第5章动物检疫技术.ppt.ppt

,第五章动物检疫技术第一节流行病学调查,一、调查方式和方法1、现场调查询问调查现场观察查验资料动物剖检现场采样数理统计2、通信调查电话、传真、e-mail等进行交流调查。,二.调查的种类和内容1、现况调查普查如每年春季或秋季进行牛结核病和布氏杆菌病的普查；在多雨年份的秋季对全部奶牛进行肝片吸虫病的检查。抽样调查抽样调查简称抽查是调查有关动物群体中的部分动物,即样本。通过对部分动物的调查了解,估计某病在全群中发生发展趋向,以少窥多。,2、流行调查流行调查指对某养殖场(户)在短时间内突然集中发生或连续发生大量同一种传染病病畜禽时所进行的调查。目的是控制或消灭流行，并从中发现防疫工作的薄弱环节，总结经验教训，避免类似事件再次发生。,(1)最初调查养殖场(户)基本情况、病史、本次发病情况、环境因素。(2)深入调查发病情况调查、传染来源调查、传播途径调查。(3)追踪调查追踪疫点传染源和传播媒介的扩散趋势。追踪调查的关键是查明接触者。,三.流行病学调查常用的数和率1.发病率：在一定时间内,某动物群体中某病的发病动物数占该群体动物总数的百分率。2.患病率：在一定时间内,某动物群体中某病的患病动物数占该群体动物总数的百分率。,3.死亡率：在一定时间内,某动物群体中因某病死亡的动物数占该群体动物总数的百分率。4.病死率(致死率)：在一定时间内,某动物群体中因某病死亡的动物数占该病患病动物总数的百分率。,第二节临诊检疫技术一、群体检疫群体检疫是指对待检动物群体进行的现场检疫。(一)群体检疫的组织1.群体划分同场、同圈(舍)；同一产地来源的；同车、同船、同机运输的划为一群。在畜群过大时,要适当分群,以利于检查。,2.检疫顺序大群小群；幼年成年；种用畜群其它用途的；健康染病畜群3.检疫时间放牧的：跟群检疫检疫舍饲的：饲喂时检疫。反刍动物：饲后安静时检疫乳牛：挤乳时检疫产地和口岸隔离检疫：按规定在规定时间完成必检项目。,(二)群体检疫的方法和内容1.静态观察静态观察是在动物安静休息,完全保持自然状态下,观察其站立、睡卧姿势；精神状态；营养程度和呼吸、反刍等基本生理活动现象。注意有无异常站立、睡卧姿势,有无咳嗽、喘息、呻吟、流涎、嗜睡、孤立一隅等反常现象。,2.动态观察经静态观察之后,将被检动物驱赶起来,观察其自然活动和驱赶活动。重点看起立、运动的姿势与步态；精神状态。注意有无不愿起立,不能起立或起立困难以及跛行、步态蹒跚、转圈、共济失调、曲背弓腰、离群掉队及运动后咳嗽、喘气等病态。,3.饮食观察目的在于检查动物的食欲和口腔疾病。可以观察动物自然采食饮水动作,亦可有意少给食物看其抢食行为。从中发现不食不饮、少食少饮、吞咽困难和退槽、呕吐、流涎等可疑患病动物。通过群体检疫,从大群动物中挑拣出有病态的动物,隔离后进一步进行个体检疫。,二.个体检疫个体检疫是对群体检疫时检出的可疑病态动物进行详细和系统的临诊检查。若群体检疫没有发现病态动物,亦应抽查520的动物作个体检疫。若抽查发现检疫对象,再抽检10,必要时对全群动物逐一进行复查。,（一）个体检疫的方法和内容1.视诊(1)看精神状态健康动物静止时安静,行动时灵活,对各种外界刺激敏感。