大黄中药材的毒性研究.doc

毕毕业业论论文文 GRADUATE THESIS 论论文文题题目：大黄中目：大黄中药药材的毒性研究材的毒性研究 学生姓名：学生姓名：XXX 专业专业班班级级： ：11 级级 学学 院：院： 指指导导教教师师： ：XX 教授教授 2015 年年 5 月月 30 日日 _ 精品资料 摘 要 据初步统计，目前我国共有大约 8000 多种中药制剂，而在这所有中药制剂 中约有 800 多种制剂里面存在大黄的成分，大黄是我国四种常用药材中最常用 的一种，可见大黄是治疗许多疾病中非常重要的一味药材，并且被广泛应用于临 床治疗上。大黄与人参、附子、熟地并称中药“四大金刚”，大黄在中药材所占据的 地位有目共睹。但是根据以往的观测和研究，发现大黄有可能会导致肝脏中毒或 者有致癌的潜在风险，但是到目前为止，对大黄中主要成份的毒性比较研究，以 及不同地区大黄关于毒性机制研究报道却很少。 大黄在临床治疗上应用非常地广泛，通常情况下使用大黄是没有风险的，但 是长时间的或者过多的摄取则会出现一些毒性反应，因此，本篇论文将采用整体 动物实验、DNA 的微阵列技术等方法研究分析相关数据和并探讨研究产自不同 地区的大黄的胃肠毒性，以及大黄中主要成分的毒性研究，并通过科学合理使用 炮制，配伍和统一品种等解毒机制，整理一份大黄质量标准。从而加强对此类药 物的不良反应的改善，为大黄的广泛使用和加快中药现代化提供一些参考依据。 关关键词键词： ：大黄；毒性；现代研究；减毒对策 Abstract II Abstract According to statistics, currently there are more than 8000 kinds of traditional Chinese medicine preparation, and in all the traditional Chinese medicine agent about 800 kinds of reagents are rhubarb, rhubarb is Chinas four kinds of common traditional Chinese medicine is the most commonly used a, visible rhubarb is very important in many diseases of medicinal treatment, and is widely used in clinical medicine. Rhubarb and aconite, radix ginseng, Chinese medicine and said big four, Chinese herbal medicine of Rhubarb in the position of be obvious to people. But according to the previous observation and research, found that rhubarb could lead to liver toxic or carcinogenic potential, but so far, a comparative study on the toxicity of the main components in rhubarb, and different areas rhubarb research reports on the mechanisms of toxicity are few. Rhubarb is widely used in clinical trials, general use of rhubarb is not dangerous, but often eat too much or may have some toxicity, therefore, analysis of relevant data and to explore and study from the side effects of Rhubarb in different regions of the gastrointestinal is consistent with the microarray technology to study the method of this paper will use the whole animal