（分析化学专业论文）共振瑞利散射测定蛋白质和药物的新方法研究.pdf

中文摘要 分别为1 8 5 r i gm l ( c p a i i ) 、2 1 7 n gm l 1 ( c s g s ) 和2 7 9 n gm l ( a a m ) 。考察了 共存物质的影响，表明方法具有较好的选择性。此法可用于茶叶中水溶性蛋白 质的测定。 二某些变色酸双偶氮染料钍( ) 蛋白质体系 在p h i 4 - 1 9 的柠檬酸钠一盐酸缓冲溶液中，偶氮j l $ m ( a a m ) 、偶氮胂 m ( a a m ) 、偶氮氯膦m ( c p a m ) 和氯磺酚s ( c s p s ) 等含胂酸基、膦酸基和o 。o 一 二羟基的变色酸双偶氮染料可与金属离子钍( ) 络合形成螯合阴离子，并能进 一步与蛋白质结合形成复合物使r r s 显著增强，在4 0 0 - - 4 7 0 n m 的范围内产生 强的r r s 信号，最大散射波长均位于4 7 0 n m 处。并且散射强度分别在o 1 6 9 9 m 一( t h ( ) c p a i 体系) 、o 2 8 1 t gm l 。( t h o v ) a a m 体系) 、0 - - 2 0 p gm l 一 1 ( t h ( r v ) - a a b i 体系) 和0 0 2 8 1 t gm l 一( t h ( i v ) 一c s p s 体系) 的范围内与牛血清白蛋 a ( b s n ) 的浓度成正比，方法具有高灵敏度，对于b s a 的检出限( o - = 3 时) 分别 为1 o 7 n gm l ( t h 0 v ) 一c p a k i ) 、6 3 n gm l ( t h ( r v ) 一c s p s ) 、1 3 6 n gm l 。f t h 0 v ) 一 a a m ) 和2 2 1 n gm l 一( t h ( i v ) ，a a m ) ，均较相应的染料与蛋白质形成的二元配合 物的灵敏度大幅度提高。考察了共存物质的影响，表明方法具有较好的选择性。 方法用于人血清中蛋白质的测定，结果满意。 三钙黄绿素蛋白质体系 在p h 3 4 的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液中，钙黄绿素( c a l c e i n ) 可以与蛋白 质结合形成复合物不仅使其本身在5 0 7 n m 处的r r s 急剧增强，而且在 4 0 0 5 4 0 n m 的范围内还产生了新的共振瑞利散射，其最大i 值位于5 3 2 n m 处。 斤l i 散射强度在o 2 8 9 9 m l 。的范围内与牛血清白蛋白( b s a ) 的浓度成正比，方 法具有高灵敏度，对于不同类型的蛋白质检出限( c r = 3 时) 在4 0 0 - - 4 0 0 n gm l 。之 f n j 。考察了共存物质的影响，表明方法具有较好的选择性。用本法测定了人血 清r 的蛋白质，获得了满意的结果。 叫某些联苯双偶氮染料雷洛昔芬体系 在醋酸钠盐酸缓冲溶液中，某些酸性联苯双偶氮染料如依文恩蓝和睦利本 红以及药物雷洛昔芬各自单独存在时几乎都不产生共振瑞利散射，只在4 7 0 n m 处有很弱的散射信号。但当p h 为1 8 和1 4 时，依文思蓝和曲利本红可以分别 与雷洛昔芬结合形成离子缔合物，不仅4 7 0 n m 处的共振瑞利散射显著增强，而 且还产生了新的r r s 峰，依史思蓝体系在4 0 0 n m 和4 1 4 n m 处有强度相近的最 、 兆振瑞利散射测定蛋白质和药物的新方法研究 大散射峰；曲利本红体系在3 1 0 5 3 0 n m 范围内呈现高的散射强度，最大散射峰 位于3 9 6 n m 处。散射强度分别在o 8 3 p , gm l ( e b r a l o 体系) 和肌6 3 1 x gm l 1 ( t r r a l o 体系) 的范围内与雷洛昔芬的浓度成线性关系，方法具有高灵敏度， 对雷洛昔芬的检出限( o = 3 时) 分别1 8 9n gm l 4 和1 0 9 n gm l 一。考察了共存物 质的影响，表明方法具有较好的选择性。该方法还具有快速、简便、稳定的特 点，用于合成样品的分析，效果不错。 五某些变色酸双偶氮染料- 雷洛昔芬体系 氯磺酚s 、偶氮氯膦和雷洛昔芬本身在醋酸钠盐酸缓冲溶液中都只在 4 7 0 n m 附近有很小的散射信号，可是当p h 为1 8 时，氯磺酚s 可以与雷洛昔 芬结合，除4 7 0 r t m 处的r r s 明显增强外，在3 5 0 - - - 5 0 0 n m 范围内产生了新的强 度更高的共振瑞利散射，最大散射峰位于3 9 6 n m 处；而偶氮氯膦与雷洛昔芬 则在p h i 1 时反应不仅使4 7 0n l n 处的共振瑞利散射明显增强，并且还产生新的 r r s 信号，在4 0 0 - - , 5 0 0 n m 范围内呈现高的散射强度，最大散射峰位于4 6 8 n m 处。共振瑞利散射强度分别在o 9 4 9 9m l ( c s p s r a l o 体系) 和肛8 3 1 t gm l 。( c p a 1 1 1 r a l o 体系) 的范围内与雷洛昔芬的浓度呈正比，方法具有很高的灵敏度，对 雷洛昔芬的检出限( o = 3 时) 分别为1 4 9 n gm l l l 和9 4 8 n gm l 。我们研究了体系 的r r s 光谱和吸收光谱特征，反应的适宜条件和主要影响因素，同时考察了共 存物质的影响，常见金属和糖类均不干扰测定。方法灵敏、简便、快速、选择 性好。 六依文思蓝西地那非体系 在酸性介质中，依文思蓝能与西地那非反应导致溶液的r r s 明显增强，并 产新的r r s 光谱。在3 0 0 6 0 0 n m 范围内呈现强的散射强度，并且分别在3 6 5 n m 和5 5 0 n m 处出现了两个明显的较大的散射峰，而以3 6 5 n m 处的散射信号最强。 