(2)看营养程度营养状况：肌肉的丰满度、皮下脂肪的蓄积量、被毛状况三方面观察。,营养良好：肌肉丰满,皮下脂肪肥厚,被毛平顺光亮,躯体轮廓丰圆。营养不良：消瘦,被毛蓬乱无光,骨骼表露明显。(3)看姿势与运动观察动物站立、睡卧的姿势是否自然,运动时动作是否灵活而协调。,(4)看皮肤被毛观察动物是否有皮肤病变,被毛是否整洁、平顺有光泽。(5)看可视黏膜在检查可视黏膜的同时,检查眼、鼻、口等天然孔分泌物的性状。(6)看排泄物(7)看呼吸与反刍,2.触诊（1）耳根、角根、鼻端、四肢末端（2）体表皮肤（3）体表淋巴结（4）嗉囊3.听诊（1）叫声：判别动物异常声音（2）咳嗽：判别动物呼吸器官病变。干咳：见于上呼吸道炎症（咽喉炎、慢性支气管炎）；湿咳：见于支气管和肺部炎症,4.测体温健康动物：早晨温度较低,午后略高,波动范围在0.51之间。动物检疫中常根据体温升高程度,判断动物发热程度,进而推测疫病的严重性和可疑疫病范围。体温升高程度分为：微热(体温升高1)；中等热(体温升高2)；高热(体温升高3)；最高热(体温升高3以上)。,群体检疫,临床检疫,个体检疫,个体检疫,个体检疫,群体检疫,群检正常抽检5%-20%,群检异常个体检查,静态观察,食态观察,动态观察,三.各种动物临诊检疫特点（一）猪的临诊检疫特点1.健康猪站立平稳,不断走动拱食,并发出“吭吭”声。对外界刺激敏感,遇人接近表现警惕性凝视。睡卧常取侧卧,四肢伸展,头侧地，呼吸均匀；爬卧时后腿屈于腹下。排泄物正常。体温正常。被毛整齐光亮。起立敏捷,行动灵活,走跑时摇头摆尾或上卷尾。遇驱赶,随群前进,不断发出叫声。饿时叫唤,饮喂时抢食,大口吞咽有响声且响声清脆,全身鬃毛随吞食而颤动。,2.病猪精神萎靡,离群独立,全身颤抖或头颈歪斜。蜷卧,不愿起立。被毛粗乱无光,鼻盘干燥,眼有分泌物,肷窝凹陷。行动迟缓,步态踉跄,跛行或出现神经症状。食欲下降,懒于上槽,或只吃几口就退槽,有些只闻而不食,亦有的食欲废绝。排泄物异常。多有体温异常。,(二)牛的临诊检疫特点1.健康牛站立平稳,神态安静。睡卧时常呈膝卧姿势,四肢弯曲。全身被毛平整有光泽,鼻镜湿润,眼、嘴及肛门周围干净。反刍有力，正常嗳气，呼吸平稳。肉用牛垂肉高度发育；乳用牛乳房清洁,泌乳正常。排泄物、体温正常健康牛走起路来精力充沛,腰背灵活,四肢有力,摇耳甩尾,自由自在。饮食中争抢饲料,咀嚼有力,采食时间长,采食量大。放牧中喜采食高草,常甩头用力扯断。运动后饮水不咳嗽。,2.病牛精神沉郁,头颈低伸,拱背弯腰或有异常体态。睡卧时四肢伸开,横卧或曲颈侧卧,嗜睡,久卧不起或起立困难。被毛粗乱。反刍迟缓或停止。排泄物异常。体温、呼吸多异常。运动时常跛行掉队或不愿行走。饮食时表现厌食或不食,或采食缓慢,咀嚼无力。出现运动后饮水咳嗽。,(三)羊的临诊检疫特点1.健康羊站立平稳,乖顺。被毛整洁。呼吸平稳。常于饱腹后合群卧地休息，反刍。遇炎热相互把头藏于对方腹下避暑。走起路来精神活泼,合群不掉队；放牧中虽很分散,但不离群。山羊活泼机敏,喜攀登,善跳跃,好争斗,尤其是羔羊和幼龄羊。饲喂时互相争食，放牧时常边走边吃草,边走边排粪，排泄物正常。