（生药学专业论文）kjy02yc12原料药质量控制及药物代谢动力学研究.pdf

f 。 r 矿 。，r 一， t 。! 。 ! ff + ， 0 ； ： 餐 p 1 。摧- 协 蠹1 kd ， 憾 ， ，。暮垂伊移彝遵0 ， ，、 0 咚啼。_、建 ，誓矿 口xo， ， ， 洚 学位论文版权使用授权书 i i iii ii iii l l li ll l li ii j y 18 9 4 9 0 9 江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊( 光盘版) 电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致， 允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入中国 学位论文全文数据库并向社会提供查询，授权中国学术期刊( 光盘版) 电子杂 志社将本论文编入中国优秀博硕士学位论文全文数据库并向社会提供查询。 论文的公布( 包括刊登) 授权江苏大学研究生处办理。 本学位论文属于不保密函。 学位论文作者签名： 2 。l 年月件日 指导教师签名： 2 0 f f 年汽 鸳竹 一汐m 分类号塾旦圣2 l r l ) c 5 丝 密级公珏 编号 ! 丝窆窆墨q 墨羔5 q 3 量 江- 藩大擎 硕士学位论文 k j y - 0 2 ( y c - 12 ) 原料药质量控制及药物代谢动力学研究 q iy ai ，i t yc o n t r o la n dp h a r m a c o k i n e t i c s r e s e a r c ho f k j y 一0 2 “c 一1 2 ) 指导教师 韭塑睡( 教授) 作者姓名戴退 申请学位级别 砸士学科( 专业)生荭堂 论文答辩日期垫兰! 笙鱼目兰q 日 学位授予单位和日期江菱太堂2 q 兰!生鱼且 江苏大学硕士学位论文 摘要 一研发背景 上世纪9 0 年代始，法玛西亚( p h a r m a c i a ) 公司研制利萘唑烷( l i n e z o l i d ， 商品名z y v o x ) 并于2 0 0 0 年获得f d a 批准上市，成为第一个上市的嗯唑烷酮类 抗菌药。其作用机制独特，主要抑制革兰氏阳性菌蛋白合成的初始阶段，具有不 良反应少，使用安全方便等特点。临床上主要用于治疗革兰氏阳性菌引起的感染， 也可与艾培唑烷、庆大霉素等联合用药。鉴于此，南京长澳医药科技有限公司研 发了具有自主知识产权的新型噫唑烷酮抗菌药- - y c 一1 2 。 二原料药质量控制研究 建立y c - 1 2 的h p l c 、g c 检测方法。h p l c 法：采用d i a m o n s i lc 1 8 柱 ( 2 5 0 m m x 4 6 m m ，5um ) ，磷酸盐缓冲溶液( 1 0 0 0 m l 水+ 2 9 磷酸二氢钾+ 3 5 m l 三乙胺+ 3 m l 磷酸) 一乙腈一甲醇( 4 2 ：3 0 ：2 8 ) 为流动相；流速为l m l m i n ： 检测波长2 5 4 n m ，柱温为2 5 。c 。结果：主峰能与相邻杂质峰达基线分离，y c 1 2 的浓度在1 0 2 0 0ug m l 范围内线性关系良好，相关系数为0 9 9 9 4 ，最低检测限 为0 5 n g 。结论：该法简便、准确，灵敏度高，专属性强，可以用于y c 一1 2 的含 量及有关物质的测定。 g c 有机溶剂检查：采用安捷伦d b 一6 2 4 毛细管柱( 2 5 m x 0 3 2 n n x 0 5 2um ) ， 柱温4 0 ，氢火焰离子化检测器( f i d ) ，检测器温度2 5 0 ，气化室温度2 0 0 ， 载气为高纯氮，柱前压9 2 5 k p a ，分流比3 0 ，程序升温方法：4 0 。c 维持5 m i n ，i o * c m i n 升至8 0 ，再以3 0 m i n 升至1 5 0 。c 维持l o m i n 。结论：该法简便、准确， 灵敏度高，专属性强。 三药物代谢动力学研究 建立测定大鼠血浆中嗯唑烷酮y c 一1 2 浓度的l c m s 方法。方法：取大鼠血 浆3 0 0 ul ，加2 5 氨水2 0 u l 碱化后，加入内标硝西泮1 0 ul ，以l i i l l 乙酸乙酯萃取 后取上清液挥干，用甲醇1m l 溶解，取2ul 进行l c m s 测定。色谱条件：色谱 柱为a g i l e n tz o r b a xe c l i p s ep l u sc 1 8 ( 1 5 0 m m x2 1 m m ，5um ) ，流动相：甲醇 一l o m m o l l 乙酸铵水溶液( 乙酸调p h 6 0 ) ( 7 8 ：2 2 ) ：流速：0 2m l m i n ； 质谱条件：电喷雾离子化( e s i ) 方式，以选择性正离子方式检测，y c - 1 2 和内标硝 新型嗯唑烷酮类药物k j y - 0 2 ( y c - 1 2 ) 的质量控制及药物代谢动力学研究 西泮的选择检测离子质荷比分别为m z 4 9 2 1 ( m + h + ) 和m z2 8 2 1 ( m + h + ) 。