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结核杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒（酶联免疫法）,A.TB,1,结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，简称结核杆菌）引起，主要通过呼吸道传播，亦可经消化道或皮肤表皮创伤传播；可累及身体任何部位，肺结核是主要表现形式。感染结核杆菌后的三种结局免疫清除潜伏性结核（无症状、无传染性、终生，存在激活风险）活动性结核（排菌，传染源）,ScanningelectronmicrographofMycobacteriumtuberculosis,Mycobacteriumtuberculosiscolonies,结核感染,2,感染人数：全球约20亿，中国约5.5亿患病人数：活动性病人全球约2000万，中国约499万2年新增病例全球约800-1000万，中国约130万2死亡人数：每年死亡病例全球约300万，中国约5.4万2中国是全球22个结核病高负担国家之一,结核病疫情1,3,早期活动性结核诊断,细菌学检查：涂片、培养、病理活检。临床上菌阴结核病例约70-80%，大部分结核患者检验敏感性低。,细菌学诊断抗酸杆菌染色（AFB）分枝杆菌培养标准的结核病细菌学检查“三涂一培”,4,结核抗体检查：检验窗口期3-6个月，不适合早期诊断。抗体半衰期长，不能反映即时病情。,早期活动性结核诊断,结核抗体检测用已知的结核抗原来检测待检标本中的未知的结核抗体。常用的检测方法：酶连免疫吸附试验斑点免疫渗滤试验免疫层析试验免疫印迹试验,5,TST（结核菌素试验）：TST试验与卡介苗的抗原同源性高，交叉影响，假阳性高。受机体免疫差异影响大。,早期活动性结核诊断,什么是结核菌素？我国所用结核菌素是结核菌素纯蛋白衍生物既PPD。它是采用结核菌经加热杀菌灭活，过滤提取而成。它保存了结核菌的抗原性，却没有致病性。结素纯蛋白衍生物（简称PPD）获自OT滤液的沉淀物。,6,干扰素释放分析技术（IGRA）,基本原理1机体感染结核杆菌后产生的T细胞在体外受到特异性抗原刺激时，会释放干扰素，通过对干扰素的定量分析可判断是否具有结核杆菌的特异性T细胞反应。keywords：记忆性细胞免疫、体外全血培养、干扰素特异性结核抗原1基因组RD1区编码的ESAT6和CFP10抗原，在所有卡介苗菌株和绝大多数非结核分枝杆菌中不存在。,7,干扰素释放分析技术（IGRA）,8,A.TBIGRA与哈佛专利的结合,技术平台专利：美国7754219，中国ZL02810886.8合成肽抗原加载技术1（OPPL）抗原特异性激活的细胞免疫技术2,3（ASACIR，A.TB使用专利）,proteasomes,MHC-1,MHC-2,peptides,TAP,APC,脱毒的炭疽毒素致死因子（LFn）融合蛋白,T细胞,9,A.TB与早期活动性结核诊断方法比较,优势：1.无需带菌标本（痰培养、痰涂片、PCR需要，早期患者75%无法获得带菌标本）2.适用于早期快速诊断,两天便可出结果（痰培养耗时太长，胸片早期难诊断）3.灵敏度高（痰培养、痰涂片、胸片、结核抗体、TST均无法达到同等检验精度）4.不受卡介苗影响（TST与卡介苗交叉反应）5.窗口期短，仅为感染后1-2周即可检验（结核抗体检验窗口期为3-6个月）6.阳性结果反映现症感染。,10,A.TB检验样本采集要求,采血量：不低于3ml。