（应用化学专业论文）以毛泡桐为原料提取、分离纯化熊果酸的工艺研究.pdf

摘要 厂 f 熊果酸属于有机三萜酸，具有镇静、抗 理作用，近年更被中国医学科学院肿瘤医院 癌药物，因而正日益受到众多学者的重视。 炎、增强机体免疫力、抗菌、美白、抗癌等药 实验证明其有望成为低毒、有效的新型天然抗 y 本课题为以毛泡桐为原料提取、分离纯化熊果酸的工艺研究，详细总结了熊果酸的原 植物研究近况、熊果酸的药理作用研究进展以及其分离纯化的方法：摸索出从毛泡桐叶、 柄、花中提取、分离纯化熊果酸的工艺流程和最佳工艺条件；分析了不同采集期、不同部 位毛泡桐中熊果酸含量的变化规律，为原料的采收提供依据；产品经中国医学科学院药物 研究所分析熊果酸含量为9 6 9 。 所得工艺条件为： ( 1 ) 毛泡桐叶晒干后粉碎，1 2 倍量无水乙醇回流提取1 口小时，减压回收溶剂得浸膏， 1 5 2 0 倍量石油醚除杂3 - 4 次，每次2 0 小时，乙醇精制3 - 4 次； ( 2 ) 硅胶柱色谱甲醇一水( 8 ：1 ) 梯度洗脱，无水乙醇重结晶； ( 3 ) h p l c 法分析不同采集期毛泡桐叶中熊果酸含量，结果以9 月含量最高，7 月次 之，5 月最低。 关键词：毛泡桐熊果酸分离纯化抗癌药物 柱层析 a b s t r a c t u r s o l i ca c i db e l o n g st ot r i t e r p e n i ca c i d ，i th a s t r a n q u i h z a t i o n ，a n t i i n f l a m m a t i o n ，s t r e n g t h i m m u n i t y a n t i - b a c t e r i a ，b e a u t i f u lw h i t ea n da n t i t u m o rp h a r m a c o l o g i c a l a c t i o n s t h u sm u c h m o r ea a e n t i o nh a sb e e np a i dt ot h es t u d i e so fu r s o l i ca c i ds i n c ei tw a se x p e r i m e n t a lp r o v e d h a v i n g t h e h o p et o b e c o m ean e wp o t e n tn a t u r a la n t i - c a n c e l m e d i c i n eo fl o w p o i s o n & h i g h v a l i d i t yb y t h et u m o r h o s p i t a lo f c h i n e s ea c a d m yo f m e d i c a l i nr e c e n td e c a d e s t h i s p a p e r i s s t u d y i n g o nt h e p r o c e s s o fi s o l a t i n g & p u r i f i r i n gu r s o l i ca c i df r o m p t o m e n t o s a ( t h u n b ) s t e u d i td e t a i l e d l ys u m m a r i z et h ec u r r e n tr e s e a r c hs i t u a t i o no ft h eo r i g i n a l p l a n t s 、d e v e l o p m e n t i nr e s e a r c h e so f u r s o l i ca c i di np h a r m a c o l o g i c a la c t i o n sa n dt h em e t h o d so f s e p a r a t i o na n dp u r i f i c a t i o n ap r a c t i c a lp r o c e s s f l o wa n dt h e o p t i m a lp r o c e s so fe x t r a c t i n g u r s o l i ca c i df r o mp t o m e n t o s a ( t h u n b ) s t e u d 1 e a v e s 、s t e m s & f l o w e r sw e r ea f f o r d e db y d o i n g l o t so fe x p e r m e n t a n a l y s i n gt h ec h a n g er e g u l a t i o no fu r s o l i ca c i dc o n t e n ti ns a m p l e s g a t h e r e d i nd i f f e r e n tp e r i o d sa n d p a r t s ，w h i c h o f f e rt h eb a s i