结果：y c 一1 2 的线性范围为0 0 0 5 - 2 5ug m l ，最低定量限( l o q ) 为 0 0 0 5ug m l 一1o 准确度、精密度以及稳定性均符合有关要求。结论：本方法专 属性强，灵敏度高，线性关系良好，操作简便，适用于药代动力学研究。 关键词：噫唑烷酮，y c - 1 2 ，h p l c ，g c ，l c m s 法，血药浓度，药物代谢动力 学 江苏大学硕士学位论文 a b s t r a c t f i r s tr e s e a r c hb a c k g r o u n d i n1 9 9 0 s ，l i n e z o l i dw a sd i s c o v e r e db yt h ec o r p o r a t i o no fp h a r m a c i aa n dg a v et h e a p p r o v a lb yf d a t og oo nt h em a e k e t a so x a z o l i d o n ea n t i b a c t e r i a l ，i tw a st h ef i r s t o n eo nt h em a r k e t a sb a c t e r i a lp r o t e i ns y n t h e s i si n h i b i t o r ，i tc a ni n h i b i tt h eb e g i n n i n g o fb a c t e r i a lp r o t e i ns y n t h e s i s ，w i li t ss p e c i a lm e c h a n i s m ，b a c t e r i a lc a l lh a r d l yh a v e d r u gr e s i s t a n c e t h i sc o m p o u n dh a sl i t t l eu n t o w a r dr e a c t i o n ，a n dm u c hm o r es a l t y i t s a n t i b i o g r a mi sm a i n l yg r a m p o s i t i v eb a c t e r i aa n dc l i n i c a l l yu s e dt o a n t ii n f e c t i o n c a u s e db yg r a m - p o s i t i v eb a c t e r i a i ta l s oc a nb eu s e dw i t he p s t e i n y l a l k y la n d g e n t a m y c i n t oe x t e n di t s a n t i b i o g r a m b e c a u s eo ft h i s ，n a n j i n gc h a n ga o p h a r m a c e u t i c a lc o l i m i t e dd i s c o v e r e dt h en e wo x a z o l i d i n o n ed e r i v a t i v e sy c 1 2a n d h a v ea p p l i e dt h ed o m e s t i ca n di n t e r n a t i o n a lp a t e n t ，n u m b e ro ft h ep a t e n tw e r e 0 2 1 5 7 7 3 5 8a n dp c t c n 0 2 0 0 9 2 8 t h i si san e wc o m p o u n d ，t h i sc o m p o u n dh a v e e p o c h m a k i n gs i g n i f i c a n c ei nc h i n a sd r u g r e s e a r c ha n dd e v e l o p m e n t s e c o n dp h a r m a c e u t i c a lp r o d u c tq u a l i t ycontrollitr o d u c tq u a l i t yc o n t r o li t od e v e l o pa nh p l cm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no fn e wo x a z o l i d i n o n ed e r i v a t i v e s y c - 1 2a n di t sr e l a t e ds u b s t a n c e sa n dg cm e t h o df o ro r g a n i cs o l v e n td e t e r m i n a t i o n a n dt 0e s t a b l i s hi t sq u a l