高；24.0%患儿肝酶增高；16.8%患儿尿酸增高。5 流行病学特点及进展 MP 肺炎发生率约为 22.3%，912 岁感染率最低,36 岁最高,1012 月是 发病高峰月,小儿支原休肺炎发病率有所上升,发病年龄有趋小倾向,秋冬季发病 率高,肺炎支原体只要通过呼吸道进行传播，尤其发病率较高的地区，局部区域 每隔 3-5 年可发生一次肺炎支原体感染，每 2-6 年可发生一次大范围的肺炎支 原体感染，每次感染的时间都持续较长，有的感染可持续一年左右，因此，有 关部门一定要采取相应的预防措施，切断呼吸道飞沫传播途径对控制疾病发生 和流行具有重大意义。控制支原体感染的发生和流行。 - 8 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 第二章第二章 材料和方法材料和方法 2.1 样本 收集黄河中心医院检验科 2013 年 1 月 1 日8 月 6 日在儿科就诊住院患儿 病例，有呼吸道感染症状，已经初诊为非细菌性感染的患儿 362 例作为研究对 象，其中男 175 例，女 187 例；年龄为 2 个月12 岁，病程为 190 天。 2.2 方法 具体方法有：（1）用 MP 快速培养法、PCR 法和 MP-Ab 法等 3 种 MP 检测法 对 362 例研究对象同时进行检测，记录结果。 （2）通过研究对象病历回顾统计 MP 感染的例数，并按年龄、病程和 3 种 MP 检测法结果进行统计学分析。 2.3 临床诊断 MP 感染的诊断标准 按文献1 、临床症状、体征标准，包括回顾性诊断即患儿经红霉素 治疗有效，经青霉素、头孢菌素治疗无效者等；以及实验室检查 3 种检测法至 少有一种阳性。病程计算方法：以病历本记录为准，即在患儿开始有症状或体 征时开始计算，到患儿来就诊检测时为止进行计算。 - 9 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 2.4 MP 快速培养法 支原体分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。清晨患 儿未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，严格按说明书进行，将咽拭子用无菌 生理盐水处理，接种到预温的培养基中，37 培养；培养基液体颜 色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮，并且在静置时，瓶底有蓝色颗 粒或物质沉淀为阳性，5 天后培养基颜色不变或无蓝色颗粒或物质沉淀 为阴性。 PCR 法：试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。应用PCR 法检测 MP-DNA，严格按试剂盒说明书进行，以在紫外灯下出现180 bp 扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、阴性对照（阳性对照为MP 质粒，阴性对照为无菌生理盐水），由专人进行操作，质量控制。 MP-Ab 法：试剂为日本瑞必欧株式会社MP-Ab 检测试剂 SERODIA- MYCO凝集试验试剂盒，严格按试剂盒说明书操作，抽取患儿静脉血3 ml，采用明胶颗粒被动凝集法，用血清检测，结果以140 判断为 阳性。每次试验均设未致敏明胶颗粒、致敏明胶颗粒和阳性、阴性血清 进行测定。 2.5 统计学方法 计量资料用均数标准差（xs）表示，各年龄组与 3 种检测方法结果比 - 10 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 较用 Spearman 检验；各年龄组间确诊病例的阳性率比较用 2 检验；3 种检测 方法阳性结果与病程之间的比较用 q 检验。 第三章第三章 结果结果 3.1 阳性样本 经过回顾性诊断，在配对研究组 362 例研究对象中有 152 例符合 MP 感染的 诊断标准，即有 152 例确诊病例，其中肺炎 45 例，支气管炎 56 例，上呼吸感 染 49 例，支气管哮喘 2 例。MP 快速培养法检测出 78 例阳性，PCR 法检测出 103 例阳性，MP-Ab 法检测出 127 例阳性。 