食后肷窝臌起。,2.病羊精神萎靡不振,常独卧一隅,遇人接近不起不走。不反刍。排泄物异常。呼吸异常。被毛粗乱,脱毛,皮肤干裂。行走摇摆,或出现异常运动,异常姿势。食欲不振或停食,食后肷窝仍下陷。山羊喜卧懒动，多有体温异常。,(四)家禽的临诊检疫特点1.健康家禽神态活泼,反应敏锐。站立时伸颈昂首翘尾,且常高收一肢,目光伶俐,时常侧视。卧时头叠放在翅内。冠、髯红润,羽绒丰满光亮,排列匀称。口鼻洁净,呼吸正常,排泄物正常。体温正常。平养鸡行动敏捷,步态稳健；鸭、鹅陆地行走稳健,水中游牧自如,放牧时不掉队。健康家禽啄食连续,食欲旺盛,食量大,嗉囊饱满。,2.病禽精神萎靡,缩颈垂翅,闭目似睡。冠、髯苍白或紫黑,喙、蹼色泽变暗。有的头颈部肿胀,眼、鼻等天然孔有异常分泌物。羽绒蓬乱无光。行动迟缓,跛行或有肢翅麻痹及其它神经症状。食欲减退或废绝,嗉囊空虚。排泄物异常。多有体温异常。,第三节病理学检查技术一、病理剖检检查技术（一）对动物尸体剖检的要求1、剖检前检查剖检前仔细检查尸体体表特征及天然孔有无异常，以排除炭疽等恶性传染病。患炭疽病的动物及其尸体，禁止剖检。若怀疑动物死于炭疽，先采取耳尖血液涂片镜检，排除炭疽后方可剖检。,2、剖检时间剖检进行的越早越好，最好在白天进行剖检。3、剖检地点病理解剖室或；在野外或其它检疫现场剖检时，应选地势高燥并远离居民区、畜舍及交通要道的地方进行。4、剖检数量家禽：5只以上；大中动物至少剖检3头。5、剖检术式6、安全防护工作人员的安全防护工作；防止环境污染。常用的消毒液有：1%2%硼酸、0.1%新洁尔灭、5%碘酊、70%酒精等,（二）外部检查1检查尸体变化尸僵、尸斑、尸腐、血液凝固2检查皮肤、被毛及营养状况3检查天然孔（三）内部检查1、皮下检查2、内脏器官的检查对有病变和病变严重的器官要重点检查，分辩病理变化特点，判定病变性质。3、口腔、鼻腔和颈部器官的检查,（四）剖检记录1、记录内容记录内容要求完整、客观、真实。记录应在检查过程中完成，而不是事后补记。2、病变描述必须客观准确，反映组织器官本来的变化。,二病理组织学检查弥补了肉眼检查的不足，进一步明确病变性质，常使疫病得到确诊。尤其对肿瘤的定性，脑组织病变检查有极高的价值。常用的有石蜡切片、苏木素伊红（h.e）染色法；快速冰冻切片如猪瘟、牛海绵状脑病的检测。,第四节检疫材料的采集一采集原则1适时采集2典型采样典型采样要求样品具有代表性。动物活体采样选择典型动物即未经药物治疗、病状典型的动物，这对细菌性传染病的检查尤其重要。选择典型材料a、采集病原体可能在其中含量最高的材料。b、在采取病料前，对动物可能患某种疫病作出初步诊断，侧重采集该病原体常侵害的部位。,从动物尸体采样采集有病变的组织、器官或病变最明显、最典型的部位。供病理组织切片的样品，应连带部分健康组织。淋巴结、心、肝、脾、肺、肾，不论有无病变，一般均应采取。3合理采样动物群体发病，至少采取5头（只）动物的病料。每一种样品应有足够的数量，除确保本次实验用量外，以备必要的复检用。,4无菌采样样品采集全过程应无菌操作，尤其是供微生物学检查和血清学实验的样品。采样部位、采样用具、盛放样品的容器均需灭菌处理。