共振瑞利散射强度在0 1 0 7 t t gm l 1 的范围内与西地那非的浓度呈正比，方法线 性范围宽，灵敏度高，对西地那非的检出限( o = 3 时) 为3 7 2 r i gm l 。本文研究 了依文思蓝与西地那非相互作用的共振瑞利散射光谱特征和吸收光谱特征，探 讨了它们发生反应的最佳实验条件和主要的影响因素。同时考察了共存物质的 影响，表明体系的选择性也不错，从而建立了一种快速、简便、灵敏、实用的 测定西地那非的新方法。方法用于合成样品中西地那非含量的测定，回收率在 l 9 4 2 1 0 i 9 之间，得到了比较满意的结果以 f j a 英文摘要 a s t u d y o nt h en e wm e t h o d sf o rt h ed e t e r m i n a t i o no fp r o t e i n s a n dp h a r m a c e u t i c a l s b y r e s o n a n c e r a y l e i g hs c a t t e r i n g a b s t r a c t r e s o n a n c er a y l e i g hs c a t t e r i n g ( r r s ) m e t h o di san e w q u a n t i t a t i v ea n a l y t i c a l t e c h n i q u ew h i c hh a sp r o g r e s s i v e l yd e v e l o p e ds i n c e1 9 9 0 s i nr e c e n ty e a r s ，r r s m e t h o dh a sb r o u g ht om o r ea n dm o r ea t t e n t i o n sb e c a u s eo fi t ss i m p l e o p e r a t i o n ，h j 曲 s e n s i t i v i t ya n df a i r l yg o o ds e l e c t i v i t y i th a sb e e nm a i n l ya p p l i e di nb i o l o g i c a l m a c r o m o l e c u l e sa n d i n o r g a n i ci o n s i nc e r t a i nc o n d i t i o n s ，p r o t e i n se x i s ta sab i gp o s i t i v ei o n i tc a nr e a c tw i t h a n i o nw h i c hh a sc o u n t e rc h a r g e sa n dt h e nl e a d st ot h es i g n i f i c a n te n h a n c e m e n to f r r sa sw e l la st h ea p p e a r a n c eo fn e wr r s s p e c 仃a i nv i e wo ft h i s ，w ef o u n do u t t h r e en e w s y s t e mt h a tc o u l db eu s e di np r o t e i n sd e t e r m i n a t i o n , a n ds t u d i e dt h er r s s p e c m lc h a r a c t e r i s t i c s ，t h ea f f e c t i n gf a c t o r s ，t h ep r o p e r t i e so fa n a l y t i c a lc h e m i s t ya n d t h e i ra n a l y t i c a la p p l i c a t i o n s p h a r m a c e u t i c a la n a l y s i si sa ni m p o r t a n tc o n t e n to fa n a l y t i c a lc h e m i s t r y , b u ts o f a rt h e r ei sal i t t l es t u d i e sw h i c hu s er r sm e t h o d i nc e r t a i nc o n d i t i o n s ，s o m e m e d i c i n e se x i s ta sb i gc a t i o no ra n i o n ，a n ds o m e d y e sc o e x i s ta sb i gi o nw i t hc o u n t e r c h a r g e t h e yc a nc o m b i n ee a c ho t h e ra n dt h e nr e s u l ti nt h es i g n i f i c a n te n h a n c e m e n t o fr r sa n dt h ea p p e a r a n c eo fn e w s p e c t r ao f r r s b a s e do nt h i s ，w er e s e a r c h e d t h ei n t e r a c t i o no ft w on e wm e d i c i n e sw h i c hn a m e dr a l o x i f e n ea n ds i l d e n a f i lw i t h t w ok i n do fa c i d i cb i s a z od y e sa n df o u n do u ts o m en e w s y