sf o rc o l l e c t i o n t h ec o n t e n to f u r s o l i ca c i di n t h ep r o d u c to b t a i n e dw a sd e t e r m i n e db yh p l c t h er e s u l ti s9 6 9 t h e p r o c e s so b t a i n e di s ： ( 1 ) d r i e dp o w d e ro fp t o m e n t o s a ( t h u n b ) s t e u d 1 e a v e sw e r ee x t r a c t e dw i t h 1 2t i m e s a b s o l u t ee t o hf o r1 qh o u r sa n dt h ee t o hs o l u t i o nw a sc o n c e n t r a t e du n d e rr e d u c e dp r e s s u r et o g i v eac r u d er e s i d u e w h i c hw a s s u s p e n d e d i n1 5 2 0t i m e s p e ( b p6 0 - 9 0 ) f o r 3 - 4 t i m e s ( 2 0 h o u r sf o re a c h t i m e s ) a n d t h e n p u r i f i e db y e t o hf o r3 - 4t i m e s ( 2 ) t h er e s i d u eo b t a i n e dw a ss u b j e c t e dt oc o l u m nc h r o m a t o g r a p h yo ns i l i c ag e la n de l u t e d w i t hm e o h h 2 0g r a d i e n ts y s t e m ( 8 ：1 ) f o l l o w e db yr e c r y s t a l l i z a t i o ni na b s o l u t ee t o h f i n a l l y a f f o r d e dac o l o r l e s sn e e d l e s ( 3 ) t h ec o n t e n to fu r s o l i ca c i di ne t o m e n t o s a ( t h u n b ) s t e u d g a t h e r e di nd i f f e r e n tp e r i o d s w a sd e t e r m i n e db yi - i p l ct h er e s u l ts h o w st h a tt h ec o n t e n ta p p e a r st ob eh i g h e s ti ns a m p l e s g a t h e r e di ns e p t e m b e r l o w e ri nj u l ya n dl o w e s ti nm a y 独创性说明 y 2 9 8 ， 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成 果口据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方，论文中不包含他人已经发表或撰写 过的研究成果，也不包含为获得垩型l 盔堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我工作过的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：辩鼎 签字日期2 0 0 2 名月2 日 前言 近年来。随着现代工业的迅猛发展，人类生存环境的不断恶化，合成药物产生出越来 越明显的副作用，使人类疾病谱发生了很大变化，一些疑难病和药源性疾病大量出现。而 且，科学家们通过研究发现，化学合成品在生物学活性、营养生理作用和安全性上均无法 与天然产物媲美；天然产物是寻找细胞保护和细胞调节药物的最大源泉，因为他们本身在 生物体内就起细胞保护和细胞调节作用。人类“回归自然”的呼声日益高涨，世界性医学 科学“崇尚自然，返朴归真”已成为一种大趋势，天然产物越来越受到人们的重视和青睐， 提取天然产物中的功能物质已成为全世界的研究热点和重点。以具有生物活性的天然产物 为先导化合物进行结构修饰研制新药的工作，取得了很大进展，进一步促进了人们对天然 产物有效成分的提取精制研究。匈牙利草药杂志曾预测2 0 0 0 年应用的植物制剂所占比 例发达国家将达到3 5 4 0 ，发展中国家达到8 0 ，全世界的天然产物消耗量将达到5 0 5 5 ，美国、日本、新西兰、德国等国家纷纷投入巨资开发天然药物，以弥补化学药品的 不足，同时争夺巨大的国际市场。如日本的年中成药销售额近1 3 0 亿美元，相对而言，中 国作为中草药大国，出口中成药品种少，仍以原料药材为主，己危及我国作为中药大国、 强国的地位。