（分析化学专业论文）毛细管电泳安培检测联用技术及其应用研究.pdf

学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经 发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在 文中作了明确说明并表示谢意。 作者签名 曼葫江 学位论文使用授权声明 本人完全了解华东师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保 留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权 将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有 权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要 汇编i ：l t 版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 学位敝储繇丑礴i 乙导燧名：秽匆之、 摘要 毛细管电泳一安培检测联用技术及其应用研究 毛细管电泳( c a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s ，c e ) 是近二十年来发展最快的分离分 析技术之一，它将分离柱效提高到上百万理论塔板数，进样量也从微升水平进入 纳升水平，其研究和应用涉及环境分析、药物分析、生化分析等几乎所有的分析 化学领域。但毛细管电泳较小的进样量和极细的毛细管通道内径也给检测也带来 了困难。紫外、激光诱导荧光、质谱等各种检测方法都具有一定的优点，但往往 存在仪器比较昂贵、衍生化步骤烦琐等缺点。电化学检测中的安培检测技术，具 有比紫外检测更高的灵敏度，且仪器简单、价格成本低、线性范围宽、操作简便， 因而其与毛细管电泳联用后在分析化学领域得到了广泛的研究和应用。 同高效液相色谱分离相比，毛细管电泳在分离效率和仪器等方面有明显的优 势。但由于毛细管电泳进样量远远小于液相色谱，利用紫外或荧光检测时光程很 短，导致浓度检测灵敏度较低，不能满足有些痕量分析的要求。利用毛细管电泳 本身的一些特殊性质，通过改变其进样和分离时的一些条件，如采用电堆集、场 放大进样和等速电泳等简单易行的方法，可以显著提高毛细管电泳检测灵敏度。 本论文的目的之一是研究毛细管电泳一安培检测联用技术( c e a d ) q u 提高灵 敏度的方法，包括场放大进样和等速电泳等。论文也探讨了毛细管电泳安培检 测联用技术在药物分析、生化分析、食品分析中的一些应用。主要内容共分为六 奄： 第一章为绪论。在该章中综述了毛细管电泳的特点、分离模式和理论基础、 联用的检测器、提高灵敏度的方法、毛细管电泳安培检测的理论研究和应用现 状等，并简单介绍了本论文的目的意义。 第二章共分为两节。在第一节中探讨了毛细管电泳一安培检测法测定复方降 压中药珍菊降压片中两个含量较高的有效成分：芦丁和氢氯噻嗪。在最佳条件下， 这两种分析物在1 2 r a i n 内能够被很好的检测出，在碳电极上也有较大的电流响 应，检测灵敏度分别是7 0 2 x 1 0 4n a u m o l 和2 1 7 x 1 0 5n a l m o l ，检测限分别是 5 0 1 0 。m o l l “和2 0 x 1 0 7m o l l 1 ( s n = 3 ) 。应用该联用技术成功测定了这两种有 效成分体内代谢后在尿液中的含量。 在第二节中探讨了使用不同稀释剂时毛细管电泳一安培检测中的场放大进样 华东师范大学2 0 0 4 年申请博士学位论文 摘要 现象。我们通过研究用不同稀释溶剂对在水溶液中分别带正电荷、中性电荷、负 电荷的盐酸可乐定、氢氯噻嗪和芦丁三种组分稀释后电流响应的变化，探索了在 毛细管电泳电动迸样时稀释溶剂对场放大进样的影响规律。从实验中发现：a 改 变样品溶液的酸度，可以实现带正电荷、负电荷的离子同时进行场放大进样，该 法比以往改变电极极性的方法简单易行；b 使用更高的缓冲溶液稀释样品，也 可以使带负电荷的离子达到场放大进样：c 通过选择合适的稀释溶剂，可以调 节同一样品中不同成分的检测灵敏度，使其电流响应可以达到同数量级水平。 如在珍菊降压片中，盐酸可乐定、氢氯噻嗪和芦丁三种有效成分的相对含量相差 上百倍，若用缓冲溶液稀释样品，其电流响应难以在同一张电泳图上反映出，但 用水做稀释剂，它们的电流响应可以在同一张电泳图上直观地反映出来。 第三章包括两节内容。在第一节中讨论了毛细管区带电泳一安培检测法间接 测定f e n t o n 反应中的羟基自由基的条件。在3 0 m m o l l n a 2 8 4 0 7 h c l ( p h 7 4 ) 缓冲溶液中，实现了水杨酸、2 ，3 - d h b a 和2 ，5 - d h b a 的完全分离，检测限达到了 1 0 8 m 0 1 1 数量级。并且通过对当归多糖对羟基自由基的清除能力的研究，证明 该方法可用来鉴定不同药物对羟自由基的清除能力。 在第二节中探讨毛细管电泳安培检测中的等速电泳富集现象。由于人体内 新陈代谢产生的自由基的浓度极低，如在尿样中羟自由基捕获剂的浓度在 1 0 1 m o l 1 数量级，所以毛细管电泳一安培检测法尚不能直接进行生化样品中羟自 由基的测定。我们尝试了用毛细管瞬时等速电泳的方法对2 ，3 一d h b a 进行了管内 富集，选用对甲基苯甲酸为前导电解质，运行缓冲溶液为终止电解质，使 2 ，3 - d h b a 的检测限降低了2 0 倍，在灵敏度上达到了进行生化样品中羟自由基分 析的要求。本文对适合于毛细管电泳一电化学检测特性的等速电泳条件也作了初 步的探讨。 第四章利用胶束电动毛细管电泳安培检测联用同时测定了食品中的活性胺 及其前体氨基酸。我们以碳圆盘电极为工作电极，用胶束电动毛细管电泳安培 检测法( m e c c a d ) 同时分离和检测食品中生物活性胺及其前体氨基酸，即色胺、 酪胺、色氨酸和酪氨酸。所建立的方法简单、可靠、重现性较好。