experiment, DNA, through the discussion and Research on the main components, toxicity in rhubarb, rhubarb finishing a quality standard, through processing, compatibility and unification of varieties and other methods, strengthen the adverse reactions to these drugs improve, to provide some reference for the widespread use of rhubarb and accelerate the modernization of traditional Chinese medicine. Keywords: Rhubarb; toxicity; modern research; attenuated Countermeasures _ 精品资料 目 录 摘 要.I ABSTRACT .II 第 1 章 绪论.1 1.1 大黄的临床反应.1 1.2 研究的目的与意义.2 第 2 章 掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄 .3 2.1 植物形态.3 2.1.1 掌叶大黄.3 2.1.2 唐古特大黄.3 2.1.3 药用大黄.3 2.2 产地分布.3 2.3 掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄毒性试验比较.3 第 3 章 大黄毒性反应现代研究.5 3.1 阻滞脾胃、损耗元气.5 3.2 肝损害.5 3.3 继发性便秘.5 3.4 肾损伤.6 3.5 三致作用.6 3.6 长期毒性研究.6 3.7 影响细胞信号转导通路引起的毒性研究.7 第 4 章 减毒对策.8 4.1 规范品种，统一标准.8 4.2 炮制减毒.8 4.3 配伍减毒.8 4.4 其他.9 结 论.10 参考文献.11 谢 辞.13 注 释.14 附 录.15 _ 精品资料 第 1 章 绪论 中药材的使用在我国已经有了几千年的历史，是我国中医药学上重要的组 成部分。从古至今，传统中药材对人类的健康做出了至关重要的贡献，广受患者 的一致好评。尤其是最近几年，中医药已经不仅仅在中国传统医学上占有一席之 地，WHO 也已经开始留意中药材对人类的健康的影响。中药的安全有效性被越 来越多的国家所认可。因此，许多国家希望通过于 WHO 合作，以达到对自己国 家卫生部门草药安全性和有效性的鉴定。但是传统的中药材均是根据以前的经 验应用于临床治疗，却没有足够的科学依据作为参考。虽然在目前医疗保健系统 中，中药以有全性高、副作用相对小的优势著称，但是俗话说，“是药三分毒”，只 要是药，都具有两面性，每一种中药的临床反应都是不一样的，传统医药学与机 体之间也同样具有两面性：一方面指的是用药后可以提高生理机能，对于患者的 治疗产生积极的治疗作用；另一方面，用药后造成一些意外反应用，从而进一步 对身体产生有害的影响。 1.1 大黄的临床反应 大黄属于多年生草本植物，主要功能是泻下，我国现存在 45 个品种和 2 个 亚种大黄，但是目前能载入药典的大黄品种只有 3 种，即药科植物掌叶大黄和 药用大黄、唐古特大黄。我国最常用的四大药材其中就包括大黄，可见，大黄不 仅是治疗普通疾病的重要药材，并且在一些疑难杂症方面，大黄也显示出了非常 重要作用，因此大黄在我国医药上使用越来越广泛。 大黄的使用要追溯到二千多年前，是中国传统中药材中最常用同时也是最 第 1 章 绪论 2 古老的一种药材。因为大黄的主要功能是泻下，同时随着人们对健美和时尚追求 的提高，许多大黄中成药在减肥、美容等方面越来越受到推崇。调查发现，市场 上大部分的排毒养颜胶囊都含有大黄，但曾因长时间服用而导致继发性便秘，被 消费者告上法庭。中药辞海研究表明：因突然停止用药，不同程度地出现继发 性的便秘的原因是它作用靶器官可能是结肠，不仅会影响结肠神经、细胞，还会 使结肠黑发生病变，而且同时会增加细胞的癌变的概率。中科院药物研究表明， 大黄的作用不仅具有活血解毒、逐癖通经、祛热通肠的功用，还具有一定的抗肿 瘤的作用，但一旦长时间服用，在某种程度上，这类药品会像毒品一样，让人产 生依赖性甚至成瘾，从而导致一系列的不良反应。