3.2 结果分析 各确诊病例的年龄分布，见表 1。表 1 显示儿童 MP 感染的年龄以 34 岁 年龄段的病例最多，为 46 例，阳性率最高，为 70.77%，与其余年龄组段比较 P0.05。不同病程患儿 3 种检测法的检测结果，见表 2，表 2 显示 MP 快速培养法为阳性的患儿病程均值较短为（4.52.6）天，PCR 法为阳性的 患儿病程均值为（6.23.5）天，MP-Ab 法为阳性的患儿病程均值较长为 （8.14.5）天。3 组之间两两比较，差异有统计学意义（P0.05） 。表 1 不同 年龄组 MP 感染确诊病例和 3 种检测方法结果对比分析注：代表与年龄组 34 岁组段比较结果表 2 不同病程患儿 3 种检测方法阳性结果对比分析注： 代表三组之间的两两比较 - 11 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 第四章第四章 讨论讨论 1 1 MP 感染的临床表现常无特异性，临床的实际工作中，容易与一般病毒性感冒 相混淆。在临床上患儿有下列症状：（1）发热呈弛张热或不规则热。刺激性咳 嗽非脓性痰，偶带血丝。 （2）可有咽痛、头痛、胸痛，全身症状比体征明显。 （3）肺部体征不典型而胸片炎症显著，可见云雾状大片阴影。 （4）WBC 正常或 升高。 （5）青霉素类、磺胺类抗生素治疗无效，改用或一开始用大环内酯类抗 生素有效。 （6）实验室 MP 检验有 1 项或 1 项以上阳性具备以上 2 个条件或以上 者可初步诊断为 MP 感染。多时候，临床医生为了尽快缓解患儿的症状，需根据 患儿的症状、体征和病史做 MP 感染的诊断性治疗，但应与肺结核相互鉴别。 2 2 近年来由于诊断技术的提高，MP 感染报道日渐增多，一般认为 MP 感染以年 长儿发病较多，本文表 1 资料显示，28 岁年龄段是发病的高峰期2 。占同 期呼吸免疫科住院患儿的 9.3%，比有关文献报道各年龄组支原体肺炎占肺炎发 病的 10%20%低。说明 MP 感染的发病年龄有提前，且年龄越小，临床表现愈 不典型。 3 3临床实验室检测 MP 的方法很多，过去所用的冷凝集试验法诊断 MP 感染缺乏 特异性，敏感性也差，易受病程的影响3 。本文采用配对资料研究，对疑为 MP 感染的患儿进行 3 种 MP 检测法，以探讨 MP 快速培养法、PCR 法和 MP-Ab 法 等方法在儿童支原体肺炎诊断治疗过程中的敏感性。提示临床医生根据患儿不 同的病程选取不同的检测方法，以提高实验室的阳性检出率。 4 4 MP 快速培养法是利用 MP 生长代谢产物使培养基液体中指示剂颜色发生改变 来判断 MP 生长；标本中的其他支原体和细菌则因培养基中加入了青霉素和醋酸 陀均被抑制。该法阳性结果可 48 h 检出。结果显示，培养法阳性率为 51.3%（78/152） ，低于另外两种方法的阳性率。可能与在检测前患儿已经用了 MP 敏感药物有关。表 2 结果显示，该法阳性病例病程最短。提示病程时间较短 的患儿选择此方法对检测的阳性率较高。MP 培养是诊断 MP 的金标准4 。 5 5 咽拭子 PCR 法检测质粒核酸，该法快速、敏感和特异，通过一技术可从患儿 痰中检测 MP-DNA。由于此方法相当敏感，易受污染，故实验室操作时应特别小 心。统计结果显示，该法的阳性率为 67.76%（103/152） ，高于快培法。此法弥 补了极微量的和被药物杀死的 MP 不能通过快速培养法检出的病例。表 2 结果显 示，该法阳性病例，病程为（6.23.5）天。详细资料显示，有病程在 30 天以 上的患儿经抗 MP 治疗，该法仍可为阳性，说明 MP 的生存力相当强，要系统化 治疗。 - 12 - 河南科技大学高等教育自学考试本科毕业论文 血清 MP-Ab 法阳性率是 3 种检测方法中最高的，为 83.55%（127/152） ，该 法是检测患儿血清中的 MP 抗体，而非直截了当检测 MP 本身，因而阳性结果并 不能确诊是 MP 感染。对患儿状态的综合评估应包括对患者临床症状和试验结果 的严谨分析。极低量的抗体可能不被此试验检测出来。另外还有些 MP 感染的患 者不产生抗体或只产生少量的抗体，高抗体滴度的样品要出现前带现象。表 2 结果显示，该法阳性病例，病程最长，这是由于发病初期，机体中尚未产生抗