分离和检测的 最佳条件是：o 0 2 t o o l - l 1 硼酸钠( n a 2 8 2 0 7 ) 氨氧化钠( n a o h ) 缓冲溶液( p h 1 03 5 ) 作为运行缓冲液，其中含0 0 3m o l - l 。十二烷基硫酸钠( s d s ) ；分离电压为 华东师范大学2 0 0 4 年申请博士学位论文 摘要 2 0 k v ；检测电位为+ 0 8 0 v ( v s s c e ) 。在优化条件下，色胺、酪胺、色氨酸和酪 氨酸得到完全分离，在三个数量级范围内，峰电流与待测物呈良好的线性关系， 检测限( s n = 3 ) 达到1 o 1 0 7 m o l l 。将建立的方法用于实际样品米酒的测定， 测定结果令人满意。 第五章应用毛细管电泳一安培检测测定中药杂多糖的组成。中药杂多糖的组 成分析多使用气相色谱法和液相色谱法，在分离和检测过程中往往需要复杂的衍 生化步骤。我i f n 用毛细管区带电泳一安培检测法可以直接测定中药多糖水解后 的单糖组成。在选定的最佳条件下，当归多糖和亚麻多糖的水解产物岩藻糖、 半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖在2 5 m i n 内实现完全分离而且在铜电 极上有很好的电流响应。这六种单糖的线形范围都在5 0 i 0 4 2 o x l 0 1 m o l l 1 之间，检测限低于或接近i 0 1m o l l 1 ( s n = 3 ) 。实验表明当归多糖由岩藻糖、 半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖组成，其摩尔比为1 0 ：1 3 6 ：1 5 0 ： 8 。7 ：2 1 ，3 ：3 7 ，亚麻多糖由半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖组成，其摩尔比为 1 0 ：4 9 8 ：1 i 。所提取的两种多糖的纯度分别为9 8 3 和9 7 6 。该方法具 有分析速度快、仪器简单、灵敏度高和重现性好等优点。 第六章内容是血浆中水溶性小分子抗氧化剂的毛细管电泳一电化学检测研 究。人体内的水溶性小分子抗氧化剂包括抗坏血酸( v c ) 、谷胱甘肽( g s h ) 、尿酸 ( u a ) 、色氨酸( t r y ) 和半胱氨酸( c y s ) 等。这些小分子抗氧化剂的分析主要以高 效液相色谱一紫外电化学检测联用为主，其中电化学检测比紫外检测有更高的灵 敏度。本文应用毛细管电泳一电化学检测方法，以金属铜电极为检测电极，探索 了测定人血浆中水溶性小分子抗氧化剂谷胱甘肽( g s h ) 、尿酸( u a ) 、色氨酸( t r y ) 和半胱氨酸( c y s ) 的最佳条件。在最佳实验条件下各组分的线性范围在 1 o x l o t 5 o x l o 。m o i l l 内，检测限在i 0 m o i l 。1 数量级。该法具有分析速度快、 灵敏度高等优点，对血浆样品的测试获得了满意的结果。 关键词：毛细管电泳；安培检测；场放大进样；瞬时等速电泳；氨基酸；羟自由 基；氨基酸；中药多糖；抗氧化剂 华东师范大学2 0 0 4 年申请博士学位论文 a b s t r a c t s t u d y o i lt e c h n i q u ea n d a p p l i c a t i o n o f c a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i sw i t ha m p e r o m e t r i c d e t e c t i o n c a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s ( c e ) i s o n eo ft h em o s t i m p o r t a n ts e p a r a t i o n t e c h n i q u e si n r e c e n tt w e n t y y e a r s b e c a u s et h et h e o r e t i c a lp l a t en u m b e ri sg r e a t d e v e l o p e dt ot e n so f t h o u s a n d sa n de v e nm i l l i o n sa n dt h ev o l u m eo f s a m p l ei n j e c t i o n r e a c h e sn a n om i l l i l i t e rl e v e li nc e a n a l y s i s ，i ti ss t u d i e da n da p p l i e dt om o s ta n a l y t i c a l a r e a s h o w e v e r , t h es m a l ls a m p l ei n j e c t i o nv o l u m ea n dv e r yt h i nc a p i l l a r yb r i n ga b o u t d i f f i c u l t i e st od e t e c t i o n s t h ec o m m o nu s e dd e t e c t i o nm e t h o d sa r eu l t r a v i o l e t ( u v ) ， l a s e ri n d u c e df l u o r e s c e n c e ( l i f ) ，m a s ss p e c t r a ( m s ) a n de l e c t r o c h e m i c a ld e t e c t i o n ( e d ) e v e r yd e t e c t i o nm e t h o dp e r f o r m ss o m ea d v a n t a g