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(生药学专业论文)五味子综合利用的初步研究.pdf.pdf 免费下载
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7 :i 渊 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定, 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版, 允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部 内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存和汇编本学位论文。 保密团 本学位论文属于,在2 5 年我解密后适用本授权 书。 不保密口 学位论文作者签名:徐佐旗指导教师签名:仰榴青教授 2 0 0 6 年0 5 月15 日2 0 0 6 年0 5 月15 日 1一 ,。;广 , , l a 人 己 x f j i 摘要 摘要 五味子为著名中药,其应用已有两千多年历史。五味子含有木脂素、多糖和 挥发油等成分,但目前对五味子的利用主要是木脂素,对多糖和挥发油研究少; 五味子提取木脂素后残渣一般作为废物丢弃,造成药用资源的浪费。因此本文就 综合利用五昧子活性成分展开研究,主要研究工作分以下几部分: 第一部分五昧子活性成分木脂素的分析 对五味子木脂素的定性定量分析方法进行了研究和比较。五味子木脂素的 t l c 定性分析条件:采用g f 2 5 4 薄层板,展开剂为f 己烷:乙酸乙酯( 8 :3 ) ,五昧 子醇甲、酯甲、甲素和乙素的r f 值分别为o 2 1 、o 3 2 、o 6 6 和o 7 l 。 五味子总木脂素紫外分光光度法分析条件:检测波长2 4 3 n m ,浓度在 0 0 0 2 6 0 0 1 5 6m g m l 内具有良好的线性关系( r = o 9 9 9 9 6 ) ;平均回收率1 0 0 8 6 , r s d 为2 1 9 ( n = 5 ) 。五昧子木脂素可见分光光度法分析条件:检测波长5 7 0 n m , 浓度在0 0 0 15 - 0 0 2 1 0m g m l 内具有良好的线性关系( r :o 9 9 9 9 1 ) ;平均回收率 9 8 6 4 ,r s d 为4 9 5 ( n = 5 ) 。结果表明,紫外分光光度法测得值高于可见分光 光度法,本文选择药典记载的可见分光光度法作为五昧子木脂素提取工艺研究的 定量检测方法。 建立了同时测定五味子提取物中四种主要木脂素( 醇甲、酯甲、甲素和乙素) 的薄层扫描分析方法,四种主要木脂素薄层扫描法分析条件:采用g f 2 s 4 板,展 开剂为正己烷醋酸乙酯( 8 :3 ) ,双波长薄层扫描( h = 2 2 0n l n ,a r = 3 4 0n m ) ,i - i 味 子醇甲点样量于0 4 4 1 5 4g g 、酯甲点样量于0 6 0 2 1 0p g 、甲素点样量于0 5 2 1 8 2 烬、乙素点样量于0 4 8 1 6 8 烬范围内与峰面积呈良好线性关系。平均回 收率分别为1 0 4 5 、9 5 0 、9 6 1 和1 0 2 1 ,5 次测定的r s d 分别为4 o 、 2 8 、2 6 和1 9 ,薄层扫描法可作为五昧子提取物中四种主要木脂素的定量 分析方法。 第二部分超临界c 0 。萃取五昧子中木脂素的工艺研究 研究超临界c 0 2 萃取木脂素的 :艺,以总木脂素提取率为指标,采用单因 素和正交实验优化血味子木脂素超临界c 0 2 萃取工艺,最佳萃取条件为萃取压 江苏人学硕+ 学位论文 力2 5 m p a 、萃取温度3 5 。c 、c 0 2 流量2 l m i n 、萃取时间3 h ,此条件下南、北五 味子总木脂素提取率分别为9 5 5 和9 3 2 ,提取物中木脂素含量分别为9 2 和 1 3 o 。与传统醇提法相比,超临界c 0 2 萃取法的木脂素提取率约为醇提法的1 5 倍,提取物中木脂素含量约为醇提法的3 4 倍,北五味子提取物中五味子乙素含 量接近醇提法的7 倍,因此,超临界c 0 2 萃取五味子木脂素明显优于醇提法, 该方法工艺简单,选择性好,操作温度低,无污染,具有工业应用前景。 第三部分萃余物中五昧子多糖提取及活性初步研究 对五昧子超临界c 0 2 萃余物中多糖的提取工艺和多糖的抗氧化活性进行了 研究。以多糖提取率为指标,采用单因素实验优化了萃余物中五味子多糖提取工 艺,最佳提取条件为料液比1 :2 0 、温度1 0 0 、时间6h 、提取1 次,此条件下 南、北五味子超临界c 0 2 萃余物中多糖得率分别为1 3 5 和1 9 6 ,多糖含量分 别为3 3 6 和2 8 5 。与五味子醇提残渣及原料中多糖得率和含量相比较,结果 表明超临界c 0 2 萃取未造成多糖损失,而6 0 醇提造成了部分多糖损失,说明 超临界c 0 2 萃取法更有利于五味子的综合利用。 初步抗氧化活性实验结果表明,南五味子粗多糖有较强的清除羟自由基作 用,其i c 5 0 为2 0 8 8 0i ,t g m l ( 抗坏血酸i c 5 0 为1 3 2 5 7g g m l ) ,北五味子粗多糖 清除羟自由基效果大大弱于南五味子粗多糖,其i c 5 0 为2 6 7 2 3 0i - t g m l ,两者对 超氧自由基的清除效果均不明显,南、北五味子多糖值得进一步研究。 第四部分五味子挥发油提取及成分初步分析 对五昧子挥发油的超临界c 0 2 萃取工艺和组成成分进行了研究。以挥发油 得率为指标,采用正交实验研究了超临界c 0 2 萃取五味子挥发油的工艺,最佳 萃取条件为温度4 0 c 、压力15 m p a 、时问3 h ,此条件下南、北土味子挥发油平 均得率分别为8 2 和8 5 ,水蒸气蒸馏法南、北五味子挥发油得率分别为1 4 和2 0 ( v w ) ,超临界c 0 2 萃取法挥发油得率高于水蒸气蒸馏法。采用g c m s 法初步分析了挥发油的组成成分,分析条件为:h p 5 m s 柱;载气氦;进样口温 度2 2 0 。c ;柱温8 0 c 程序升温至2 2 0 。c ;质谱e l :电离能量7 0 e v 。超临界c 0 2 萃取的南、北五味子挥发油均被鉴定出1 6 个成分,南、北五味子水蒸气蒸馏的 挥发油分别被鉴定出2 4 和2 6 个成分。 