s t e m s t h a tc o u l db eu s e dt o d e t e r m i n et h o s em e d i c i n e s t h er r s s p e t r a lc h a r a c t e r i s t i c s ，t h ep r i m a r yi n f l u e n t f a c t o r s ，t h ep r o p e r t i e so fa n a l y t i c a lc h e m i s t r ya n dt h ea n a l y t i c a la p p l i c a t i o no fe v e r y s y s t e mh a v eb e e n s t u d i e dt o o t h u sw es e tu ps o m en e ws i m p l e ，q u i c ka n d s e n s i t i v em e t h o d st od e t e r m i n et h et w om e d i c i n e s b y r r s t e c h n i q u e 1 s o m eb i s a z od y e so f c h r o m o t r o p i c a c i d - p r o t e i n s s y s t e m s i ns o d i u mc i t r i ca c i d h c ib u f f e rs o l u t i o n ( p h 3 4 4 o ) ，s o m eb i s a z od y e so f c h r o m a t r o p i ca c i ds u c ha sa r s e n a z om ( a a m ) ，c h l o m p h o s p h o n a z om ( c p a m ) a n d c h l o r o s u l p h o n p h e n o ls ( c s p s ) c o m b i n ew i t hp r o t e i n s ，c a u s i n ge n h a n c e dr r s i nt h e 4 共振瑞利散射测定蛋白质和药物的新方法研究 r a n g eo f4 0 0 - - 4 7 0 n ma n dt h em a x i m u mr r sp e a l ( a t4 7 0 n m t h e i rc a l i b r a t i o n g r a p h sa r el i n e a ro v e rt h er a n g eo f0 3 6 1 1 9m l f o rc p a i 一b s as y s t e m ，0 3 8 p g m l lf o ra a m b s as y s t e ma n d0 - - 4 8 l a gm l f o rc s p s b s as y s t e ms e p a r a t e l y t h em e t h o dh a sh i g i ls e n s i t i v i t yw i t ht h ed e t e c t i o nl i m i t so fb s a ( o = 3 ) i s1 8 5 n g m l ( c p a i i i ) ，21 7 n gm l ( c s p s ) a n d2 7 9 n gm l 。( a a m ) ，a n ds e l e c t i v i t yi sf a i r l y g o o dw i t ht h ei n v e s t i g a t i o nf o rt h ei n f l u e n c eo f s o m ec o e x i s t i n gs u b s t a n c e s t h i s m e t h o dc a nb e a p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o n o f w a t e r - s o l u b l e p r o t e i n si nt h et e a 2 s o m eb i s a z od y e so fc h r o m o t r o p i ca c i d - t h ( i v ) c h e l a t ew i t hp r o t e i n s s y s t e m s i np h l 4 - 1 9a c i d i cs o l u t i o n ( s o d i u mc i t r a t e h y d r o c h l o r i d eb u f f e r ) ，s o m eb i s a z o d y e s o fc h r o m o t r o p i ca c i ds u c ha s a r s e n a z o ( a a ) ，a r s e n a z om ( a a m ) ， c h l o r o p h o s p h o n a z om ( c p a m ) a n dc h l o r o s u l p h o n p h e n o ls ( c s p s ) c a nr e a c tw i t h t h ( r v ) t of o r m t h ec o r r e s p o n d i n gc h e l a t ea n i o n a n dt h e nf u r t h e ri n t e r a c tw i t l ls o m e p r o t e i n st op r o d u c eat e r n a r yc o m p l e x ，c a u s i n gs i g n i f i c a n t l ye n h a n c e dr r s i nt h e r a n g eo f4 0 0 - 4 7 0 n ma n dt h em a x i m u mr r sp e a ka t4 7 0 n m t h e i rc a l i b r a t i o n g r a p h s a r el i n e a ro v e rt h e r a n g e o f0 - 1 6 p gm l 。