5安全采样在采样过程中，采样人员要注意安全，防止感染；同时防止病原扩散而造成环境污染。,二供病原学检查材料的采集、处理1、供微生物学检查材料的采集、处理（1）血液采血部位：颈静脉或尾静脉或耳静脉；家禽从翅静脉或心脏。死亡动物从右心房采血。采血量：10ml（大、中动物）；35ml（小动物和家禽）。全血抗凝：edtana2、枸橼酸钠、肝素。枸橼酸钠不宜用于病毒血样。10ml血液+4%枸橼酸钠溶液1ml或0.1%肝素1ml或edtana21520。病毒样品：1ml血样=青霉素+链霉素各5001000iu，以抑制血源性或在采血过程中污染的细菌。,（2）分泌物和渗出液口腔、鼻腔、喉气管、泄殖腔及阴道分泌物：用灭菌的棉球蘸取。咽食道分泌物：采前禁食12h，食道探子刮取。乳汁：清洗乳房并消毒弃去最初挤出的几把乳汁挤出的1020ml乳汁。尿液：排尿时采集或用导尿管采取，常取3050ml。水泡液、水肿液、关节囊液，胸腹腔渗出液：用注射器抽取，至少采取1ml。脓汁：已破口的脓疱，用棉球蘸取；未破口的用注射器吸取。过于浓稠不好抽取时，可切开脓疱，用棉球蘸取。,（3）淋巴结、内脏器官、肌肉淋巴结：淋巴结连带周围脂肪整体采集。内脏器官和肌肉：取病变最明显的部位。采集的淋巴结、内脏器官、肌肉分别置于灭菌容器。（4）水泡皮病变部清水清洗，剪取新鲜水泡皮35g放入灭菌小瓶。（5）肠管选取要采集的肠管至少6cm，两端结扎，剪断，置灭菌玻璃容器或塑料袋中。,（6）长骨及肋骨整根采集，不要损伤其两端，用5%石炭酸水容液浸透的纱布或麻袋片包裹；（7）流产胎儿、家禽及其它小动物尸体用不透水塑料袋包紧，装入木箱送检。（8）患病小动物在距离实验室较近，又有较好的隔离运输条件下，可将发病小动物直接送实验室检查。,保存与送检分泌物和渗出液采集放入灭菌容器密封外贴标签冷藏送检。病毒性病料的保存：含抗生素的ph7.27.4磷酸盐缓冲液、50甘油磷酸盐缓冲液、50甘油生理盐水。细菌性病料的保存：30甘油磷酸盐缓冲液、30甘油生理盐水、灭菌液体石蜡。,液体材料（血液、胆汁、分泌物）涂片：灭菌接种环取一滴载玻片中央均匀涂布成适当大小的薄层自然干燥包扎固定送检组织器官涂片：无菌方法剪取新鲜切面，在玻片上压印（触片）或涂抹成一薄层自然干燥包扎固定送检。,2、供寄生虫检查材料的采集、处理（1）血液多从耳静脉采集，立即制成涂片标本。（2）阴道分泌物用棉拭子擦拭采取（3）粪便直肠采集或采集新排出的粪便。（4）被寄生虫寄生的组织、器官组织、器官常连带寄生虫一并采集，放入510福尔马林溶液中。,（5）皮肤刮下物螨病病料：在病变皮肤和健康皮肤交界处采集。（6）寄生虫体表寄生虫：用手或镊子捏取或把附有虫体的羽毛剪下70酒精、甘油酒精或5福尔马林容液中。体内寄生虫：小型线虫用毛笔将虫体挑出生理盐水洗净70酒精、甘油酒精或巴氏夜固定。大型蠕虫像蛔虫、棘头虫、绦虫用510福尔马林溶液固定。,三供血清学检查材料的采集、处理1、血清采血一次采血量大中动物每头不少于10ml；家禽不少于3ml；制备血清自然析出或离心分离血清。血清保存制备的血清若能在一周内检测，4冷藏。若需保存较长时间，-30冻结。