因此，在用于临床治疗时不可 高剂量和长时间用药，亦不可经常用药。 在当前的临床治疗中，因为很少出现因服用大黄而直接或者间接造成中毒 的事件，并且合适剂量的大黄还具有利尿等作用，所以被广泛地用于治疗肾功能 不全、肝炎和慢性肾炎等疾病1。 1.2 研究的目的与意义 目前一些文献表明，长时间或大剂量服用大黄可能会使肝肾中毒，甚至有致 癌的潜在风险，但到目前为止结论仍然是一个巨大的争议，因为目前仅限于对大 黄单一成分如大黄素的长期毒性的研究，并且这些研究仅仅是针对于某一些动 物，实验结论有一定的局限性。而中医的治疗需要多个因素共同作用，因此，对 大黄多种主要成分的毒性研究是十分必要的；到目前为止大黄中分离鉴定元素 达 80 余种，但是对大黄毒性成分研究也仅限于以蒽醌，蒽醌类等的毒性的比较 和研究2。而对大黄药理学和毒理学活性等却未见文献报道，大黄的主要毒性物 _ 精品资料 质基础不明确，没有明确具体的毒理机制3。所以利用整体动物实验，体外毒性 试验并结合 DNA 的微阵列技术，全面系统地研究毒性大黄，寻找主要毒性靶器 官以及大黄的主要有毒物质成分，探讨其可能的毒性机理才是进一步深入研究 大黄毒性的重点方向。另外通过比较不同种类以及不同地区的大黄之间的毒性 研究，根据研究结果，对大黄毒性进行客观真实性的综合评价，为临床安全用药 规范适应人群，及大黄的合理的使用剂量和治疗，以及对所谓的含有蒽醌类和其 他有毒成分的中药研究与示范的安全评价提供参考依据，保障科学中药的巨大 优势和良好的信誉，促进我国医药产业的健康、可持续发展。 第 2 章 掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄 4 第 2 章 掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄 2.1 植物形态 2.1.1 掌叶大黄 多年生草本，茎高 2 米。基生叶宽卵形，掌状 5-7 中裂，裂片呈窄三角形。圆 锥花序顶生，花紫红色。瘦果三棱状，具翅。 2.1.2 唐古特大黄 叶片深状裂纹，裂片较长，窄三角状针形。生于山地林缘，野生或栽培。唐古 特大黄与掌叶在药材上，形态，结构，化学成分等各方面都非常相似，可作为掌 叶大黄的替代品。 2.1.3 药用大黄 叶片呈掌状，有浅状裂纹，仅达到叶片 1/4 处，裂片呈三角形，花白色。在山 地林缘或山坡，野生或栽培。 2.2 产地分布 2.2.1掌叶大黄主产于产甘肃、四川、青海、云南西北部及西藏东部等省区4。 2.2.2唐古特大黄主产于青海，甘肃，西藏东北部及四川西北部4。 2.2.3药用大黄产于四川，贵州，云南，陕西等地4。 _ 精品资料 2.3 掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄毒性试验比较 张陆勇等5通过利用四川产的药用大黄、甘肃产的掌叶大黄以及青海产的唐 古特大黄及大黄超微粉制剂对小鼠排便作用进行实验。采用小鼠排便试验,对 3 组对照组和实验组的小鼠分别灌服不同来源的大黄或不同大黄微粉制剂,其中一 组作为对照组，用正常剂量灌服，另一组用高剂量大黄或不同大黄微粉制剂灌服， 记录 5 小时中小鼠排泄的黑便数目和特征,以对照组数值为基数，来计算排便的 增加率。结果研究数据表明正常剂量的四川产药用大黄超微粉 I 号，甘肃产掌叶 大黄超微粉 II 号和青海产的唐古特超微粉 III 号大黄对小鼠均有一定的泻下作 用,但是高剂量组与对照组相比数值均有显著性差异，高剂量灌服的小鼠整体出 现软便的现象，并且表现强度不一。另外即使同一来源的甘肃产掌叶大黄超微粉, 由于批次的不同其泻下作用亦表现强度高低有别。通过研究服用高剂量的一组 小鼠出现的异常结果发现，相同的实验条件下，对同一批次小鼠使用相同高剂量 的大黄或者大黄制剂，对小鼠胃肠毒性的大小顺序是：四川产药用大黄甘肃生 产的掌叶大黄青海产的唐古特大黄6。 第 3 章 大黄毒性反应现代研究 6 第 3 章 大黄毒性反应现代研究 3.1 阻滞脾胃、损耗元气 中医认为性味苦寒药，长时间使用容易伤害人的元气，耗费人的精气，所以 一旦大量使用大黄，不旦不会对身体有帮助，还会损伤人的脾胃功能，造成身体 虚弱多病。所以体弱多病、妊娠后初期、年老体迈者之类的人应慎用或者禁止使 用大黄。 研究了几味含大黄药物对小鼠胃肠运动的关系，发现均导致动物进食减少 并且伴有精神症状低迷的现象，一些动物的肠胃功能甚至遭到损害，这与中医临 床理论苦寒伤胃相符合。