i t ys t a n d a r d m e t h o d s ：t h ec h r o m a t o g r a p h i cs e p a r a t i o no f y c 一1 2w a sp e r f o r m e do nad i a m o n s i lc 1 8c o l u m nw i t ham o b i l ep h a s ec o n s i s t i n go f p h o s p h a t e b u f f e r e d s o l u t i o n ( 1 0 0 0 m li - 1 2 0 丽t h2 0 9 p o t a s s i u m d i h y d r o g e n p h o s p h a t e ，3 5 m lt r i e t h y l a m i n ea n d3 m lp h o s p h o r i c - a c i d ) 一a c e t o n i t r i l e m e t h a n o l ( 4 2 ：3 0 ：2 8 奠h mw i t haf l o wr a t eo f1 o r n l m i n t h ed e t e c t i o nw a sm o n i t o r e da t2 5 4 n l n ，a n dt h ec o l u m nt e m p e r a t u r ew a sm a i n t a i n e da t2 5 r e s u l t s ：y c 一1 2w a s c o m p l e t e l ys e p a r a t e df r o mi t sr e l a t e ds u b s t a n c e s t h ec a l i b r a t i o nc u r v eo f y c 一1 2w a s l i n e a ri nt h er a n g eo f1 0 - 2 0 0g g m lw i t ht h ec o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n to f0 9 9 9 4 t h e l i m i to fd e t e c t i o nw a s0 5 n g c o n c l u s i o n s ：t h em e t h o di ss i m p l e ，r a p i d ，s e n s i t i v ea n d s p e c i f i c ，a n dc a nb eu s e df o rd e t e r m i n a t i o no fy c 一1 2a n di t sr e l a t e ds u b s t a n c e s 新型嗯唑烷酮类药物k j y - 0 2 ( y c - 1 2 ) 的质量控制及药物代谢动力学研究 g cm e t h o df o rt h e o r g a n i cs o l v e n td e t e r m i n a t i o n ：t h eo r g a n i cs o l v e n tw a s s e p a r a t e db ya n g e l i n td b - 6 2 4 ( 2 5 m x 0 3 2 m m x o 5 2 1 m a ) ，c o l u m nt e m p e r a t u r ew a s 4 0 c ，t h ed e t e c t e rw a sf i dw i t hi t st e m p l e2 5 0 c ，v a p o r i z e rt e m p e rw a s2 0 0 。c u s i n g h i g hp u r en i t r o g e na sc a r d e rg a s p r e c o l u m np r e s sw a s9 2 5 k p a ，s p l i tr a t i ow a s 3 0 t e m p e r a t u r ep r o g r a m m i n g ：h o l d i n g4 0 c5 m i n u t e sa n du s i n g1 0 c m i nt o8 0 。c ，a n d w i t h3 0 。c m i nh e a tt o1 5 0 。