e sa n ds u f f e r sf r o ms o m e s h o r t a g e st o o f o re x a m p l e ，l i fa n dm s a r ev e r ys e n s i t i v eb u tt h ei n s t r u m e n t a t i o n s a r e v e r ye x p e n s i v e ，a n d s o m e c o m p l i c a t e d d e r i v a t i o n p r o c e d u r e s a r en e e d e d a m p e r o m e t r i cd e t e c t i o n ( a d ) ，o n ek i n do fe l e c t r o c h e m i c a ld e t e c t i o n s ，i sm o r e s e n s i t i v et h a nt h ec o n t l t l o nu s e du v d e t e c t i o n ，a n dh a v em a n ym e r i t sw h e nc o u p l e d w i t hc e ，s u c ha ss i m p l ei n s t n m a e n t a t i o na n do p e r a t i o n ，l o wc o s t ，w i d el i n e a rr a n g e ， e t c t h ec o m b i n a t i o no fc ew i t ha di s e x t e n s i v e l ys t u d i e da n da p p l i e di nm o s t a n a l y t i c a lf i e l d sf o ri t sa b o v ea d v a n t a g e s t h ea d v a n t a g e so fc ei ns e p a r a t i o ne f f i c i e n c ya n di n s t n u n e n t a t i o na r eo b v i o u s w h e nc o m p a r e dt oh p l c h o w e v e lt h ec o n c e n t r a t i o nd e t e c t i o ns e n s i t i v i t yo fc e i s m u c hl o w e rt h a nh p l co w i n gt oi t ss m a l l e rs a m p l i n gv o l u m ea n dt h es h o r tl i g h t d i s t a n c ew h e n c o u p l e dw i t hu v o rf id e t e c t o r s ，t h ed e t e c t i o ns e n s i t i v i t yo fc ec o u l d b e g r e a ti m p r o v e db ys o m es p e c i a lc h a r a c t e r s i t s e l fs u c ha s f i e l d - a m p l i f i c a t i o n - i n j e c t i o na n di s o t a c h o p h o r e s i s o n eg o a lo ft h i sd i s s e r t a t i o ni st o e x p l o r e t h em e t h o d so fi m p r o v i n gt h e s e n s i t i v i t yo f c e a d a n o t h e ro n ei sa p p l y i n gt h i sc e a dt e c h n i q u et or e s o l v es o m e a c t u a la n a l y t i c a lp r o b l e m si np h a r m a c e u t i c a la n a l y s i s ，b i o c h e m i c a la n a l y s i sa n df o o d a n a l y s i s t h ec o n t e n t so f t 1 i sd i s s e r t a t i o ni n c l u d es i xc h a p t e r s ： i nt h ef i r s tc h a p t e r , t h ec h a r a c t e r i s t i c so f c e ，t h es e p a r a t i o nm o d e l sa n db a s i c 华东师范大学2 0 0 4 年申请博士学位论文4 t h e o r i e so fc e ，t h ed e t e c t o r s ，t h es e n s i t i v i t y e n h a n c e dm e t h o d s ，t h es t u d i e s a n d a p p l i c a t i o n s o fc e a ds i m p l yi si n t r o d u c e d t h eg o a la n ds i g n i f i c a n c eo ft h i s d i s s e r t a t i o na r ei n t r o d u c e dt o o c h a p t e r 2i n c l u d e st w os e c t i o n s i nt h ef i r s t s e c t i o n ，c a p i l l a r y z o n e e l e