为此，我们更应充分利用我国丰富的天然产物资源，革新传统天然产物提取、 分离方法，加速中草药产业化、现代化建设，赢取更广阔的天然药物市场。 熊果酸( u r s o l i ca c i d ) 是多种天然产物的功能成分，属于有机三萜酸，具有镇静、 抗炎、增强机体免疫力、抗菌、美白、抗癌等药理作用，近年更被中国医学科学院肿瘤医 院实验证明其有望成为低毒、有效的新型天然抗癌药物，因而正日益受到众多学者的重视。 根据世界卫生组织及国内外有关疾病谱的报道，今后l o 年世界性新药的研究动态将以脑 功能改善药、心脑血管疾病药、抗肿瘤药等为主要方向，因此，研究以毛泡桐为原料提取、 分离纯化熊果酸具有较高的药用价值和学术研究价值，符合当前的研究趋势。 泡桐为玄参科泡桐属植物泡桐( p a u l o w n i af o r t u n e i ( s e e m ) h e m s l ) 或毛泡桐 p t o m e n t o s a ( t h u n b ) s t e u d ) 。我国很早就己人工栽种，资源非常丰富。熊果酸为其主要 功能物质之一，确立以毛泡桐为原料提取、分离纯化熊果酸的工艺研究具有以下几个特点 和特色： 一实用性强防病治病 熊果酸具有镇静、抗炎、增强机体免疫力、抗菌、美白、抗癌等药理作用，近年更被 实验证明有望成为低毒、有效的新型天然抗癌药物，是一种对人类非常有益的产品，因此 3 本课题具有极强的实用性。 二学术价值高，提取产率高 虽然，早在1 9 3 1 年就有日本人从毛泡桐叶中分离出熊果酸的研究报道，但迄今为止， 对毛泡桐或泡桐的化学成分的系统研究国内还鲜有研究，国外也仅仅是初步的探索和研 究，所以，确立以毛泡桐为原料提取、分离纯化熊果酸的工艺研究具有较高的学术理论价 值，在一定程度上充实了国内对毛泡桐叶中有效成分熊果酸的提取、分离纯化研究的进展。 同时，更重要的是，齐墩果酸( o l e a n o l i ca c i d ) 和熊果酸同属三萜酸，结构、性 质极为相似，极性几乎相同，两种成分在天然产物中又似乎经常共存，分离十分困难。以 毛泡桐为原料提取、分离纯化熊果酸十分有效的避开了分离熊果酸和齐墩果酸的难题，使 得产率大大提高，成本降低，这就为熊果酸的研制开辟了一条新的原料路线。 三工艺精炼可行，应用价值高 实验摒弃了多步有机溶剂液液萃取，从而大大降低了产品中游离的有机溶剂的残毒， 且工艺流程精炼易行，所用试剂，仪器及设备价廉易得，无论实验室或工业化操作均易进 行。 实验原料取自每年春、秋两季毛泡桐的落叶和落花，不仅不花钱而且可实现“废物利 用”，所得熊果酸产品附加值高，若工业化生产，经济效益好，有较高的推广应用价值。 三绿色环保，一举数得 实验原料为每年春、秋两季毛泡桐的落叶和落花，在保证了熊果酸在毛泡桐中高含量 的基础上既实现了对原植物的可持续利用，不破坏原植物资源及其正常的生长繁殖，又有 效利用了毛泡桐自然的落叶和落花，达到了“废物利用”的目的。非但对环境无害，而且 利用现有资源分离出熊果酸这种天然药物，是造福人类，一举数得的“绿色”项目。 四系列研究，有广度也有深度 实验内容为系统研究以不同采集期、不同部位毛泡桐为原料提取、分离纯化熊果酸的 工艺流程、最佳工艺条件及熊果酸含量的变化规律，最终得到含量大于9 6 的熊果酸产品。 从广度上而言，对毛泡桐不同采集期、不同部位提取、分离纯化熊果酸作了系列研究，初 步摸清了毛泡桐中提取、分离熊果酸可利用的部位及原料最佳采收时间；从深度上而言， 完成了从实验原料采收到最终得到熊果酸纯品的整个工艺流程，达到了实验预定目标，为 开发利用毛泡桐作了初步、有效、成功的探索，也为日后中试提供了操作依据和技术保证。 五充分利用当地资源，利国利民 我国泡桐资源非常丰富，陕西地处我国中西部，中草药资源丰富，境内秦巴山区位于北 4 纬3 1 。4 2 一3 4 0 4 5 ，东经1 0 5 。4 6 一1 1 1 。1 5 ，南北纵越纬度3 度，东西横跨经度5 5 度，是长 江与黄河流域的分水岭，我国南北气候的分界线，总面积7 5 万平方公里，占全省总面积 的4 0 ，气候分暖温带半湿润气候与亚热带湿润气候两大类型，具有多样生物生存的条件， 从而形成了陕西中草药含量丰富，品种多、分布广的特点。泡桐在我省非常普遍，除各地 闲散分布外还有人工泡桐林，集中于关中平原和渭北高原，垂直分布于秦岭巴山1 0 0 0 1 4 0 0 米左右。研究以不同采集期、不同部位毛泡桐为原料提取、分离纯化熊果酸可充分利用省 内丰富的泡桐资源，解决当地过剩的劳动力资源，对繁荣陕西经济有着积极的意义，也是 对当前开发西部号召的积极响应，更是实现中草药现代化的重大课题。 5 第一章综述 本章i 要综述了富舍熊幂酸的天煞产抽的化学成分和焉理作用研究造展，尤其特别介 绍了 色桐的研究近况和生善蕞的焉t i t 作用研究连展，弄简明花要地介绍了天蓝产物分离纯 化的几种幸用方珐和日前冁新的几种斯型分离方技。 1 1 熊果酸的研究近况 熊果酸( u r s o l i c a c i d ) 是多种天然产物的功能成分，天然产物的功能成分是指化学 上的单体化合物，能用分子式和结构式表示，并具有一定的物理常数和生理活性，这些有 效成分可应用于药品、食品、化妆品或其他精细化学品，有的价值很高。 