ca n dh o l d i n g1 0 m i n u t e s c o n c l u s i o n s ：t h em e t h o di s s i m p l e ，r a p i d ，s e n s i t i v ea n ds p e c i f i c t h i r dp h a r m a c o k i n e t i c sr e s e a r c h t od e v e l o pa nl c - m sm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fn e wo x a z o l i d i n o n e d e r i v a t i v e sy c - 1 2i nr a tp l a s m a m e t h o d s ：t h ei n t e r n a ls t a n d a r d ( n i t r a z e p a m ) 1 0 此 w a sa d d e dt o3 0 0 1 x lr a tp l a s m a ，a l k a l i f i e db ya d d i n g2 0 止2 5 a m m o n i as o l u t i o n ， t h e ne x t r a c t e dw i t hl m la c e t i d i n a f t e rt r a n s f e r r e da n de v a p o r a t e d ，t h er e s i d u ew a s d i s s o l v e d 砸ml m lm e t h a n o la n dd e t e r m i n e db yi n j e c t i n g2 儿t ol c m ss y s t e m t h ea n a l y t e sw a ss e p a r a t e do naa g i l e n ta n a l y t i c a lc 1 8c o l u m n ( a g i l e n tz o r b a x e c l i p s ep l u sc 1 8 ( 1 5 0 m m x 2 1 m m ，5 岬”w i t hm e t h a n o l 一1 0 m m o l la m m o n i u m a c e t a t es o l u t i o n ( a c e t i ca c i da d j u s t e dp h 6 0 ) ( 7 8 ：2 2 ) a st h em o b i l ep h a s e a n a l y s i s w a sp e r f o r m e da taf l o wr a t eo f0 2 m l r n i n 1 m sd e t e r m i n a t i o nw a si ne l e c t r os p r a y i o n i z a t i o n ( e s i ) p o s i t i v em o d ea n di nt h es e l e c t e di o nm o n i t o r i n g m o d e ( s i m ) y c - 1 2 w a sm o n i t o r e da tm z 4 9 2 1 ( 【m + h 】+ ) a n di n t e r n a ls t a n d a r da tm z2 8 2 1 ( 【m + h4 - ) r e s u l t s ：t h ea s s a yh a dac a l i b r a t i o nr a n g ef r o m0 0 0 5t o2 5 t x g w n l d a n dt h e l o w e s tl i m i to fq u a n t i f i c a t i o n ( l o q ) o f0 0 0 5 岭i n l f o ry c - 1 2 t h ea c c u r a c y , p r e c i s i o n ( i n t r a d a ya n di n t e r d a y ) ，s e n s i t i v i 哆，s p e c i f i c i t ya n ds t a b i l i t y ( i n a m b i e n tt e m p e r a t u r e ，f r e e z e | t h a w ，f r e e z es t o r a g e ) o ft h em e t h o df u l f i l l e dt h e g u i d e l i n eo ft h ea n a l y t i c a lv a l i d a t i o nc r i t e f i a c o n c l u s i o n ：t h i sm e t h o di sp r o v e dt ob e c o n v e n i e n t ，s e n s i t i v ea n ds u i t a b l ef o rp h a r m a c o k i n e t i cs t u d yo fy c - 1 2i nr a t s k e y w o r d s ：o x a z o l i d i n o n ed e r i v a t i v e s ，y c 一1 2 ，h p l c ，g c ，l c m s ，d r u gp l a s m a c o n c e n t r a t i o n ，p h a r m a c o k i n e t i c s i v 江苏大学硕士学位论文 第一章绪论 目录 l 1 1 研发新抗菌药物的意义及途径2 1 2 嗯唑烷酮类研究进展。