c t r o p h o r e s i s ( c z e ) w i t ha n a p e r o m e t r i cd e t e c t i o n ( a d ) w a sf i r s t l ya p p l i e d t ot h e s i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fr u t i n ( r t ) a n dh y d r o c h l o r o t h i a z i d e ( h c t ) i n c o m p o u n d c h i n e s eh e r bm e d i c i n e sa n dh u m a nu r i n e s a m p l e s t h et w oa n a l y t e sc o u l db ep e r f e c t l y a n a l y z e dw i t h i n1 2m i na n ds h o w e ds i g n i f i c a n tc u r r e n tr e s p o n s e sa tc a r b o ne l e c t r o d eu n d e r t h eo p t i m u mc o n d i t i o n sa n dt h e i rd e t e c t i o nl i m i t sw e r e5 o x l 0 。7m o l l 。a n d2 0 x 1 0 。7m o i l 1 r e s p e c t i v e l y ( s i n 2 3 1 i nt h es e c o n ds e c t i o no ft h i s c h a p t e lw ee x p l o r e dt h ee f f e c t so fd i l u e n t sd u r i n g e l e c t r o k i n e t i cs a m p l i n go nf i e l da m p l i f i c a t i o ni n j e c t i o nb ys t u d y i n gt h ec h a n g e so f c u r r e n tr e s p o n s e so fc l o n i d i n eh y d r o c h l o r i d e ，h y d r o c h l o r o t h i a z i d ea n dm t i nw h i c ha r e o r i g i n a l l yp o s i t i v e ，n e u t r a l ，n e g a t i v er e s p e c t i v e l yi nw a t e rs o l u t i o nw h e nd i l u t e di n d i f f e r e n ts o l v e n t s i tw a sf o u n dt h a tt h es i m u l t a n e o u sf i e l da m p l i f i c a t i o ni n j e c t i o nf o r p o s i t i v ea n dn e g a t i v ep a r t i c l e sc o u l d b ec a r r i e do u t b yc h a n g i n g t h ea c i d i t yo f s a m p l e s t h i sm e t h o di sm u c he a s i e rt h a n c o n v e n i n ge l e c t r i c i t yp o l a r i t y t h e e f f e c tf o r n e g a t i v ep a r t i c l e s c o u l db ea l s or e a c h e d b yu s i n gb u f f e rs o l u t i o nw i t hh i g h e r c o n c e n t r a t i o na sd i l u e n t s n l ed e t e c t i o ns e n s i t i v i t yo fd i f f e r e n ti n g r e d i e n t se x i s t e di n o n e s a m p l ec o u l d b e a d j u s t e da n dt h e nt h e i rc u r r e n tr e s p o n s e sc o u l db er e a c ht h es a m e m a g n i t u d el e v e lb yu s i n gs u i t a b l ed i l u e n t s f o re x a m p l e ，t h ec u r r e n tr e s p o n s e so f c l o n i d i n e h y d r o c h l o r i d e ，h y d r o c h l o r o t h i a z i d ea n d m t i na r ed i f f i c u l tt oc o m p a r e c l e a r l y i nt h es a m ee l e c t r o p h e r o g r a mi fu s i n gt h er u n n i n gb u f f e ra sd i l u e n tb e c a u s et h e i r c o n t e n t sa r ed i f f e r e n ti no n eh u n d r e dt i m e s b u t ，t h e i rc u r r e n tr e s p o n s e sc o