2、抗原抗原材料的采集、处理方法同微生物学检查材料的采集和处理。,四供病理组织学检查材料的采集、处理1.选材应选择病变部位与健康部位交界处的组织作为检材。较重要的病变要多取几块，以展示病变的发展过程。若同一器官有不同的病变，分别采取。2.采集供切片时用的组织块大小为1.5cm1.5cm0.5cm，3.固定供石蜡切片用的组织块切好后，用清水轻轻冲洗血污，立即浸入固定液中。但胃肠、胆囊、膀胱等组织不要用水冲洗。,常用的固定液有10%福尔马林溶液、95%酒精、鲍因氏液（bouni氏液）等，用量应是病料体积的510倍。固定时间通常为1224h。若需长期保存，经1224h固定以后更换一次固定液。固定时在容器底部垫以脱脂棉，以防组织粘底而固定不良。若有几个病例的组织固定在同一容器时，应把每一病例的组织块用纱布包好，附上标签再投入固定液中。供快速冰冻切片检查用的组织常不经固定，采样后尽快送检。如当天不能送出或检查，必须冻结保存，以免组织腐败和自溶。,五检疫材料的包装和运送1、包装包装容器直接包装检疫材料的容器可选择玻璃或塑料制品；运输时的外包装常用木箱、保温瓶、保温箱。所有容器必须完整无损，密封性能良好，清洁无污染。供病原学检查的容器，清洗后经干热灭菌或高压灭菌并烘干。塑料制品耐高压的高压灭菌，不耐高压的紫外线消毒或熏蒸消毒。,包装一种材料一个容器。不可将多种病料或多头家畜的病料混装在一起。一个容器装量不能过满。液体样品不能超过总容量的70。装入样品的容器必须加塞、加盖。塞子和盖子用胶布封固。液体病料在胶布外还需用溶化石蜡加封。选用塑料袋作容器，需用两层包装，分别用线结扎袋口，防止液体露出或水进入袋中。贴标签标签：样品名称、动物种类、采集时间、采集地点、样品编号等内容。,2、运送供病毒学检查的样品病毒学检材要置于保温容器（保温瓶或保温箱）中运输。血液样品要单独存放在保温瓶中，不能和其它样品混合。对冷藏样品，若能在4h内送到实验室，在保温瓶中加入冰块或冰袋，冷藏运输；否则，先将样品进行冷冻处理。对冻结的样品，必须在24h内冷藏送到实验室。若在24h内不能送到实验室，要冷冻运输，即在运输过程中样品的环境温度应保持在-20以下。各种样品到达实验室后，若暂时不进行实验，则应在-70或-70以下保存。不要反复冻融。,供细菌学和寄生虫学检查的样品经冷藏的材料并在24h内能送到，以冷藏运输或常温运输，否则必须冷藏运输。血清样品经冷藏处理的血清，在24h内能送到实验室，冷藏运送；否则，先将血清冷冻。经冷冻处理的血清，在保温箱内加大量冰袋运送，在48h内到达实验室。玻片标本和病理组织学样品常温运送。,3、采样单每一份样品或每一批样品均要有采样单。采样单一式三份，第一联，采样单位保存；第二联跟随样品；第三联，由被采样单位保存。,采样单,第五节病原学检查技术一、细菌性传染病病原检查（一）显微镜检查法1.病料处理将病料涂成薄而均匀的涂片室温下自然干燥若为细菌培养物涂片火焰固定常用的染色方法有：革兰氏染色法、美蓝染色法、瑞氏染色法和姬姆萨染色法,2.显微镜检查染色水洗后的涂片标本吸水纸吸干（切勿磨擦）或在酒精灯火焰的远端烘干滴加香柏油用油浸镜观察细菌的形态结构和染色特性。