本论文研究建立了五昧子的综合利用新方法:首先采用超临界c 0 2 萃取法 i i p t 荩 - 江苏人学硕士学位论文 a b s t r a c t s c h i s a n d r ai saf a m o u st r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n ea n dh a sw i d ea p p l i c a t i o n f o rm o r et h a n2 , 0 0 0y e a r s i th a st h ea c t i v ec o m p o n e n t ss u c ha st h el i g n a n s ,v o l a t i l e e o i l sa n dp o l y s a c c h a r i d e s ,b u to n l yl i g n a n sw e r eu t i l i z e dw h i l ev o l a t i l eo i l sa n d p o l y s a c c h a r i d e s w e r es e l d o mr e s e a r c h e d a f t e rl i g n a n sw e r ee x t r a c t e df r o m 户 向西口m 彳厂口,t h er e s tw a sa b a n d 。n e da sw a s t e s ,锄dt h em e d i c a lr e s 。u r c e sw e r ew a s t e d - 簟 鹰 s e v e r e l y s ot h ec o m p r e h e n s i v eu t i l i z a t i o no ft h ea c t i v ec o m p o n e n t si nt h es c h i s a n d r a w a ss t u d i e di nt h i sp a p e r t h em a i nc o n t e n t sa r ea sf o l l o w s : p a r to n e :a n a l y s i sm e t h o d so nl i g n a n si ns c h i s a n d r a q u a n t i t a t i v ea n dq u a l i t a t i v ed e t e r m i n a t i o nm e t h o d sw e r es t u d i e da n dc o m p a r e d f o rt h el i g n a n si ns c h & a n d r a t h ec o n d i t i o n so ft l cm e t h o df o rq u a l i t a t i v e d e t e r m i n a t i o no fl i g n a n sw e r ea sf o l l o w s :t h en - h e x a n e e t h y la c e t a t e ( 8 :3 ) a n d s e l f - m a d eg f 2 5 4p l a t e sw e r eu s e da n dr fv a l u e so fs c h i s a n d r i n ,w u w e i z ie s t e ra , s c h i s a n d r i naa n ds c h i s a n d r i nbw e r e0 2 1 ,o 3 2 ,0 6 6a n do 7 1r e s p e c t i v e l y t h ec o n d i t i o n so fu v - s p e c t r o p h o t o m e t r yf o rq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o no f l i g n a n sw e r ea sf o l l o w s :t h ed e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a s2 4 3 n m t h ec a l i b r a t i o nc u r v e w a sl i n e a ri nr a n g eo f0 0 0 2 6 - 0 015 6 m g m l ( r = 0 9 9 9 9 6 ) t h ea v e r a g er e c o v e r yw a s 10 0 8 6 ( r s d = 2 19 ) ( n = 5 ) t h ec o n d i t i o n so fv i s i b l el i g h t s p e c t r o p h o t o m e t r yf o rq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o n o fl i g n a n sw r e r ea sf o l l o w s :t h ed e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a s5 7 0 n m t h ec a l i b r a t i o n c u r v ew a sl i n e a ri nr a n g eo f0 0 015 0 0 210m g m l ( r = 0 9 9 9 91 ) t h ea v e r a g er e c o v e r y w a s9 8 6 4 ( r s d = 4 9 5 ) ( n 2 5 ) t h er e s u l ts h o w e dt h a tv a l u e sd e t e r m i n e d b y u v - s p e c t r o p h o t o m e t r y m e t h o da r e h i g h e r t h a nt h a td e t e r m i n e d b y v i s i b l e l i g h t s p e c t r o p h o t o m e t r ym e t h o d t h el a t t e rt h a tw a sr e c o r d e di np h a r m a c o p e i a sw a s c h o s e na st h eq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o nm e t h o df o re x t r a c t i o