笪红远等7对 20 人进行试验，每天服用大黄 3 次，每次 3 克，连续观察天。结果表明所有受试人员的胃肠道出现腹泻，恶心，呕吐，腹痛， 等症状，临床应用症状和医药理论表明：大黄对人体会产生阻滞脾胃、损耗元气 的影响。 3.2 肝损害 对小鼠肝细胞的毒性作用，田等8研究通过使用大、中、小剂量大黄煎液，通 过观察肿瘤坏死因子、谷氨酞基转移酶，血清丙氨酸氨基转移酶与肝脏切片。发 现当给药剂量达到 8g/kgd，会出现肝脏中毒的症状，而随着大黄剂量的增加中 毒症状越严重和明显，研究发现中毒主要原因为肝细胞脂肪的变性，但也发现 TNF 参与肝中毒过程中多余的大黄，是一种肝细胞脂肪变性损伤因子。对药物性 肝病的中医（TCM）后的临资料进行详细分析，认为排毒养颜胶囊含蒽醌类泻剂 如大黄等,中小剂量会有利于胆黄的泻下,但疗程不宜过长,剂量不宜过大，否则会 _ 精品资料 引起胆红素的代谢不顺畅,从而加重黄疸9。 3.3 继发性便秘 现代研究表明，刺激的净化作用大黄蒽醌类化合物，它的鞣酸等成分具有收 敛止泻作用10。如果长时间使用大黄可能会导致肠壁神经感受细胞应激性降低， 不能产生正常蠕动和排便反射，形成所谓的不服用大黄不能顺利排便，产生便秘 通便的依赖性，中药辞海称，大黄中含有鞣质，小剂量不仅不会引起腹泻的效 果，而且具有收敛作用；停药后，往往出现继发性便秘。靶器官的作用可能在结肠， 影响结肠细胞，在结肠黑变病的神经细胞，大大增加癌变风险11。 3.4 肾损伤 通过对肾小管上皮 HK-2 细胞的毒性研究发现：大黄酸和大黄素都可以显著 的抑制 HK-2 细胞增长并诱导其凋亡。通过在电镜下的观察，可以发现不规则的 细胞核,染色质出现了浓缩和边集;且大黄素对乳酸脱氢酶(LDH)和 N-乙酰-D- 氨基葡萄糖苷酶(NAG)释放水平均高于大黄酸7。说明大黄酸和大黄素都具有显 著的细胞毒性作用,并且对 HK-2 细胞的毒性作用大小强度是大黄酸大黄素。 王青秀等12研究发现大黄素可能会改变脂类的有效成分,从而进一步破坏细 胞膜结构,以阻碍肾小管的上皮细胞的重吸收作用,但这种损伤是有限的,结束药 物的给几后,肾损伤基本上能够恢复原样。 3.5 三致作用 三致作用是指致癌作用、致基因突变作用、致畸形作用。饶晓黎等13从形态 学上认为，生大黄会在一定程度上损害妊娠个体的子宫内膜形态,而子宫内膜因 第 3 章 大黄毒性反应现代研究 8 为受大黄的影响，导致早期胚胎生存的环境发生改变,引发流产。另外笪红远等7 通过研究大黄酸对小鼠的淋巴瘤细胞 TK 基因的致突变作用,现象说明在非代谢 活化下大黄酸实验的各个剂量小组对小鼠的淋巴瘤细胞 TK 基因无致突变作用， 在肝微粒体酶系 S9 代谢活化条件下,却表现出微弱的突变性。 对大黄素进行时长 2 年的动物试验研究，研究表明：大黄素对 F344/N 雄性 大鼠没有致癌影响,但却可能小诱发小鼠的肾小管肿瘤,而对 B6C3F1 雄性小鼠无 致癌作用。与此同时研究发现,大黄素会引起雌性、雄性小鼠肾小管透明滴的形成， 并且会使色素沉着,最终使得雌性小鼠患肾脏病的几率增加。另外在研究中没有 发生致畸作用14。 3.6 长期毒性研究 张陆勇等15分别以 0、140、794、4500 mg/ kg 剂量的大黄总蒽醌灌胃大鼠，1 次/d，一天一次，连续给药 25 周，研究大黄蒽醌对大鼠的长期毒性反应，大黄，结 果表明服用高剂量大黄总蒽醌后的大鼠会出现精神萎靡，排便稀烂甚至软便，体 重基本停止增长；红细胞数目减少、血红蛋白的含量和 Na+明显低于对照组，但 是尿素氮、总胆固醇、尿酸、K+和 Ca 2+升高，尿 -微球蛋白、总蛋白质等显著升 高，肾脏可见近曲小管上皮细胞产生不同程度肿胀变性。在该实验条件下，大黄 总蒽醌对大鼠的毒性反应靶器官可能主要是肾脏(特别是肾近曲小管)，并且毒性 是可转化的，对大鼠的安全剂量为 794 mg/kg。通过研究可以得出，大剂量的服用 大黄会对人体的肾脏产生可逆性的毒性。 _ 精品资料 3.7 影响细胞信号转导通路引起的毒性研究 Yan 等16利用 DNA 的微阵列技术，发现大黄总蒽醌导致的肾小管上皮细胞 损伤与原活化蛋白激酶(MAPK 激酶)和 CYP1A1 基因有关。严明等17研究对肾 脏基因的差异表达发现：p38MAPK 通路中 MAPK 激酶 6 可能是某种程度上造成 细胞损伤的原因。细胞周期调节研究表明,周期蛋白导致周期依赖性蛋白激酶 1 的下调可能是造成真核细胞周期调控收到障碍,进一步产生增殖和抑制。 