u l db e c o m p a r e dc l e a r l yi no n ee l e c t r o p h e r o g r a mi f w a t e r i su s e da st h ed i l u e n t c h a p t e r 3i n c l u d e st w os e c t i o n s t o o i nt h ef i r s t s e c t i o n ，t h e i n d i r e c t d e t e r m i n a t i o no f h y d r o x y lr a d i c a l ( o h ) b yc z e a dw a ss t u d i e db ym e a s u r i n gi t s r e a c t i o np r o d u c t sw i t hs a l i c y l i ca c i d ( s a l ) ：2 ，3 一d i h y d r o x y b e n z o i ca c i d ( 2 , 3 一d h b a ) a n d 2 , 5 一d i h y d r o x y b e n z o i ca c i dr 2 , 5 一d h b a ) t h eo p t i m u n lc o n d i t i o n so fc z e a df o r t h ed e t e r m i n a t i o no f 2 , 3 d h b aa n d2 5 - d h b aw e r ee x p l o r e d u n d e rt h eo p t i m u m 华东师范丈学2 0 0 4 年申请博士学位论文5 a b s t r a c t c o n d i t i o n s ，s a l ，2 , 3 一d h b aa n d2 , 5 - d h b a c o u l db ep e r f e c t l ys e p a r a t e dw i t h i n15 m i n a 1 1 dt h ed e t e c t i o nl i m i t sw e r ea sl o wa s2 x 1 0 8 m o l1 ，w h i c hw e r em u c hb e t t e r t h a nc e ，u vm e t h o d t h em e t h o dw a sa l s oa p p l i e dt os t u d yt h es c a v e n g i n ga c t i v i t y o fa n g e l i c ap o l y s a c c h a r i d e t h ee x p e r i m e n t a lr e s u l t ss h o w e dt h a tt h ei n t r o d u c e d c z e a dm e t h o dw a sv e r ys e n s i t i v ea n dp r a c t i c a li nb o t ht h ed e t e r m i n a t i o no ff r e e o h a n de v a l u a t i o no f t h ea c t i v i t i e so f o h s c a v e n g e r s i nt h es e c o n ds e c t i o no ft h i s c h a p t e r , t h e m e t h o do ft r a n s i e n t c a p i l l a r y i s o t a c h o p h o r s i sw i t ha d w a ss t u d i e d b e c a u s et h ec o n c e n t r a t i o no fo h p r o d u c e d d u r i n gt h em e t a b o l i s mi nh u m a nb e i n g si sv e r yl o w , s u c ha si t i sa b o u ta t10 。9 m o l 1 l e v e li nu r i n es a m p l e ，i ti si m p o s s i b l et od i r e c t l yd e t e c to h i nb i o c h e m i c a ls a m p l e s b yc e a d 。w e t r i e dt og a t h e r2 , 3 一d h b a2 0t i m e sb yt r a n s i e n ti s o t a c h o p h o r e s i sb y s e l e c t i n gp - m e t h y lb e n z o i ca c i da sl e a de l e c t r o l y t ea n dr u n n i n gb u f f e ra st e r m i n a t e e l e c t r o l y t e ，s ot h ed e t e c t i o ns e n s i t i v i t yc o u l dr e a c ht h er e q u i r e m e n to fb i o c h e m i c a l a n a l y s i s t h es p e c i a lc o n d i t i o n so f t r a n s i e n ti s o t a c h o p h o r e s i sc o u p l e dw i ma dw e r e t e n t a t i v e l ys t u d i e d t o o i nc h a p t e r4 ，t h es i m u l t a n e o u s l yd e t e