nt e c h n o l o g y t oe s t a b l i s ham e t h o df o r d e t e r m i n i n gt h ec o n t e n to ft h ef o u rl i g n a n s ( s c h i s a n d r i n ,w u w e i z ie s t e ra ,s c h i s a n d r i na ,s c h i s a n d r i nb ) i ne x t r a c to fs c h i s a n d r a s i m u l t a n e o u s l y t h ec o n d i t i o no ft l c sf o rq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o no ff o u rm a j o r l i g n a n sw a s :t h ec o n t e n t so ff o u rm a j o rl i g n a n sc o u l db ed e t e r m i n e db yd u a l l v 摘要 w a v e l e n g t ht l c s c a n n i n g ( z , s = 2 2 0 n m ,久, r = 3 4 0 n m ) a f t e rt h ee x t r a c t sw e r ed e v e l o p e d b yn h e x a n e - e t h y la c e t a t e ( 8 :3 ) o ns e l f - m a d eg f 2 5 4p l a t e s t h ec a l i b r a t i o n c u r v e s w e r el i n e a ri nr a n g eo f0 4 4 - 1 5 4 i _ t gf o rs c h i s a n d r i n ,0 6 0 - 2 10 1 , t gf o rw u w e i z ie s t e r a ,0 5 2 1 8 2 1 x gf o rs c h i s a n d r i na a n d0 4 8 1 6 8 k t gf o rs c h i s a n d r i nbr e s p e c t i v e l y , t h ea v e r a g er e c o v e r i e sw e r e10 4 5 f o rs c h i s a n d r i n ( r s d = 4 0 ) ,9 5 0 f o r w u w e i z ie s t e ra ( r s d = 2 8 ) ,9 6 1 f o rs c h i s a n d r i na ( r s d = 2 6 ) a n d10 2 1 f o r s c h i s a n d r i nb ( r s d = i 9 ) ( n = 5 ) t l c sm e t h o dw a sa p p l i e dt ot h e q u a n t i t a t i v e d e t e r m i n a t i o nm e t h o df o rf o u rm a j o rl i g n a n si ne x t r a c t s p a r tt w o :s t u d yo nt h et e c h n o l o g yo fs f e - c 0 2o fl i g n a n si ns c h i s a n d r a t h et e c h n o l o g yo fs f e - c 0 2w a so p t i m i z e db ys i n g l ef a c t o rt e s t sa n do r t h o g o n a l e x p e r i m e n t a lw i t hr e c o v e r i e so fl i g n a n sa si n d e x e s t h ea v e r a g er e c o v e r i e so fl i g n a n s i ns s p h e n a n t h e r aa n ds c h i s a n d r ac h i n e n s i sw e r e9 5 5 ,9 3 2 a n dt h el i g n a n s c o n t e n t si ne x t r a c t so fs c h i s a n d r ac h i n e n s i sa n ds s p h e n a n t h e r aw e r e9 2 i3 0 a t t h eo p t i m u mc o n d i t i o n ( 2 5 m p aa se x t r a c t i o np r e s s u r e ,35 ca se x t r a c t i o nt e m p e r a t u r e , 2 l m i na sf l o wr a t eo fc 0 2a n d3 ha se x t r a c t i o nt i m e ) t h ea v e r a g er e c o v e r yo f s f e c 0 2w a s1 5t i m e s ,t h ec o n t e n to fe x t r a c t so fs f e - c 0 2w a s3 - 4t i m e sa n dt h e c o n t e n to f7 - s c h i s a n d r i nw a sn e a r l y7t i m e sc o m p a r e dt ot h a to fe x t r a c tb ya l c o h o ls o t h a ti tw a sc o n s i d e r e dt ob es i m p l e ,g o o ds e l e c t i v i t y , l o wo p e r a t i o nt e m p e r a t u r ea n dn o p o l l u t i o nt e c h n o l o g y ,a n dh a di n d u s t r i a la p p l i c a t i o nv a l u e p a r tt h r e e :s t u d yo nt h ee x t r a c t i o na n da e