第 4 章减毒对策 10 第 4 章 减毒对策 根据以上毒性及不良反应，我们发现上述的各种不良反应很大程度上都是 由于辨证、配伍不当、长时间服用或大剂量服用等人为因素所引起的，与大黄中 药材并没有直接的关系，所以大黄的毒性是可以完全避免，或者说是减弱。 4.1 规范品种，统一标准 规范的品种和质量标准是应用大黄的先决条件。各个品种大黄混乱，加上一 些地方错误使用替代品代替大黄，更容易引起中毒事故。所以，按照中国药典 严格规范大黄的品种，建立大黄 GAP 基地，从更根本上提高大黄的产品质量。 4.2 炮制减毒 炮制大黄，通过改变其有效药用成分，从而影响其某些药理作用。生大黄泻 下强烈,而炮制大黄作用平缓。这不仅大大降低了胃肠道的不良反应，还保持清热 解毒，活血化瘀的功能等等。数据表明18熟大黄总提取物产生毒性作用的最小剂 量为 40 克/千克（等于药典最大量的 80 倍）是生大黄剂量的二倍，所以大黄毒性 经过炮制后，毒性大大降低，进一步验证中医的科学性和客观性的为减毒处理提 供科学依据。 4.3 配伍减毒 中医药毒性可以通过配伍减少或消除，神农本草经以君、臣、佐、使作为 药物配伍的指导原则，即中药要有主次之分，相辅相成才能发挥其药用价值。另 外宜用相须、相使之药,不要用相恶、相反以之药,以相畏、相杀之药。只有科学的 _ 精品资料 使用配伍原则，才能有效的减少毒性。例如调胃承气汤和小承气汤都有“调和胃 气”的作用,所以可以通过大黄与甘草等药的配伍以及剂量的增加和减少还有煎 煮的不同,从而付会出大黄疗效中“平和”的特点19。刑小燕等20通过研究表明：生 大黄总提取物与大黄蟅虫丸产生毒性反应的最小剂量分别为 20 g 和 44 g/kg(相 当于药典最大用量的 40 倍和 220 倍),结果表明大黄经过合理有效的配伍解毒后， 同样可以起到减毒同时还增加疗效的功能。 4.4 其他 因为大黄不良反应的发生与药剂的使用量相关。如果长期服用会导致药物 蓄积产生毒性，但是如果能合理控制服药剂量且避免长期连续使用大黄，可以降 低甚至避免大黄可能会导致的毒性。除此之外，如果能够合理利用其毒性，就可 以减轻毒性反应，还可起到治疗其他疾病的目的。例如对于糖尿病肾病患者来说， 体内高糖会使系膜细胞增殖，增加系膜细胞分泌纤连蛋白，提高系膜细胞中纤连 蛋白的表达，而大黄可以抑制高糖诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌。从而 可以保护肾脏。 结论 12 结 论 一般来说，依据西方的固有思维：一旦药材中含有某些有毒物质，这个药材 就会判定为有毒药材，而这种药材的复方也会判定是有毒的，显然这种认定方式 是具有一定的局限性的。虽然通过一些动物整体实验表明大黄具有一定的潜在 肝肾毒性和致癌性，但这并不代表大黄及其含大黄的制剂就有肝肾毒性和致癌 的风险。每种中药的有效成分都是很复杂的，中药需要多种药材相互结合，才能 发挥其固有的作用，这其中不单单是药物各成分之间的相互作用，还是药物与单 独机体的相互作用的结果21。而大黄素或蒽醌等只是大黄中药药材中的主要成 分，不能完全等同大黄。虽然动物长时间高剂量的服用大黄会有肝毒性和致癌性 的潜行，但是并不代表人服用正常剂量的大黄会有肝毒性和致癌性的危险。虽然 大黄随意的作为保健品有一定的安全隐患，但这并不代表大黄作为临床用药也 存在相同的担忧。大黄的临床应用非常广泛，一般情况下按照常规剂量下使用大 黄是没有危险的，但是长时间的使用大黄，停药后可能会引起继发性便秘，因此 大剂量或长期服用大黄造成的不良反应也是客观存在的。所以加强研究如何利 用规的品种，统一标准、利用炮制，配伍等减毒机制进行减毒，将为以后中药材 的使用提供更有利的理论依据，为大黄在临床医学中的合理应用创造条件。上述 的问题都是我们今后需要更加深入探讨的。而在没有科学依据的基础上，大黄具 有肝肾毒性和致癌性这一观点具有一定的局限性。大黄等含蒽醌类的中药的安 全性有待更加详细的深究，也是今后中医药学上迫切需要解决的问题。 _ 精品资料 参考文献 1李孜,卿平,冀玲等.大黄治疗慢性肾功能衰竭的系统评价J.中国循证医学杂志, 2004,71(07):12-14. 2怡悦.大黄成分的研究:酚性化合物的细胞毒性J.国外医学(中医中药分册), 2003,22(06):55-57. 3鲍恩泉.中药大黄的研究进展J. 安徽医药, 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