清热达郁颗粒中挥发油包合工艺研究.doc

清热达郁颗粒中挥发油包合工艺研究 作者：金勇，尚丽霞，张英俊，尹寿玉【摘要】 目的采用超声波法研究清热达郁颗粒中挥发油的-环糊精包合物制备工艺。方法用正交设计实验考察最佳包合工艺。结果最佳包合工艺为-环糊精与混合挥发油比例为91，包合温度20，包合时间20 min，超声波频率为30kHz。结论此包合工艺合理，可行。 【关键词】 环糊精； 挥发油； 包合物； 清热达郁颗粒清热达郁颗粒由清热达郁汤改制而成。清热达郁汤收载于现代名中医内科绝技(修订版)1，由生地，知母、丁香、桂枝等10味药材组成，具有平调阴阳、清热达郁之功效，用于治疗各种血液病、肝硬化、腹水、水肿、水毒证、妇女月经不调、不孕等症。方中丁香和桂枝所含挥发油，易挥发，对光和热不稳定，用量不易控制。为此，本实验研究CD包合工艺。1 仪器与材料 AS3120A超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司），挥发油提取器（上海玻璃仪器厂），丁香、桂枝购至吉林省延吉市成大药材公司（经鉴定为樟科植物桂枝和桃金娘科植物丁香），CD（国药集团化学试剂有限公司），其它试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 清热达郁颗粒挥发油溶液的制备按处方称取丁香和桂枝药材适量，加8倍量水，安装挥发油装置，提取6 h，收集挥发油，配制成挥发油无水乙醇(11)的溶液备用。2.2 挥发油包合工艺的研究2.2.1 包合物制备称取干燥后的-CD适量置具塞三角瓶中，加适量蒸馏水，加热溶解，自然放置至规定温度。精密量取“2.1”项的备用液适量，充分振摇后，超声处理，冷藏（4）24 h以上，抽滤，滤饼用少量水和石油醚清洗，40恒温干燥4 h，得白色粉末状CD包合物。2.2.2 包合物中挥发油量的测定将所得包合物按2005年版中国药典2附录“挥发油测定法”项下甲法进行提取，至油量不再增加时停止加热，放置1 h后读取挥发油量。2.2.3 挥发油空白回收率的测定精密量取2 ml挥发油置圆底烧瓶中，加水250 ml，连接挥发油提取器，加热，至油量不再增加时停止加热，放置1 h后读取所收集挥发油毫升数，按下式计算，得空白回收率为90（n=3）。 空白回收率（%）=收集挥发油的量加入挥发油的量100%2.2.4 包合物工艺因素及水平的选择根据预试验选择-CD与油比例（A）、包合时间（B）、包合温度（C）、频率（D）为考察因素，每个因素设3个水平，以挥发油的包合率、包合物收率为评价指标3，4（权重系数分别为0.7，0.3），进行L9（34）正交实验。其包合率、收率、综合评分计算方法如下，各因素水平见表1。表1 L9（34）正交实验因素水平（略） 包合物收率（%）=挥发油包合物重量-环糊精重量+挥发油重量100% 挥发油包封率（%）=包合物中挥发油回收量加入挥发油量空白回收率100% 综合评分=0.7(包合率/包合率max)+0.3(包合物收率/包合物收率max)2.2.5 正交实验结果与方差分析结果见表23。由表2、3直观分析和方差分析可知，影响挥发油包合率的各因素作用主次为ADBC；A因素具有显著影响（P0.05），B、C、D因素无显著影响P0.05）；最佳包合工艺为A3B1C1D2，即CD挥发油的比例为91，包合温度20，包合时间20 min，频率为30 kHz。表2 正交实验及结果，表3 方差分析表（略）。2.2.6 验证试验精密吸取挥发油，按最佳包合工艺制备包合物，得包合率和收率分别为95.15，76.67（n=3）。2.3 包合物鉴别2.3.1 薄层色谱法分别取丁香、桂枝药材适量，提取挥发油，加醋酸乙酯1.0 ml，混匀，作为丁香、桂枝对照药材溶液；取混合挥发油CD包合物约1 g，加醋酸乙酯1.0 ml，浸渍30 min，取上清液作为包合物溶液；取混合挥发油CD包合物，按前述挥发油提取方法提取挥发油，取回收的挥发油0.01 ml，加醋酸乙酯1.0 ml，混匀，作为回收挥发油溶液； 取未包合的混合挥发油0.01 ml，加醋酸乙酯1.0 ml，混匀，作为混合挥发油溶液；照薄层色谱法2试验，分别吸取上述5种溶液点于同一硅胶G板上，以石油醚（6090）醋酸乙酯（91）展开，取出，晾干，喷以5香草醛硫酸溶液，105加热至斑点清晰。见图1。结果表明，混合挥发油、回收挥发油薄层色谱在与丁香、桂枝药材薄层色谱相应位置处均显相同颜色斑点，而包合物无此斑点，说明已形成一种新的物相，外部基本无游离挥发油。2.3.2 显微成像法取含挥发油的包合物，及按最佳工艺制备的不含挥发油的空白包合物各少许，用水装片，置显微镜下观察。见图2。结果表明空白包合物为结晶性粉末，规则的半透明板状结晶。含油的包合物为无定型的粉末或含有黑色物质的不透明的块状物。说明挥发油已包裹在-CD的分子空穴中形成了新的物相。3 讨论 本实验中曾采用单因素实验法考察挥发油提取工艺中的药材粉碎度（饮片与10目筛）、加水量（8倍，10倍）、浸泡时间（0，4，12 h）、提取时间对挥发油提取率的影响，结果显示只有提取时间对挥发油量有影响，且提取6 h后挥发油量不再增加，因此确定挥发油提取工艺为加水8倍量，提取6 h。 本实验采用超声波法制备的清热达郁颗粒中挥发油的-CD包合物，具有包封率高、包合时间短、操作方便等优点。用包合技术将挥发油包合于-CD内，使挥发油由液态变为固体粉末，便于进一步制剂；避免了挥发油与外界分子接触、发生分解或氧化等反应，减少了挥发油在制剂存储过程中的耗散