熊果酸( u r s o l i ca c i d ) ，又名乌苏酸，乌索酸。 分子式为c ，o h 4 s 0 3 ( 结构式见右图) ，属有机三萜 酸，熔点2 8 5 2 8 8 c ，溶于甲醇、乙醇、氯仿、丙 酮等，不溶于水及石油醚。早期报道通常作为乳 化剂用于食品工业，近年来随着对其研究的深入， 认为熊果酸还具有抗炎、抗菌、降酶、提高机体 免疫、抗癌等功效，临床报道对高尿糖高血糖有 显著抑制作用，与山楂之合剂能扩张冠状血管， 可治冠脉循环及心功能不足【l 】，有着重要的药用 开发价值。 c h 3c h 3 熊果酸结构式 熊果酸具有镇静、抗炎、增强机体免疫力、抗菌、美白、抗癌等药理作用，近年更被 中国医学科学院肿瘤医院实验证明其有望成为低毒、有效的新型天然抗癌药物，因而正日 益受到众多学者的重视。近年来对从天然产物中分离纯化熊果酸的研究及其药理作用的研 究日益增加，现综述如下。 1 1 1 含有熊果酸的天然产物资源 我国幅员辽阔、地形复杂、气候多样，蕴藏了丰富的中草药资源。据1 9 8 2 年全国规 模的中药资源普查数据表明：我国共有植物药1 1 1 4 6 种，其中菌类1 1 5 种，苔藓类4 3 种， 地衣类5 2 种，蕨类4 5 6 种，种子植物1 0 1 8 8 种。其中目前己知的含熊果酸的中草药就达 表1 11 7 种富含熊果酸的植物资源 植物名科属资源分布数量采集有效成分 i 女贞( 冬青子) 木樨科 山系萸( 蜀 山系萸 药枣)科 ， 。慕薛蓑黯， 杜鹃科 。 ( 小叶枇杷) “”1 1 4 软枣猕猴桃猕篓桃 5冬凌草厝形科 6夏枯草唇形科 华东，华南，西南及 华中等地 山西，河南，山东，陕 西等地 甘肃，青海，四川等 地 华北，西北，东北及 长江流域 河南 全国大部分地区 均有分布 较多勰 较多l 成o - 熟i i 器 。全年可采， 较多i 描写硅 较多纂辩夏字术叮 较多全年可采 夏季果穗里 较多棕红色时采 簋 熊果酸，齐墩果酸， 乙酰齐墩果酸 熊果酸，山茱荑甙， 没食子酸 黄酮，熊果酸，甙类 猕猴桃碱，熊果酸， 胡萝h 甙 熊果酸，齐墩果酸 齐墩果酸，熊果酸 ，薇舾，撇蝴较多秉零鎏熊粥酸， 全瓣辫豁， 9枇杷叶 蔷薇科广东差戮、江福 较多全年可采 熊果酸 齐墩果酸 。辅平车前车前科黑毒警争较多薰耋茎黧鼍黧愁害 ，满山红杜黔刺臀古较多秋冬笋采熊霁譬豢 2鹿衔草 鹿薯草 华北，东北等地 较多夏季羹草采熊身! i ；i 篥嚣砖 1 3 等蔼借冬青科浙江篱籍西两较多4 月不宜采集熊是裂城， 1 4 白花蛇舌草茜草科云嚣纂露浙较多夏季采收熊果笔嚣果酸 1 5 柿叶( 蒂)柿科全国各地较多叶全年可采 熊芎躺嚣酡 m柳穿鱼 玄参科东北，内蒙等地较多 霁善橥蓑柳；曩垒翥器熊 4 0 余种之多，分别是：车前，山植叶、山茱萸、女贞叶、千屈菜、水杨梅、白花蛇舌草、 地椒、地榆、杜鹃花叶、冬凌草、枇杷叶、苦丁茶、枸骨叶、柿叶、柿蒂、泡桐叶、夏枯 草、车前、金钱草、鹿寿草、峨嵋蔷薇、羊角藤、红筷子、君迁子、栀子、乌木屑、萝芙 木、越橘叶、猕猴桃、蔷薇、满山红、秋枫木、刺蜜、迷迭香、鹩哥舌、麝香草【1 】等。以 7 上表1 1 列出1 7 种含有熊果酸天然产物的资源分布及有效成分。 1 1 。2 几种富含熊果酸的天然产物的研究进展 从掌握的资料来看，近年来研究较多的富含熊果酸的天然产物主要有：女贞，山茱萸， 夏枯草，冬凌草，苦丁茶，猕猴桃，车前，山楂等。以下将主要介绍五种含有熊果酸的天 然产物在资源、化学成分及临床药理等方面的研究进展。 一女贞的研究进展 女贞( l i g u s t r l u c i d u m a i r ) 为木樨科冬青属植物。又名桢木( 山海经) 、冬青、 蜡树( 纲目) 、将军树( 林安县图经) 。为常绿大灌木或小乔木，生长于山野，多栽植 于庭院。分布华东、华南、西南、及华中各地。其果实( 女贞子) 、根皮( 女贞皮) 、叶( 女 贞叶) 均可供药用。近年来对女贞的研究主要集中在其果实和叶上，对其化学成分的研究 主要集中在齐墩果酸和熊果酸上。 1 药材鉴别及含量测定 市场上的主要伪品有：鸦胆子、小叶女贞。陈沪宁、牛宇东等对三者进行了形状、粉 末特征的详细鉴别j 】，为保证临床用药提供了试验依据。 吕曙光等对2 3 个女贞子样品进行熊果酸含量测定，结果以广州市、高要、内江市三 个样品中的含量较高，其中最高的达到69 9m g g 生药【7 】。 2 化学成分 近年来，中外学者陆续从女贞子中分离出的化学成分有：齐墩果酸、硬脂酸、熊果酸、 甘露醇、葡萄糖、棕榈酸、油酸、乙酰齐墩果酸、蚂蚁醛甙、橄榄苦甙、4 羟基b 一苯乙基 一d - d - 葡萄糖甙、3 、4 - 二羟基- 苯乙基- p d - 葡萄糖甙、木樨蚂蚁醛甙、橄榄苦甙酸、脂肪油 等。研究表明女贞子含磷脂约0 3 9 ，其挥发油成分主要为大量酯、醇及醛类，其次是 硫酮和烃类不含萜烯类，这点与一般植物挥发油不同【引。女贞子中还含有1 5 种氨基酸， 以谷氨酸含量最高，并具备成人必需的7 种氨基酸，婴、少年必需的组氨酸m 。女贞子申 所含11 种微量元素7 种为人体宏量元素，5 种为人体必需元素f 1 0 1 。 