t i v i t i yo fp o l y s a c c h a r i d e si nr e s i d u e s b o t ht h ee x t r a c t i o nt e c h n o l o g yo fp o l y s a c c h a r i d e si nr e s i d u e so fs f e c 0 2a n d a n t i o x i d a n t a c t i v i t y o ft h e p o l y s a c c h a r i d e s w e r es t u d i e d t h e t e c h n o l o g yo f p o l y s a c c h a r i d e se x t r a c t i o nf r o mr e s i d u e so fs f e c 0 2w a so p t i m i z e db ys i n g l ef a c t o r t e s t sw i t hr e c o v e r i e so fp o l y s a c c h a r i d e sa si n d e x e s t h er e c o v e r i e so fp o l y s a c c h a r i d e s f r o mss p h e n a n t h e r a a n ds c h i s a n d r ac h i n e n s i s r e s i d u e so fs f e - c 0 2w e r e9 6 2 a n d9 6 0 7 t h ec o n t e n t so fp o l y s a c c h a r i d e so fss p h e n a n t h e r aa n ds c h i s a n d r a c h i n e n s i s w e r e3 3 6 a n d2 8 5 a tt h eo p t i m u mc o n d i t i o n ( 1 :2 0a st h es o l i d - l i q u i d r a t i o ,i0 0 ca st h et e m p e r a t u r e ,6 ha st h et i m e ,o n et i m ee x t r a c t i o n ) t h er e s u l t s s h o w e dt h a tp o l y s a c c h a r i d e sw e r ep a r t l yl o s tb yt h et e c h n o l o g yo f6 0 a l c o h o l e x t r a c t i o nw h i l en o n eb y t e c h n o l o g yo fs f e - c 0 2s ot h a t t h el a t t e ri sb e t t e rf o r v 0 矗 江苏大学硕十学位论文 c o m p r e h e n s i v eu t i l i z a t i o nc o m p a r e dw i t ht h ef o r m e r t h e s ep o l y s a c c h a r i d e s p h a r m a c o l o g yw a ss t u d i e de l e m e n t a r i l y t h er e s u l t s s h o w e dt h a tss p h e n a n t h e r ap o l y s a c c h a r i d e sh a v eg o o d a n t i o x y g e n a t i o nt ot h e h y d r o x y lf r e er a d i c a s lt h a ti c 5 0w a s2 0 8 8 0i r t g m l ( i c 5 0o fv i t a m i ncw a s13 2 5 7 g m l ) ,w h i l et h a to fs c h i s a n d r ac h i n e n s i sp o l y s a c c h a r i d e s ( i c 5 0w a s 2 6 7 2 3 0 g m l ) i sm u c hw e a k e rt h a nt h a to fs s p h e n a n t h e r ap o l y s a c c h a r i d e s b o t ho ft h e i re f f e c t so n a n t i 。o x y g e nf r e er a d i c a l sw e r ev e r yw e a k s op o l y s a c c h a r i d e so fs s c h i s a n d r ac h i n e n s i sa r ew o r t ht ob ef u r t h e rr e s e a r c h e d p a r tf o u r :t h ee x t r a c t i o no fv o l a t i l eo i li ns c h i s a n d r a a n dp r e l i m i n a r ya n a l y s i so fi t sc o n s t i t u t e s s f et e c h n o l o g ya n dc h e m i c a lc o n s t i t u t eo fv o l a t i l eo i lw e r es t u d i e d t h e t e c h n o l o g yo fs f e - 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r := c h ;,五味i t i 素( s c h i s a n d r i n a ) r = c o c 6 h 5 ,五味t 酯q - i ( w u w e i z ie s t e r a ) 五味了酡甲( s c h i s a n d r i n ) r l + r 2 = c h 2 一,五味了乙索( s c h i s a n d r i nb ) 图1 1 五味子中部分木脂素类成分的结构 江苏大学硕十学位论文 1 1 1
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