,（二）培养检查法1固体培养基上菌落性状的检查其菌落的大小、形状、色泽、表面性状、透明度、边缘性状等因菌种而异。因此，菌落特征是鉴别细菌的重要依据。2.液体培养基上液体性状的观察细菌在液体培养基中生长可使液体出现混浊、沉淀、液面形成菌膜以及液体变色、产气等现象。,（三）生化试验生化实验是利用生物化学的方法，检测细菌在人工培养繁殖过程中所产生的某种新陈代谢产物是否存在，是一种定性检测。常用的生化反应有糖发酵试验、靛基质试验、v-p试验、甲基红试验、硫化氢试验（四）动物试验最常用的实验动物有：小鼠、大鼠、豚鼠和家兔。,二病毒性传染病病原检查（一）病毒分离培养1.样品处理2.病毒分离培养（1）鸡胚接种痘病毒：绒毛尿囊膜接种，用912日龄鸡胚；鸡新城疫病毒：绒毛尿囊腔接种，用910日龄鸡胚；流行性乙型脑炎病毒：卵黄囊内接种，用68日龄鸡胚。,（2）动物组织培养在病毒分离培养中广泛采用的是细胞培养技术。单层细胞培养使细胞在器皿的表面生长出一层或数层细胞，常用于病毒的分离繁殖。悬浮细胞培养是把细胞悬浮在营养液中进行培养，这中方法可连续进行，因而用于疫苗生产。（3）动物接种同细菌学检查,（二）病毒检查方法1.包涵体检查狂犬病、伪狂犬病、犬瘟热病毒病毒的包涵体2.病毒培养性状观察鸡新城疫病毒：鸡胚全身皮肤有出血点鸡痘病毒：产生痘斑病变。细胞病变有：细胞变形皱缩，胞浆内出现颗粒，核浓缩，核裂解或细胞裂解，出现空泡。3.病毒形态学观察有直接电镜观察和免疫电镜技术。4.病毒核酸检测最常用的检测方法是聚合酶链式反应。,三寄生虫病病原检查（一）虫卵检查法1直接涂片镜检2集卵法检查：水洗沉淀、饱和盐水漂浮（二）虫体检查法1.蠕虫虫体检查法（1）成虫检查法：肉眼观察其形态特征。（2）幼虫检查法：低倍镜下观察液体中活动的幼虫。,2.蜘蛛昆虫虫体检查法（1）螨虫的检查病料置于载玻片上,滴加数滴煤油,上覆另一载玻片，用手搓动两玻片使皮屑粉碎，镜检。（2）蜱等其它蜘蛛昆虫的检查采用肉眼检查法。3.原虫虫体检查法原虫大多为单细胞寄生虫，肉眼不可见，须借助于显微镜检查。,四pcr技术简介（一）pcr技术的主要用途聚合酶链式反应（pcr）：将生物材料中微量的目的dna片段在体外扩增上百万倍，从而获得大量特异性核酸。目前，pcr技术已广泛应用于病原微生物的微量检测、突变基因筛选、法医学鉴定等与生命有关的各个领域。在动物检疫中，它主要用于微量样品和不完整病原的检测，尤其适用于个体极小、难于观察且难于人工培养的病毒的检测。,过去用常规检测技术几天甚至几周才能完成的试验，用该技术几个小时便可完成，这使禽流感等疫病的病原检测技术获得突破。并且该技术操作的每一步都不需要活的病毒，不会造成病原对环境的污染，对防疫有重大意义。（二）pcr技术的原理1pcr反应基本成分2反应原理（三）pcr技术的基本步骤（四）特异性核酸的检出,第六节免疫学检查技术一、血清学检测技术血清学检测技术种类繁多，可利用抗原抗体中已知的任何一方去检测未知的另一方，以达到检疫目的。（一）凝集反应1直接凝集反应布氏杆菌病和猪传染性萎缩性鼻炎：平板凝集和试管凝集反应；鸡白痢、鸡支原体病：