女贞叶含三萜及多元醇类化合物，其中以熊果酸、齐墩果酸、甘露醇、女贞酸为主。 此外还有丁香甙( s y r i n g i n 3 、苫杏仁甙酶、转化酶等。 3 从女贞子中提取熊果酸提取流程n i 8 女贞子粗粉三蔓旦墅塑马 回收溶剂 浸膏堑塑幽燮b 回收溶剂，抽滤 j 嘤慧樊牛液体堂堂骂 合并相同流份 r 齐墩果酸晶体 l 母 液j 型堡璺望马熊果酸晶体 二山系萸研究进展 山茱萸为山茱萸科灯台树属植物山茱萸( c o m u so f f i c i n a l i ss i e be t z u c c ) 的果实。 异名蜀枣( 本经) 、山萸肉( 小儿药证口诀) 、药枣( 四川中药志) 等。原植物为落 叶灌木或小乔木，生于山坡灌木从中。分布于山西、陕西、山东、安徽、浙江、河南、四 川i 等地。 1 药材鉴别 山茱萸别名蜀枣，云南地区产一种滇皮枣，又名酸枣皮，为鼠李科枣属滇刺枣( z i z y p h a s m a u r i t i a n a l a m ) 的果皮。四川德昌等地有一种土枣皮，则为蔷薇科樱桃属植物雕核樱桃 的果皮，均应注意鉴别。 2 化学成分 近年来，中外学者陆续从山茱萸中分离出的化学成分有：山茱萸甙( c o r i n ) 、熊果酸、 没食子酸、苹果酸、酒石酸、v i ta 、马钱素皿o g a l l i n ) 、莫诺甙 重o h 0 n i s i d e ) 、狼牙菜甙 ( s w e r o s i d e ) 、山茱萸新甙( c o 咖s i d e ) 、没食子酸鞣质、鞣花鞣质、p 谷甾醇，并首次从天然 界中分得脱水莫诺甙元( d e h y d r o m o n d n i a 9 1 y c o n e ) ，首次从该科植物中分得5 羟甲基糠、5 - 5 二甲基糠醛醚、7 脱氢马钱索【”1 。 3 药理、临床 8 0 年代初，通过对八昧丸的拆方研究，发现其中主要起降血糖作用的是山茱萸，并进 一步弄清了其有效成分是熊果酸”1 。山茱萸中的熊果酸在体外能快速杀死培养细胞，使培 养淋巴细胞几乎完全失去淋转、白细胞介素- 2 生成、l a k 细胞( 淋巴因子激活的杀伤细胞) 产生能力，但腹腔注射熊果酸的小鼠上述三种指标均明显提高。 9 )弃(i 晶 晶 厂，r、l 4 从山茱萸中提取熊果酸提取流程【1 2 1 山茱萸干燥果肉j 型塑燮浸膏一堕苎一 f甲醇水部分 乙酸乙酯溶剂系统萃取l _ 主蔓墨重专山茱萸浸膏 一至堕壁星笪一 o 5 甲醇氯仿洗脱部分 氯仿重结晶氯仿甲醇梯度洗脱 熊果酸 5 羟甲基糠 b 谷甾醇 三夏枯草研究进展 夏枯草( p r u n e l l a v u l g a r i sl ) 为唇形科夏枯草属植物。异名大头花( 浙江中药手 册) 、白头草( 河北药材) 、干叶叶( 陕西中药志) 等。多年生草本，生于荒地、路 旁及山坡草丛中，全国大部分地区均有分布。 1 药材鉴别及含量测定 夏枯草属植物全世界约1 5 种，广布于欧亚温带地区，非洲西北部及北美洲；我国产4 种3 变种，其中一种为引种栽培。我国原记载一种，即为上述。中国植物志现记载三 种，另外两种为山菠菜a s i s t i an a k a i ) 、硬毛夏枯草( p h i s p i d ab e n t h ) 。从有效成分总三 萜含量来评价，夏枯草三个种都可作药用，从熊果酸含量来评价，以夏枯草为最佳。王海 波等对三种夏枯草不同部位熊果酸的含量进行了分析测定，并对不同采收季节的熊果酸含 量进行了测量，结果表明，花期采收叶中熊果酸含量最高，果序期采收穗中熊果酸含量最 高【1 4 1 。王海波等还对这三种夏枯草中的挥发油成分进行了研究，结果表明三种夏枯草均含 十六烷酸，含量分别为1 7 1 6 0 、5 1 5 2 、3 4 8 5 。 2 化学成分 夏枯草主含三萜类、黄酮类、香豆素类及甾体糖甙类成分。全草含三萜皂甙、其甙元 是齐墩果酸、熊果酸、芸香甙( r u t i n ) 、金丝桃甙( h y p e r o s i d e ) 、顺( 反) 一咖啡酸、维生 素b l 、c 、k 、胡萝h 素等。孟正木从夏枯草中还分离出p 香树脂醇、b 谷甾醇、胡萝h 甙 叫 等，并首次从该属植物中分得2 个各由一对立体异构体组成的混合物齐墩果烷1 2 烯一2 8 醛3 p 羟基和乌索烷- 1 2 烯2 8 - 醛3 p 羟基及齐墩果烷1 2 烯一3 p ，2 8 二羟基和乌索烷1 2 烯 一3 8 ，2 8 二羟基。 夏枯草花穗含飞燕草素( d e l p h i n i d i n ) 、矢车菊素( c y a n i d i n ) 、d 一樟脑( d c a m p h o r ) 、d 一小茴香酮( d t e n c h o n e ) 。 浦湘渝等研究了硬毛夏枯草，并从中分得1 3 - 谷甾醇、白桦脂酸、熊果酸、和夏枯草酸， 其中夏枯草酸为一新三萜化合物“1 。张颖君等从法国产夏枯草中分离出2 个新的乌索烷型 三萜皂甙一夏枯草甙( p r u r u l o s i d e ) a 和b i r n 。我所孙来九教授等研究了以夏枯草为原料提取 熊果酸的工艺条件 1 8 】。 3 从夏枯草中提取熊果酸的工艺流程1 6 1 夏枯草粉二业理兰丝型墼童望生j提取液型鱼! 