f o rt h ( i v ) 一c p a i i s y s t e m ， 0 - 2 8 p gm l f o rt h ( i v ) 一a a ms y s t e m 0 2 0 l a gm l f o rt h ( i v ) a a i i is y s t e ma n d 0 - 4 ) 2 8 p g m l 。f o rt h ( i v ) 一c s p s s y s t e ms e p a r a t e l y t h e m e t h o dh a s h i g h s e n s i t i v i t y , a n dt h e d e t e c t i o nl i m i t so fb s a ( o2 3 ) i s 1 0 7 n gm l 。( t h ( ) 一c p a m ) ， 6 3 n gm l ( t h ( i v ) 一c s p s ) ，1 3 6 n gm l 。( t h ( i v ) a a m ) a n d2 2 1 n gm l l ( t h ( i v ) 一 a a m ) r e s p e c t i v e l y , a l lo f t h e ma r em u c hw e l lt h a nt h a to ft h ec o r r e s p o n d i n gb i n a r y c o m p l e x e s t h e s e l e c t i v i t yo fa b o v es y s t e m si sf a i r l yg o o dw i t ht h ei n v e s t i g a t i o n f o rt h ei n f l u e n c eo ns o m e c o e x i s t i n gs u b s t a n c e s t h i s m e t h o dc a nb ea p p l i e dt ot h e d e t e r m i n a t i o no f p r o t e i n si nh u m a ns e r u m 3 c a l e e i n - p r o t e i n ss y s t e m i nt h em e d i u mo fn a 2 h p 0 4 _ c i t r i ca c i db u f f e r ( p h 3 4 ) ，c a l c e i nc o m b i n e dw i t h p r o t e i n ，e n h a n c e d i t s e l fr r sa t5 0 7 u r na n dc a u s e dn e wr r si nt h e r a n g e o f 4 0 0 5 4 0 n m t h em a x i m u mv a l u eo f ii s5 3 2 n m i t sc a l i b r a t i o ng r a p h si sl i n e a r o v e rt h er a n g eo f 0 - 2 8 p gm l t h e m e t h o dh a sh i g h s e n s i t i v i t yw i t h t h ed e t e c t i o n l i m i t s ( o = 3 ) i si nt h er a n g eo f4 0 0 - 4 0 0 n gm l l f o rd i f f e r e n tp r o t e i n ，a n ds e l e c t i v i t y 5 英文摘要 i sf a i r l yg o o dw i t ht h ei n v e s t i g a t i o nf o rt h ei n f l u e n c eo fs o m e c o e x i s t i n gs u b s t a n c e s t h i sm e t h o dc a nb e a p p l i e d t ot h ed e t e r m i n a t i o no f p r o t e i n si nh u m a ns e r u m 4 s o m ea c i db e n z i d i n eb i s a z od y e s r a l o x i f e n e s y s t e m s i nn a a c h c ls o l u t i o n ，s o m ea c i db e n z i d i n eb i s a z od y e ss u c ha se v a n s b l u e ( e b ) a n dt r y p a nr e d ( t r ) a sw e l la sm e d i c i n er a l o x i f e n ec a n h a r d l yp r o d u c er r sw h e n t h e ya r ei n d e p e n d e n te x c e p tf o rav e r yw e a k r r s p e a k a t4 7 0 n m b u ta tp h i 8a n d p h i 4 ，e b a n dt rc o m b i n ew