r m i n i n gb i o g e n i ca m i n e sa n dt h e i r p r e c u r s o r a m i n oa c i d si nf o o db ym e c c - a dw a ss t u d i e d t h eo p t i m a lc o n d i t i o n s o fs e p a r a t i o na n dd e t e c t i o no ft y p t a m i n e ，t y r a m i n e ，t r y p t o p h a na n dt y r o s i n ew e r e 0 0 2 0 t o o l l b o r a t e n a o h ( p h 10 3 5 ) c o n t a i n i n g0 0 3m 0 1 l 。1s o d i u m d o d e c y l s u l p h a t e ( s d s ) a sr u n n i n gb u f f e r , 2 0k v a ss e p a r a t i o nv o l t a g e ，a n d + 8 0 0m v ( v s ，s c e ，a t c a r b o nd i s k e l e c t r o d e ) a s d e t e c t i o n p o t e n t i a l u n d e r t h e o p t i m u m c o n d i t i o n s ，t h ef o u ra n a l y t e sw e r es e p a r a t e dc o m p l e t e l yw i t h i n1 5m i n u t e s ，a n dg o o d l i n e a r i t y , r e p r o d u c i b i l i t ya n dr e c o v e r yr e s u l t sw e r eo b t a i n e d b a s e do nt h r e et i m e s s t a n d a r dd e v i a t i o no fal o wl e v e ls a m p l e ，t h ed e t e c t i o nl i m i tf o rt h ef o u ra n a l y t e sw e r e a sl o wa sa t10 m o l - l l e v e l t h i sm e t h o dw a sa l s os u c c e s s f u l l yu s e di nt h ea n a l y s i s o f a c t u a lr i c es p i r i t ，a n ds a t i s f a c t o r ya s s a yr e s u l t sw e r eo b t a i n e d c h a p t e r 5i s d e t e r m i n i n g t h ec o n s t i t u e n tm o n o s a e e h a r i d e so fh e t e r o p o l y s a c e h a r i d e s i nt r a d i t i o n a lc h i n e s eh e r b s b yc e - a d g ca n dh p l ca r e u s u a l l yt o t h ec o n s t i t u e n tm o n o s a c c h a r i d e sa n a l y s i so fh e t e r op o l y s a c c h a r i d e s ，b u t c o m p l i c a t e dd e r i v a t i o np r o c e d u r e sa r en e c e s s a r yb o t hi ns e p a r a t i o na n dd e t e c t i o n i n 华东师范大学2 0 0 4 年申请博士学位论文6 a b s t r a c t t h i s p a p e r , c e a da p p l i e d t o i n d i r e c t l y d e t e r m i n et h e c o m p o s i t i o n s o f h e t e r o - p o l y s a c c h a r i d e sa n g e l i c a s i n e n s i sa n df l a x b ya n a l y z i n g t h e i r h y d r o l y z e d p r o d u c t s ：f u c o s e ，g a l a c t o s e ，g l u c o s e ，a r a b i n o s e ，r h a m n o s e a n dx y l o s e u n d e rt h e s e l e c t e do p t i m u mc o n d i t i o n s ，t h es i xm o n o s a c c h a r i d e sc o u l db ep e r f e c t l ys e p a r a t e d w i t h i n2 5m i na n ds h o w e ds i g n i f i c a n tc u r r e n tr e s p o n s e sa t c o p p e re l e c t r o d e s t h e l i n e a rr a n g e so ft h es i xm o n o s a c c h a r i d e sw e r ea l lf r o m5 o x l o t o2 0 1 0 4m o l