垒童z _ 小体积 j 塑型竖马单熊果酸 四冬凌草研究进展 冬凌草为唇形科香茶菜属植物碎米桠 r a b d o s i ar u b e s e e n s ( h e m s l ) h a r a 的全草。又名 冰凌花。历代未见收载，1 9 7 2 年从河南林县民间发掘出来。为小灌木，高3 0 4 0 米，生于 山坡、灌丛、林地等处，分布于河南、河北、山西、甘肃、四川、贵州、湖南、湖北、广 西、江西等地。 l 有效成分含量测定 袁珂用h p l c 法测定了冬凌草中熊果酸、齐墩果酸的含量1 9 】，冬凌草全草熊果酸的含 量为o4 1 4 ，齐墩果酸含量为o4 6 6 ；他还用双波长薄层扫描法测定了河南济源、信阳 不同采集期冬凌草叶中冬凌草甲素和冬凌草乙素的含量，结果表明：济源太行山区8 月份 的冬凌草甲素和冬凌草乙索含量最高，为最佳采收期口0 1 ；冀春如【2 1 1 等用薄层扫描法测定 了河南济源太行山区冬凌草中熊果酸、齐墩果酸的含量，结果表明熊果酸平均含量为 o2 3 9 ，齐墩果酸平均含量为o 5 2 0 。 2 化学成分 冬凌草中的主要成分为萜类化合物，含量较高的是二萜和三萜类。二萜中的主要有效 成分是冬凌草甲素和冬凌草乙素；三萜中的主要有效成分是齐墩果酸和熊果酸。孙汉董等 曾系统地对河南不同地区产( 济源、鲁山、信阳、卢氏) 冬凌草的化学成分进行了研究， 分离出l o 个二萜类生理活性成分，再加上其他学者前后分离出的二萜，其叶中共有、甲 素、冬凌草乙素、冬凌草丙素、冬凌草丁素、冬凌草戊素5 个新二萜，这5 个新二萜的结 构中甲、丙、戊素在c 7 和c 2 0 之间有氧环，乙素在c 7 和c 2 0 之间，c 1 4 和c 2 0 之间有2 个 氧环，而丁素在c 7 和c 2 0 之间无氧环f 2 列。1 9 8 4 年秦崇秋等从鲁山冬凌草叶中分离出一个 新二萜鲁山冬凌草素田1 ；同年孙汉董从信阳冬凌草中分得信阳冬凌草甲素和乙素；郑新荣 等从卢氏冬凌草中分离出卢氏冬凌草素【列1 ；1 9 8 5 年李继成等从鲁山冬凌草中分得一个新的 二萜化合物鲁山冬凌草戊素( l u s h a n r u b e s e n s i ne ) 1 ；1 9 8 8 年孙汉董等从贵州冬凌草中分得 一个新二萜化合物贵州冬凌草素( 鲥d o n g n i n ) 及卢氏冬凌草甲素( 1 u d o n g n i na ) 2 2 1 ；孙小 平等从四川南川县产冬凌草叶中分得一个新二萜化合物，命名为碎米亚甲素【2 6 】；1 9 9 4 年潘 炉台等从施秉县产冬凌草中分离得到贵州冬凌草素、卢氏冬凌草素和熊果酸【2 7 7 。 目前对冬凌草化学成分的研究主要集中在熊果酸和齐墩果酸上。 五苦丁茶研究进展 苦丁茶( i l e x k u d i n g c h ac j t s e n g ) 为冬青科( a q i f o l i l c e a e ) 植物枸骨( i l e x c o r n u t a l i n d l ) 、大叶冬青( i l e x l a t i f o l i a t h u n b ) 和苦丁茶冬青( i l e x k u d i n g c h ac j t s e n g ) 的叶。 本品果实似丁，其叶代茶而味苦，故名苦丁茶。对苦丁茶原植物及使用地区进行调查，共 计有5 科1 6 种1 变种植物在不同的地区作苦丁茶使用或称作苦丁茶，经鉴定作为苦丁茶 使用的市场商品隶属4 科1 1 种( 含1 变种) 植物2 蚋。不同地区植物来源不同：冬青科枸骨叶 ( i l e xc o m u t al i n d l ) 、大叶冬青( e xl a t i f o l i at h u n b ) 、苦丁茶( n e xk u d i n g c h ac j t s e n g ) 等在 华东、华中、华南一带广泛使用；十大功劳 m a h o n i ab e a l e i ( f o r t ) c a n 在秦岭以南各省 广泛使用。 苦丁茶又名苦灯茶、毛叶黄牛木( 广西植物名录) 、黄浆果、土茶( 新华本草纲要) 等。为常绿乔木，分布华东、广西、广东等地。 1 有效成分含量测定 郭亚健等对不同采集期枸骨叶的熊果酸含量进行了测定，结果表明：4 月份熊果酸含 量较低，其余月份含量均较高，最高可达1 【”1 。 2 化学成分 枸骨嫩叶中含熊果酸、齐墩果酸、冬青甙i 甲酯、冬青甙i i 、地榆甙i 、羽扇豆醇、 胡萝h 甙、苦丁茶甙甲、苦丁茶甙乙、苦丁茶甙丙、苦丁茶甙丁、苦丁茶糖酯素甲、苦丁 茶糖酯素乙、3 、4 - 二咖啡酰鸡纳酸、3 、5 - 二咖啡鸡纳酸、腺甙等。 我所孙来九教授等以枸骨叶为原料，采用正交实验筛选出提取熊果酸的最佳工艺，提 取率达9 0 t ”l 。q i nwj e ta l 研究了枸骨叶，从其甲醇提取物中分得两个新三萜甙：p o m o l i c a c i d 3 - 0 - d - l 一2 a c e t o x y a r a b i n o p y r a n o s y l 2 8 一o d - g l u c o p y r a n o s i d e和2 9 - h y d r o x y o l e a n o l i c a c i d3b 。