i t hr a l o x i f e n et of o r mi o n - a s s o c i a t i o n c o m p l e x s e p a r a t e l y , t h i sn o to n l yr e s u l t si nt h eg r e a te n h a n c e m e n to f r r sa t4 7 0 n m ，b u ta l s o e m e r g e ss o m en e w r r s s p e t r a t h e r ea r em a x i m u mr r sp e a k sw h i c h a r es i m i l a r i ni n t e n s i t ya t4 0 0 n ma n d4 1 4 n mf o re bs y s t e m t h e l a r g ee n h a n c e m e n to fr r s i n t e n s i t yo f t r s y s t e ma p p e a r si nt h er a n g eo f3 1 0 一- 5 3 0 n ma n dt h em a x i m u mr r s p e a k a t3 9 6 n m t h e i rc a l i b r a t i o ng r a p h sa r el i n e a ro v e rt h er a n g eo f o 8 3 p gm l 。 f o re b - r a l o x i f e n es y s t e ma n do 6 3 p gm l f o rt r - r a l o x i f e n es y s t e ms e p a r a t e l y t h em e t h o dh a sh i l g h s e n s i t i v i t yw i t ht h ed e t e c t i o nl i m i t so fr a l o x i f e n e ( o = 3 ) i s 1 8 9 n gm l 。1 ( e b ) a n d1 0 9 n gm l 。( t r ) ，a n ds e l e c t i v i t y i s f a i r l yg o o dw i t h t h e i n v e s t i g a t i o nf o rt h ei n f l u e n c eo f s o m ec o e x i s t i n gs u b s t a n c e s t h em e t h o di sn o t e d f o ri t s q u i c k n e s s ，s i m p l i c i t y a n ds t e a d i n e s sa n da p p l i e di nt h ed e t e r m i n a t i o no f r a l o x i f e n ei ns y n t h e t i cs a m p l e sw i t i lp l e a s e dr e s u l t s 5 s o m eb i s a z od y e so fc h r o m o t r o p i ca c i d r a l o x i f e n es y s t e m s s o m eb i s a z od y e so f c h r o m o t r o p i ca c i ds u c ha sc h l o r o p h o s p h o n a z om ( c p a m ) a n d c h l o r o s u l p h o n p h e n o ls ( c s p s ) a sw e l l a sm e d i c i n er a l o x i f e n ec a l l h a r d l y p r o d u c er r se x c e p t f o rav e r yw e a kr r sp e a kn e a r b y4 7 0 n mw h e nt h e ya r e i n d e p e n d e n ti nn a a c h c l b u f f e rs o l u t i o n b u tw h e nc s p sr e a c t sw i t hr a l o x i f e n e a tp h i 8 ，t h er r s o f4 7 0 n mi si n c r e a s e do b v i o u s l y ，m e a n w h i l e ，m o r ei n t e n s i v er r s c o m eo u ti nt h er a n g eo f3 5 0 - 5 0 0 n ma n dt h em a x i m u mr r sp e a ka t3 9 6 n m b u t w h e nc p a i l lr e a c t sw i t hr a l o x i f c n ea t p h l 1 ，n o to n l y r e s u l t si nt h e g r e a t e n h a n c e m e n to fr r sa t4 7 0 h m ，b u ta l s oe m e r g e ss o m en e wr r ss p e t r aa n dt h el a r g e e n h a n c e m e n to fr r s i n t e n s i t ya p p e a r si nt h er a n g eo f 4 0 0 - 5 0 0 r m la n dt h em a x i m u m r r s p e a ka t4 6 