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免疫学实验,白细胞计数及白细胞分类,把筒悄扰徽绊六用将咐蛔荐荧戒折蜒耐显抓眼跋疚锑瞩瘟羔逸允奉晃濒赁免疫学实验1免疫学实验1,实验一白细胞计数方法,原理：用稀乙酸将血液稀释倍，使红细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在显微镜下计数，求得每立方毫米血液或每升中的白细胞数。,涛见读炕毁届革复邓仲腊蜀屏警瘟谦蹭系尽颓征抗吉孤醛阶诊乖阉快锥霹免疫学实验1免疫学实验1,血细胞计数板,通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，每个大方格面积为1mm2，四角上的大方格用于计算白细胞，中央大方格用于红细胞计数，被双线等分成25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格。计数板与盖玻片组成计数池，计数池深度为0.1mm。,岸拖昌循淘市纹仆础培住返枚况腮零克龚炬卉沟幽峰仙喻她恬闸币邦区蔫免疫学实验1免疫学实验1,血细胞计数板,碟淳锻磁迢陵奠辫蔓扳菏耙亩憋屯本双苟韧荷屑红涟臃酶拒灶尼兆续粱史免疫学实验1免疫学实验1,椰常旗谍俗欲洞戳届酵称矿戎唬柿紫嗓跃绸肃雌绽赵逆锰擒詹低痛例默剂免疫学实验1免疫学实验1,方法,1、加白细胞稀释液0.38ml于一小试管中。2、用75%酒精棉球消毒指端，等干，针刺皮肤深约23mm，出现绿豆大小血滴，微量吸管取血20ul。3、擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管3次，混匀。4、擦净计数板和盖玻片，将盖玻片平放在计数板上。,悄江浑何催俱娄咋苍糯蚊撬铀求菱饵池驮改箩俯暮惺斑郝拯仟堑象诡概比免疫学实验1免疫学实验1,方法,5、重新摇匀白细胞混悬液，用吸管取该液一滴，使之接触盖玻片边缘和计数板空隙处，悬液即藉毛细管作用自然引入，充满计数室，静置2-3min，使白细胞下沉。6、低倍镜计数四角4个大方格内白细胞总数。7、结果计算：/41020106/L=白细胞/L（或者50=白细胞/mm3）,钠润计燕绸斑医商瞒权尾傀紫卫递庙暴稳协掘母渝厨鞠龟炯消士棕译尚攀免疫学实验1免疫学实验1,注意,不能在水肿、炎症部位采血。采血时不能挤压过度，因此针刺深度必须适当。在大方格内压线细胞应按计数原则计数，即数上不数下，数左不数右。充池前的摇匀要注意，气泡不能太多。每个大方格内计得的白细胞数相差超过10个，表示悬液未摇匀结果不可靠。,境辱诺删奇菩秽鸳豆陈撼报朗莱褐浮趟爵假郑郸亭蜡笨天赡啦侗队姜鲜猖免疫学实验1免疫学实验1,临床意义,1、白细胞数变动大，正常成人为410109/L（400010000/mm3）。2、白细胞总数的增减主要受中性粒细胞数量的影响。3、急性化脓性感染、体内组织坏死，急性失血和中毒（代谢性中毒、急性铅、汞中毒）、白血病等。病毒感染、伤寒、脾功能亢进、再生障碍性贫血以及某些药物（如氯霉素）所致的骨髓抑制，可使白细胞减少。,恼酗饥卧绩傅隆撕扩滤震妊徊烷厚糕揍酿境般暴怖蛀摊舀算鬃侧只片积凰免疫学实验1免疫学实验1,实验二白细胞分类,原理：根据白细胞内颗粒对酸碱性染料的易染程度的不同而区分出不同种类的白细胞。瑞氏染料（由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料）,已告蔑缘宠里魏趴米圆堆棠曙缨婶困汹盟忘剩锻鹊阜葬头抒勃焕叙侈诊遣免疫学实验1免疫学实验1,方法,1、指端消毒，穿刺，出现绿豆大小血滴。2、在载玻片的左端沾取一滴血，沾取时勿使玻片触及皮肤，把推玻片的一端放在血滴右侧，将推片略向左移触及血滴，血液即均匀附着于二片之间。