0 - l a r a b i n o p y r a n n o s y l 一2 8 o - d g l u c o p y r a n o s i d e 3 u 。文永新等研究了苦丁茶 冬青，从其石油醚中分的三种成分：a 一香树脂、b 一谷甾醇及熊果酸。从其水溶部分得到 一种新成分，命名为苦丁茶甙元( k u d i n g c h a g e n i n ) 3 2 1 。欧阳明安等从苦丁茶叶子萃取物 的氯仿部分共分离出l o 个三萜化合物，其中4 个为新的三萜酯，分别是：香树醇3b 棕榈酸脂，1 1 羰基q 香树醇b 棕榈酸，3b 羟基羽扇2 0 ( 2 9 ) 烯2 4 羧酸甲酯和羽扇 2 0 ( 2 9 ) 烯2 4 一羧酸甲酯31 3 棕榈酸酯【3 3 】。 3 从苦丁茶中提取熊果酸的工艺流程1 3 4 l r 萃余相( 弃去) l 苦丁茶圣旦斗提取液塑型马浸膏型型马1 l 萃取相 等翥耋关芦洗脱液坚马兰堡墅马熊果酸晶体 1 1 3 含有熊果酸的中药及其分析b 捌 ( i ) 山茱萸科 杞菊地黄丸、六昧地黄丸、麦味地黄丸、知柏地黄冲剂、抗癫丸、滋阴养肾冲剂、乙 转灵片等都以山茱萸为君药，其有效成分以熊果酸含量记。熊果酸含量检验方法主要以薄 层色谱为主，如六味地黄丸规定小蜜丸或大蜜丸熊果酸含量不得少于0 0 1 3 ，水蜜丸熊果 酸含量不得少于0 0 2 ；乙转灵片熊果酸含量约为0 1 7 m g 片。 ( 2 ) 唇形科 复方降压胶囊以唇形科夏枯草为君药，进口药爱活丹以欧活血丹为君药，熊果酸为这 两种药的主要有效成分。 ( 3 ) 蔷薇科 心可舒片、健儿宁冲剂、大山楂丸、山楂化滞丸等都以山楂为君药，山楂中以测熊果 酸含量记总有机酸量。 ( 4 ) 茄科 13 活血止痛冲剂由单味药材茄科陆英经适宜工艺加工而成，熊果酸是陆英中的主要成分 之一，对其含量的测定可有效控制产品的内在质量。 ( 5 ) 其他 藏药然降多吉胶囊是由翼首草、诃子、独活、川木香、麝香和制草乌等多味药材组成 的制剂，翼首草的主要成分是熊果酸，是其药效的有效成分之一。 这些含有熊果酸的中药多用薄层扫描进行含量测定，由于熊果酸在植物体内存在形式 的复杂性，其薄层扫描分析条件也多种多样，如下表所示： 表l 一2 含有熊果酸的中药薄层色谱分析条件 中药展开剂 显色而 杞菊地黄丸 抗癫丸 乙转灵片 滋阴养。肾冲剂 复方降压胶囊 爱活丹 环己烷一氯仿一乙酸乙酯( 2 0 ：5 ：8 ) 环己烷一乙酸乙酯一冰醋酸( 9 ：3 ：0 2 ) 环己烷一氯仿一乙酸乙酯( 2 0 ：5 ：8 ) 甲苯一丙酮一甲醇一甲酸( 6 ：6 ：0 5 ：1 ) 石油醚一二氯乙烷一冰醋酸( 1 0 ：1 5 ：1 ) 环已烷一氯仿一乙酸乙酯一甲醇 ( 2 5 ：1 5 ：5 ：2 ) l o 硫酸乙醇 l o 硫酸乙醇 2 硫酸乙醇 3 0 硫酸乙醇 1 0 硫酸乙醇 l o 蛹酸乙醇 心可舒片 环己烷一氯仿一乙酸乙酯( 2 0 ：5 ：8 )5 9 硫酸乙醇 健儿宁冲剂 氯仿一丙酮一冰醋酸( 1 8 ：2 ：0 2 )l o 硫酸乙醇 活血止痛冲剂 环己烷一乙酸乙酯一冰醋酸( 1 7 ：2 ：1 )5 磷钼酸乙醇 1 1 4 泡桐的研究进展 根据地质历史资料和形态、生态综合分析，陈志远等【删认为在第三纪早期，泡桐属中 国还只有一种，到第三纪中新世时，方分化成华东泡桐( p a u l o w n i a k a w a k a m i i ) 和毛泡 桐( p t o m e n t o s a ) 两个种。在第三纪地层中，毛泡桐叶的化石在我国山东、法国、捷克 和北美都有发现。 现代认为，泡桐为玄参科泡桐属植物泡桐( p a u l o w n i af o r t u n e i ( s e e m ) h e m s l ) 或 毛泡桐( p t o m e n t o s a ( t h u n b ) s t e u d ) 。我国很早也己人工栽种，资源。泡桐在我省非常 普遍，除各地闲散分布外还有人工泡桐林，集中于关中平原和渭北高原，垂直分布于秦岭 14 巴山1 0 0 0 一1 4 0 0 米左右畔1 ，储量非常丰富。泡桐身都是宝，根据民间经验试用于临床， 泡桐叶、花、果、枝等均有一定的疗效。 泡桐花始载于河南中草药手册，临床报道可治疗炎症感染，将其制成注射液、片剂、 药膏、水剂等多种剂型，治疗1 6 种疾病记2 4 4 例，均有一定疗效【4 5 1 。 1 泡桐化学成分研究迸展 毛泡桐叶，异名桐叶( 本经) ，白桐叶( 本草经集注) 。目前已知的化学成分有桃 叶珊瑚甙( a u c u b i n ) 、泡桐甙( ( p a u l o w n i o s i d e ) 蛔、毛蕊花甙( v e r b a s c o s i d e ) 、异毛蕊 花甙( i s o v e r b a s c o s i d e ) 1 4 7 1 、熊果酸( u r s o l i ca c i d ) 、乙酰熊果酸d 、b ( a c e t y lu r s 0 1 i c a c i da 、口) 1 3 。 