l 1 a n dt h e i rd e t e c t i o nl i m i t sw e r el o w e ro rn e a r1 o xlo 6 m o l l ( s n = 3 ) e x p e r i m e n t s s h o w e dt h a tt h ea n g e l i c as i n e n s i sp o l y s a c c h a r i d e sw e r e c o m p o s e do f f u c o s e ，g a l a c t o s e ， g l u c o s e ，a r a b i n o s e ，r h a m n o s e ( m o l er a t i o1 0 ：1 3 6 ：1 5 0 ：8 7 ：2 1 3 ：3 7 ) ) a n dt h e f l a xp o l y s a c c h a r i d e sw e r ec o m p o s e do f g a l a c t o s e ，g l u c o s ea n da r a b i n o s e ( m o l er a t i o 1 0 ：4 9 8 ：1 1 ) ，a n dt h ep u r i t yo ft h e s ep o l y s a c c h a r i d e sl e a c h e db yt h ei n t r o d u c e d l e a c h i n gm e t h o dw e r e9 6 3 a n d9 4 6 r e s p e c t i v e l y a n a l y z i n gp o l y s a c c h a f i d e sb y t h i sm e t h o dh a ss o m em e r i t so f q u i c k n e s s ，l o w v o l u m es a m p l i n g ，s i m p l ei n s t r u m e n t ， h i g hs e n s i t i v i t ya n dh i g hr e p r o d u c i b i l i t y c h a p t e r6 i sd e t e r m i n i n gt h es m a l lw a t e r - s o l u b l ea n t i o x i d a n t si np l a s m ab y c e - a d t h es m a l lw a t e r - s o l u b l ea n t i o x i d a n t si np l a s m ai n c l u d i n gg s h ，u a ，t r ya n d c y sa r ev e r yi m p o r t a n tt oh u m a nb e i n gh e a l t ha n dt h e i rd e t e c t i o ni ss i g n i f i c a n tt o o ， t h e o p t i m u m c o n d i t i o n so f d e t e r m i n i n gg s h ，u a ，t r ya n dc y sb yc z e a d b a s e do n m e t a l l i cc o p p e re l e c t r o d ew e r ed e t a i l e ds t u d i e d t h eo p t i m u mc o n d i t i o n so fc z e - a d w e r e s e p a r a t i o nv o l t a g e 15 k v , r u n n i n g b u f f e r 2 5 m m o l l n a 2 8 4 0 7 5 0 m o l l 。1 n a h 2 p 0 4 ( p h7 9 ) k i n e t i ci n j e c t i o nt i m e3 0sa n dd e t e c t i o np o t e n t i a l0 , 5v t h e l i n e a rr a n g e so f t h ef o u ra n a l y t e sw e r e ( 1 0 5 o ) 1 0 6 n 5 o x l o 4 m o l l 。1a n dt h el i m i t s o fd e t e c t i o nw e r ea b o u t1 0 6m o l l u n d e rt h eo p t i m a le x p e r i m e n t a lc o n d i t i o n s t h i s m e t h o d p e r f o r m e d s o m e a d v a n t a g e s i n q u i c k n e s s ，h i 曲s e n s i t i v i t y a n d s i m p l e i n s t r u m e n t a t i o n ，a n ds a t i s f a c t o r y r e s u l t sw e r eo b t a i n e dw h e ni tw a sa p p l i e dt o a n a l y z i n gh u m a np l a s m as a m p l e s k e yw o r d s ：c a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s ；a m p e r o m e t r i cd e t e c t i o n ；f i e l da m p l i f i c a t i o n i n j e c t i o n ；t r a n s i e n ti s o t a c h o p