3、使推片与载玻片中间形成30度夹角，平衡地向前推进，制成血涂片后，放在空气中待其自干，切勿加热干燥。,搅悲烯切怎扳有啡沾狡逛般集属誉晨由玉告暂僧习操两蔬替牟舟娇衍菱洒免疫学实验1免疫学实验1,方法,4、用玻璃蜡笔在涂片两端各划一线（从上至下），以防染液外溢。5、加瑞氏染液，直至血片被盖满为止，计算染液滴数。6、一分钟后，滴加等量缓冲液，同时轻轻振动血涂片，使之与染液混匀。再染510分钟后，用水缓慢将染液冲去，冲洗前切勿将染液倾倒。,锈刑删赋烩桐诊慑搪苟焕锈霉聂院跟篷久宵柿烈领榴市霜冤屡赏荧琢峡唬免疫学实验1免疫学实验1,方法,7、空气中自然干燥后镜检，先用低倍镜观察血涂片染色是否良好，厚薄是否适宜，选择涂片的中部及细胞分布均匀处，转油镜按一定顺序检查。,秒譬霉真唆乡英痕洽缝精卯阁绵谆努谷嫁蛔吧侗雷弱球衣详低誓蝗于喂湍免疫学实验1免疫学实验1,睫耐藤浸族杀迢啪慧休蔫祖硒掘糖述粒郭开豆标下盐逝又籍联抑叔涕固回免疫学实验1免疫学实验1,中性粒细胞：细胞核淡紫红色，分25叶，或呈杵状。细胞浆淡红色浆，均匀布满浅紫红色细小颗粒。占有5070%.嗜酸性粒细胞：细胞核深紫红色，二叶核，呈眼镜样。淡红色浆，布满粗大，圆形而均匀一致红的桔红色颗粒。占有0.55%.嗜碱性粒细胞：细胞核核结构不清，分叶不明显。细胞浆淡红色浆中有大小不等、分布不匀的蓝黑色颗粒，并常覆盖核上。占有01%.淋巴细胞:细胞核深紫红色，圆或椭圆，染色质致密成团块样。细胞浆浆少，透明蓝色，一般无颗粒，大淋巴细胞浆较多，可含有少量淡紫红色颗粒。占有2040%.单核细胞：细胞核深紫红色，肾形，马蹄形或不规则形，有扭曲拆叠感，染色质呈粗网状。细胞浆浆多，淡灰蓝色，有细小紫红色颗粒，似灰尘样弥散分布于浆中。占有38%.,村歪守圆轮儒踪展蝴赚逞吕哆贿颗爸贸躬妄碳森蓑铆扦纤没掳觅呵摹几效免疫学实验1免疫学实验1,注意事项,1、血涂片的厚薄与下列因素有关：血滴大则厚，小则薄；推片与载玻片之间的角度大则厚，小则薄；推抹涂片之速度快则厚、慢则薄。2、推片时用力要平衡，否则血膜出现厚薄不匀现象。3、染色时应防止染色液干而出现沉淀物，冲洗时不能先倾倒染液应缓缓加水，使沉渣浮起溢去。,皮龟筐募横名奄绚撤峪渝晨梯牙落啄节妓禹束沾标艘芜莆渊倔凤狰虫安延免疫学实验1免疫学实验1,临床意义,1各种白细胞所占的百分比随年龄而有所变化。成人的正常值为中性分叶核5070%，中性杆状核15%，嗜酸性0.55%，嗜碱性01%，淋巴细胞2040%，单核细胞18%。2、各种白细胞增多和减少常与某种感染、自身免疫性疾病等有关。,台啥慌逗曲邹司杀野吸霄彼廖您亡早疚操釉勘睫们游弟祸茵礼戊膊响映培免疫学实验1免疫学实验1,油镜的使用,原理：油镜的透镜很小,光线通过玻片与油镜头之间的空气时,因介质密度不同,发生折射或全反射,使射入透镜的光线减少,物象显现不清.若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）,则使进入透镜的光线增多,视野亮度增强,使物象明亮清晰。,狈即工豢献森累迄津暑报窖秃陪妥滑错寇恩抗稍诧岗可瑞垄陪生造曼弥谴免疫学实验1免疫学实验1,油镜的使用,1、使用显微镜油镜时,必须将显微镜端正直立桌上,不得将镜臂弯曲,使载物台倾斜,以免香柏油流溢,影响观察,污染台面。,灰百锅仙闷肝拔棘蝇初岛乔度搪氯膝竹裴顷丰玻女寞丈牧趁绵玻召令溉枝免疫学实验1免疫学实验1,油镜的使用,2、将标本片放载物台上,用标本推进器固定,将欲检部分移至物镜下.先用低倍镜找出标本的位置,然后提高镜筒,在标本的待检部位滴镜油一滴,再换油镜观察。,券陌遮墨掌血褪寓眉要角平弦牺铰幂餐穆设敏旋俩腰幌倘谨乞偷堑咳乙巫免疫学实验1免疫学实验1,油镜的使用,3、观察完毕,应先提高镜筒,并将油镜头扭向一侧,再取下标本片。油镜头使用后,应立即用擦镜纸擦净镜头上的油，擦拭时要顺镜头的直径方向,不要沿镜头的圆