毛泡桐树皮含洋丁香酚甙( a c t e o s i d e ) 、松柏甙( c o n i f e r i n ) 、丁香甙( s y r i n g i n ) 、 梓醇( c a t a l p 0 1 ) 钥；木部含咖啡酸糖酯( c a f l e i ca c i d s u g e re s t e r s ) a 、b 【4 8 1 ，泡 桐素( p a u l o w n i n ) 、芝麻素( d s e s a m i n ) 【4 9 】、丁香酚( s y r i n 9 1 ) 、木质素( 1 i g n i n ) s q 、全纤维素( h o l o c e l l u i o s e ) 、d 一纤维素( a c e l l u l o s e ) 、戊聚糖( p e n t o s a n ) 、 d - 细辛素( d a s a r i n i n ) 【1 1 ；树干含紫葳新甙( c a m p n e o s i d e ) i 、i i 、角胡麻甙( m a n y n o s i d e ) 、 洋丁香酚甙( a c t e o s i d e ) 5 3 1 。 毛泡桐花含香精油”、熊果酸。 毛泡桐果实含桐酸、脂肪油、黄酮类、生物碱等【1 l 。 2 熊果酸的药理作用研究进展 ( 1 ) 镇静 熊果酸有明显的安定和降温作用，能降低大鼠的正常体温，减少小鼠自发活动，并能 增强戊巴比妥的催眠作用和抗戊四唑的攒晾厥作用”5 1 。 ( 2 ) 抗炎 熊果酸尚有抗炎，增强肝糖元，降低心肌、横纹肌肌糖元及糖皮质激素作用，动物实 验表明，熊果酸1 0 0 0 m g k g 有降低血清转氨酶的作用【”】。 ( 3 ) 增强机体免疫力 熊果酸在体外能快速杀死培养细胞，使培养淋巴细胞几乎完全失去淋转、白细胞介素 一2 生成、l a k 细胞( 淋巴因子激活的杀伤细胞) 产生能力，但腹腔注射熊果酸的小鼠上述 三种指标均明显提高1 1 孙。 ( 4 ) 抗菌 熊果酸在体外对革兰阳性细菌、革兰阴性细菌和酵母菌有抑制作用，对培养的肝癌 细胞有明显的抑制作用，并能延长荷艾腹水癌小鼠的生命p 7 1 。 ( 5 ) 扩张冠状血管 有人报道，熊果酸与山楂之合剂能扩张冠状血管，可治疗冠脉循环及心功能不足，但 也有人认为其对冠状血管并无特异作用，而是由于熊果酸不溶于水，因而静脉注射后在体 内形成小颗粒，伤害了肺脏，引起机体的各种反应【j 1 。 ( 6 ) 美白 熊果酸可防止麦拉宁黑色素的形成，因而正在化妆品领域得到进步应用。i s p a 推出 精质熊果酸；植物精华结合植物香精油研制而成的s i s l e y 美容系列产品，全新推出抗皱 活肤驻颜霜，它运用最先进的技术，采用具高度再生作用的新成分熊果酸，含v a 、v e ，v f 综 合维生素，可有效改善肌肤组织对抗游离基，在欧美引起轰动【”l 。 ( 7 ) 抗癌 熊果酸或其盐作为单一的活性成分可用于抑制各种癌症，游离熊果酸有高抗转移作 用，减少副作用，并能增强用药的安全性。近年来研究表明，熊果酸可对抗致癌物质如 b ( a ) p 、黄曲酶素b ：诱发的基因突变，抑制t p a 对二甲基苯并葸( d m b a ) 诱导的小鼠皮 肤癌的促癌作用：而且熊果酸对p 一3 8 8 和l 一2 1 0 白血病细胞，a 一5 4 9 人肺腺癌细胞等多种 肿瘤细胞有细胞毒性作用 5 9 - 6 3 l 。 中国医学科学院肿瘤医院内科孙燕教授首先发现，熊果酸是很好的免疫增强剂，有可 能成为耨的抗癌药用于临床。黄镜博士对熊果酸的抗肿瘤作用及机理进行深入研究发现， 熊果酸能明显抑制h l 一6 0 细胞增殖，可诱导其凋亡，能使小鼠巨噬细胞吞噬功能显著提高， 其抗癌机理是抗增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。体内试验表明，熊果酸能明显增强机体免疫功 能，说明其抗肿瘤作用广泛，极有可能成为低毒、有效的新型抗癌天然药物胁6 舢。 3 泡桐的其他应用 中草药能提高畜禽防病抗病能力，无毒无副作用，被视为可代替化学合成药物且安全 性能好的新一代饲料添加剂。近年来，我国不少畜牧工作者，开发研究了中草药对畜禽的 增产作用，以达到少投料，多产肉、蛋、奶增加养殖收益的目的。同时，中草药有效成分 的分析研究也有新进展，为今后进一步研究应用中草药添加剂提供更可靠的科学依据。 为多途径、多渠道广辟饲料来源，开拓饲料新领域，解决饲料不足的问题，林产叶粉 资源的开发和利用不可忽视。我国1 9 亿多亩的森林面积，可提供大量的树叶资源，经过 适当的处理，不但营养丰富，还可节约大量粮食，降低饲料成本，提高生产性能。泡桐花、 叶作饲料由来已久，早在博物志中记载：“桐花、叶饲猪，极能肥大且易养”。桐叶 产量高，养分齐全，干物质含粗蛋白质1 9 3 3 ，粗纤维1 1 1 1 ，粗脂肪5 8 2 ，无氮浸出 物5 4 8 3 ，钙1 9 3 ，磷0 2 1 ，并含有赖氨酸和蛋氨酸等1 6 种氨基酸及维生素c ；尤其 重要的是，泡桐花、叶内含有天然植物抗生素类物质，其提取液对多种肠道杆菌、绿脓杆 菌及葡萄球菌有抑制作用，将其用于饲喂牲畜，又十分明显的促生长、促增重、提高饲料 转化率的作用。韩绍忠等( 1 9 9 0 ) 将泡桐叶粉按5