抗凝要求：肝素钠或者肝素锂抗凝。为充分抗凝以保证细胞活性，在采血后即刻颠倒混匀。采集样本保存要求：全血样本室温（255）保存。在全血离体16小时内送到检验室完成样本前处理。,11,如何应用A.TB呼吸科,早期活动性肺结核辅助诊断。非结核胸肺部疾病（肺癌，肺炎，肺囊肿，支气管炎扩张等疾病）与肺结核的鉴别诊断。结核性胸膜炎/腹膜炎早期诊断。,12,风湿免疫科,药物治疗是主要的治疗方式，特别是生物制剂（即选择性地以参与免疫反应或炎症过程的分子或受体为靶目标的单克隆抗体或天然抑制分子的重组产物）英夫利昔单抗类克依那西普恩利阿达木单抗Humira利妥昔单抗注射液美罗华,13,生物制剂用于免疫介导炎症性疾病治疗的结核风险根据美国食品药品管理局（FDA）和其他机构的统计，生物制剂的使用容易出现合并感染及肿瘤，最常见的感染史上呼吸道感染。合比结核发病的原因：生物抑制剂大多为某种细胞因子的拮抗剂，在服用生物抑制剂时会破坏体内细胞因子的浓度。结核杆菌感染在巨噬细胞内，而巨噬细胞进行程序性凋亡需要细胞因子的调控。生物抑制剂破坏体内的细胞因子，被感染的巨噬细胞无法凋亡从而成为结核杆菌的温床。,如何应用A.TB风湿免疫与结核,14,器官移植术前的结核筛查活动性结核患者应先进行抗结核治疗；潜伏感染者视疾病严重程度，建议预防性药物治疗。器官移植术后服用免疫抑制剂前的结核筛查免疫抑制剂：环孢素A、FK506、雷帕霉素、他克莫司（普乐可复）糖皮质激素类药物不明发热待查患者的结核排查。,如何应用A.TB易感人群的结核排查,15,血液病患者自身免疫功能低下，应用化疗或免疫抑制剂治疗导致使机体免疫功能进一步下降，易合并各种感染，特别是结核感染。肿瘤化学治疗患者、血液透析患者出现不明原因的长时间不规则发热（超过4周），正规抗生素治疗无效，怀疑为结核发病早期。,如何应用A.TB易感人群的结核排查,16,菌阴结核（呼吸内科）菌阳结核（呼吸内科）新近接触者（CDC）,结核病辅助诊断,高危人群筛查,普通人群感染检测,肺外结核鉴别诊断,肺结核与肺癌的鉴别（肿瘤科）克罗恩病与肠结核的鉴别（消化科）生殖系统疾病鉴别（不孕不育专科）结核性葡萄膜炎的鉴别（眼科）皮肤结核的鉴别（皮肤科）泌尿系统结核的鉴别（泌尿科、肾内科）骨结核的鉴别（骨科）结核性脑膜炎的鉴别（神经内科）,HIV/TB（抗病毒治疗前后，感染科）DM/TB（激素治疗前后，内分泌科）AS/TB（生物制剂治疗前后，风湿免疫科）RA/TB（生物制剂治疗前后，风湿免疫科）SLE/TB（生物制剂治疗前后，风湿免疫科）移植感染（免疫抑制剂治疗前后，移植科，血液科）,职工、老年人、普通人定期体检（体检中心）学生、新兵等群居性人群体检（结防所）不明原因发热（内科）移民密切接触者（医务人员、结核病家庭体检）,其他应用领域,17,阴性结果意义近期未感染结核杆菌。特异性85.6%。阳性结果意义结核杆菌现症感染，可结合其他检验结果合并确诊活动性结核病，甚至可作为鉴别性用药的参考。敏感性83.3%。数值参考：检验数值可反映结核细胞免疫强度。,结果解释,如何看待A.TB检验结果,18,A.TB临床试验性能,临床试验选用472确诊菌阳或病理确诊的活动性结核患者，阳性结果为393例，敏感性为83.3%；临床试验选用613PPD阴性，无影像学疑问，低风险健康人群，阴性结果为525例，特异性为85.6%。,19,注意事项,初次感染的窗口期大约在2周左右，这个时期做检测可能引起假阴性。抗结核治疗后，结果可能转阴。少数免疫系统受损者可能为假阴性。堪萨斯分枝杆菌，苏尔加分枝