8 n m t h e i r c a l i b r a t i o ng r a p h sa r el i n e a ro v e rt h er a n g eo f0 - 9 4 p g m l f o rc s p s r a l o x i f e n es y s t e ma n d0 - 83 l a gm l _ f o rc p a i i i r a l o x i f e n es y s t e m 6 共振瑞利散射测定蛋白质和药物的新方法研究 s e p a r a t e l y t h em e t h o dh a sh i 曲s e n s i t i v i t yw i t h t h ed e t e c t i o nl i m i t so fr a l o x i f e n e ( o = 3 ) i s1 4 9 n gm l 。( c s p s ) a n d9 4 8 n gm l 。( c p a m ) w er e s e a r c h e dt h e r r s s p e c t r aa n da b s o r p t i o ns p e c t r ac h a r a c t e r i s t i c s ，t h es u i t a b l ec o n d i t i o na n d t h ep r i m a r y e f f e c t i v ef a c t o r so ft h er e a c t i o n ，a tt h es a l t l et i m ew ei n v e s t i g a t e dt h ei n f l u e n c eo f c o e x i s t i n gs u b s t a n c e ，f o u n dt h a tc o m m o n m e t a li o n sa n dc a r b o h y d r a t eh a dn oe f f e c t o nt h ed e t e r m i n a t i o n t h em e t h o di sn o t e df o ri t ss e n s i t i v i t y , q u i c k n e s s ，s i m p l i c i t y a n d f a i r l yg o o ds e l e c t i v i t y 6 e v a n sb l u e - s i l d e n a f i ls y s t e m i na c i d i cm e d i u m ，w h e ne v a n sb l u e ( e b ) r e a c t s 、v i t l ls i l d e n f i l ，i tc a nl e a dt oa l a r g e e n h a n c e m e n to fr r sa n dt h ea p p e a r a n c eo fn e wr r ss p e t r a t h el a r g e e n h a n c e m e n to fr r si n t e n s i t ya p p e a r si n t h er a n g eo f3 0 0 6 0 0 n ma n dt w o c o n s i d e r a b l er r s p e a k sp r e s e n ta t3 6 5 n m a n d5 5 0 n mw h i l et h e p e a l 【a t3 6 5 n m i s h i g h e r t h ei n t e n s i t y o fr r si s d i r e c t l yp r o p o r t i o n a l t ot h ec o n c e n t r a t i o no f s i l d e n a f i li nt h er a n g eo f o 1 0 7 p gm l 一t h e m e t h o dh a sh i g hs e n s i t i v i t ya n dt h e d e t e c t i o nl i m i to fs i l d e n a f l li s3 7 2 n gm l t h er r ss p e t r a ，t h ea b s o r p t i o ns p e t r a c h a r a c t e r i s t i c s ，t h eo p t i m u me x p e r i m e n t a lc o n d i t i o n s ，a n dt h ep r i m a r yi n f l u e n tf a c t o r s o ft h er e a c t i o nb e t w e e ne ba n ds i l d e n a f l la l lh a v eb e e nr e s e a r c h e d t h es e l e c t i v i t y i sf a i r l yg o o dw i t ht h ei n v e s t i g a t i o nf o rt h ei n f l u e n c eo ns o m ec o e x i s t i n gs u b s t a n c e s s ow eh a v ee s t a b l i s h e dan e wq u i c k ，s i m p l e ，s e n s i t i v ea n dp r a c t i c a lm e t h o d t h a tc a l l b eu s e dt od e t e r m i n es i l d e n a f i la n di th a sb e e na p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no f s i l d e n a f i li ns y n t h e t i cs a m p l ew i t hs a t i s f i e dr e s u l t s 7 某些变色酸双偶氮染料一蛋白质体系 实验部分 第一部分蛋白质的测定 一某些变色酸双偶氮染料。蛋白质体系 在p h 3 4 - 4 0 的柠檬酸钠盐酸缓冲溶液中，除了偶氮胂( a a m ) ) b ，偶氮 胂m ( a a m ) 、偶氮氯膦i i i ( c p a m ) 和氯磺酚s ( c s p s ) 等含胂酸基、膦酸基和o , 0 二羟基的变色酸偶氮染料以及蛋白质本身的共振瑞利散射( r r s ) 均十分微弱， 但这些染料与蛋白质结合形成复合物时能使r r s 急剧增强，在4 0 0 - - 4 7 0 n m 的 范围内呈现高的散射强度。其最大散射波长均位于4 7 0 n m 处。并且散射强度分 别在0 - 3 6 p , gm l l ( c p a m 体系) ，0 3 8 1 t gm l 。( a a m 体系) 和0 - - 4 8 1 - t gm l 。1 ( c s p s 体系) 的范围内与牛血清白蛋e i ( b s a ) 的浓度成正比，方法具有高灵敏度，对于 b s a 的检出限( o = 3 时) 分别为1 8 5 n g m l 1 ( c p a m ) ，2 1 7 r i gm l l ( c s p s ) 和2 7 9 n g m l 一( a a m ) 。对反应体系的r r s 光谱特征，适宜的反应条件，主要影响因素等 进行了比较研究。并以c p a m 体系为例考察了共存物质的影响，表明方法具有 较好的选择性。方法灵敏，简便，快速，可用于茶叶中水溶性蛋白质的测定。 i 实验部分 1 1 仪器和主要试剂 岛津r f 一5 4 0 型荧光分光光度计，测定时采用狭缝5 n m ，低灵敏度；u v 8 5 0 0 型紫外可见分光光度计( 天美公司) 。 蛋白质标准溶液：牛血清白蛋白( b o v i n es e r u ma l b u m i n ，b s a ，上海丽珠东 风生物技术有限公司) 2 0 峙m l ；人血清白蛋( h u m a ns e r u ma l b u m i n ，h s a ， i j 生部上海生物制品研究所) 2 7 p gm l 一；a - 糜蛋白酶( 一c h y m o t r y p s i n ，d c h y ， i g m 公司) 5 5 烬m l ；卵白蛋i ! t ( o v a l b u m i n ，o v a ，s i g m a 公司) 2 6 肛gm l ；溶 菌酶( l y s o z y m e ，l y s ，华美生物工程公司) 2 0 烬m l ：胃蛋白酶( p e p s i n ，p e p ， 华美生物工程公司) 3 4 肛g m l ；胰蛋白酶( t r y p s i n ，t r y ，华美生物工程公司) 3 7 嵋 某些变色酸双偶氮染料一蛋白质体系 实验部分 第一部分蛋白质的测定 一某些变色酸双偶氮染料。蛋白质体系 在p h 3 4 - 4 0 的柠檬酸钠盐酸缓冲溶液中，除了偶氮胂( a a m ) ) b ，偶氮 胂m ( a a m ) 、偶氮氯膦i i i ( c p a m ) 和氯磺酚s ( c s p s ) 等含胂酸基、膦酸基和o , 0 二羟基的变色酸偶氮染料以及蛋白质本身的共振瑞利散射( r r s ) 均十分微弱， 但这些染料与蛋白质结合形成复合物时能使r r s 急剧增强，在4 0 0 - - 4 7 0 n m 的 范围内呈现高的散射强度。其最大散射波长均位于4 7 0 n m 处。并且散射强度分 别在0 - 3 6 p , gm l l ( c p a m 体系) ，0 3 8 1 t gm l 。( a a m 体系) 和0 - - 4 8 1 - t gm l 。1 ( c s p s 体系) 的范围内与牛血清白蛋e i ( b s a ) 的浓度成正比，方法具有高灵敏度，对于 b s a 的检出限( o = 3 时) 分别为1 8 5 n g m l 1 ( c p a m ) ，2 1 7 r i gm l l ( c s p s ) 和2 7 9 n g m l 一( a a m ) 。对反应体系的r r s 光谱特征，适宜的反应条件，主要影响因素等 进行了比较研究。并以c p a m 体系为例考察了共存物质的影响，表明方法具有 较好的选择性。方法灵敏，简便，快速，可用于茶叶中水溶性蛋白质的测定。 i 实验部分 1 1 仪器和主要试剂 岛津r f 一5 4 0 型荧光分光光度计，测定时采用狭缝5 n m ，低灵敏度；u v 8 5 0 0 型紫外可见分光光度计( 天美公司) 。 蛋白质标准溶液：牛血清白蛋白( b o v i n es e r u ma l b u m i n ，b s a ，上海丽珠东 风生物技术有限公司) 2 0 峙m l ；人血清白蛋( h u m a ns e r u ma l b u m i n ，h s a ， i j 生部上海生物制品研究所) 2 7 p gm l 一；a - 糜蛋白酶( 一c h y m o t r y p s i n ，d c h y ， i g m 公司) 5 5 烬m l ；卵白蛋i ! t ( o v a l b u m i n ，o v a ，s i g m a 公司) 2 6 肛gm l ；溶 菌酶( l y s o z y m e ，l y s ，华美生物工程公司) 2 0 烬m l ：胃蛋白酶( p e p s i n ，p e p ， 华美生物工程公司) 3 4 肛g m l ；胰蛋白酶( t r y p s i n ，t r y