3 1 2 1 嗯唑烷酮抗菌机制。4 1 2 2 噫唑烷酮结构特点5 1 2 3 利奈唑烷药物特点。8 1 2 4y c 1 2 的药物特点8 第二章y c 1 2 原料药质量控制研究 1 0 2 1 仪器与试剂1 0 2 1 1 仪器1 0 2 1 2 药品和试剂1 1 2 2h p l c 法测定含量及有关物质方法学研究1 1 2 2 1 色谱条件与系统适用性1 1 2 2 2 溶液的配制。1 1 2 2 3 专属性试验。1 1 2 2 4 线性关系1 5 2 2 5 检测限1 6 2 2 6 进样精密度实验1 6 2 2 7 稳定性试验。1 6 2 2 8 精密度试验1 6 2 2 9 回收率实验1 6 2 2 1 0 样品含量测定1 6 2 2 1 1 有关物质测定1 7 2 2 1 2 耐用性试验1 8 2 2 1 3 h p l c 法与非水滴定法比较1 8 2 3 有机溶剂残留1 9 2 3 1g c 法条件及系统适用性。1 9 2 3 2 线性2 0 v 新型嗯唑烷酮类药物k j y - 0 2 ( y c - 1 2 ) 的质量控制及药物代谢动力学研究 2 3 3 进样精密度2 2 2 3 4 回收率实验2 2 2 3 5 最低检测限2 3 2 3 6 样品测定2 4 2 4 含量测定2 4 2 4 4 非水滴定法2 4 2 5 紫外分光光度法。2 6 2 5 1紫外吸收光谱及e ：兰的测定2 6 2 5 2 样品吸收系数测定。2 8 2 5 3 分析方法验证2 8 2 5 4 含量测定3 0 2 6 鉴别3 1 2 6 1 化学反应一一氟化物鉴别3 1 2 6 2 含氟量检查。3 l 2 6 3 紫外吸收光谱法( u v ) 3 2 2 7 样品性状3 2 2 7 1 外观性状。3 2 2 7 2 溶解度3 2 2 7 3 熔点3 4 2 8 检查3 4 2 8 1 干燥失重一3 4 2 8 2 炽灼残渣3 5 2 8 3 重金属3 5 2 8 4 砷盐3 6 2 8 5 异构体检查3 6 2 9 d 、l 3 7 第三章血浆中y c 1 2 的h p l c m s 测定方法研究。3 9 3 1 试剂与仪器3 9 3 1 1 式剂3 9 3 1 2 仪器3 9 3 2 实验动物3 9 江苏大学硕士学位论文 3 3 实验条件3 9 3 3 1 色谱条件3 9 3 3 2 空白血浆处理4 0 3 3 3 质谱工作参数4 0 3 3 4 扫描选择。4 0 3 3 5 液质联用质谱检测条件4 1 3 4 实验方法。4 2 3 4 1 大鼠血浆样品的处理一4 2 3 4 2 方法专属性4 2 3 4 3 标准曲线的绘制及最低定量限。4 3 3 4 4 精密度4 3 3 4 5 提取回收率4 4 3 4 6 稳定性试验4 5 3 4 7 未知样品测定与质量控制4 6 3 5 本章小结4 7 第四章y c 1 2 药物代谢动力学研究一4 8 4 1 试剂与仪器4 8 4 1 1 试剂4 8 4 1 2 仪器4 8 4 2 实验动物4 8 4 3 实验条件。4 8 4 3 1 色谱条件4 8 4 3 2 质谱检测条件4 8 4 4 实验方法4 9 4 4 1 灌胃给药4 9 4 4 2 静脉注射给药4 9 4 4 3y c - 1 2 在大鼠体内的吸收动力学研究5 0 4 4 4 房室模型分析5 9 4 4 5 非房室模型分析6 4 4 5 讨论。6 4 4 5 1 分析方法的优化6 4 v 新型噫唑烷酮类药物k j y - 0 2 ( y c - 1 2 ) 的质量控制及药物代谢动力学研究 第五章 5 1 5 2 5 3 5 4 5 5 5 6 第六章 4 5 2y c 1 2 体内药代动力学6 6 参考文献 致谢 y c - 1 2 药物代谢物初步研究6 7 实验动物6 7 给药方式6 7 液质联用检测条件6 7 静脉注射血浆全扫描6 7 结构推断7 1 讨论。7 3 结论与展望 攻读硕士学位期间发表的论文 7 4 7 5 7 8 7 9 江苏大学硕士学位论文 第一章绪论 2 0 世纪抗菌药物发展迅速，成绩辉煌。1 9 3 5 年引入磺胺，4 0 年代初开始用 青霉素，随后又有氨基糖苷，四环素，大环内酯等一大批重要抗生素及头孢菌素， 喹诺酮类等合成抗菌药问世，使有效治疗各种细菌感染成为可能，为保障人类健 康，延长寿命作出了卓越的贡献，并对生物学、化学等基础科学进展起到了重要 的反馈影响【1 1 。 然而抗菌药物的广泛应用特别是无指征的滥用导致了严重的多药耐药菌【2 】， 尤其是革兰氏阳性菌的耐药性更为严重，对人类的身体健康乃至生命构成严重的 威胁。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( m r s a ) ，耐青霉素肺炎链球菌( p r s p ) ，耐万 古霉素微肠球菌( v r e ) 的出现，给临床治疗造成了很大的困难，现有药物很难 有效的控制此类耐药菌感染。1 9 9 2 年美国疾病控制中心( c d c ) 的资料表明有 1 3 3 8 0 例住院患者因为对所使用的抗菌药物耐药，细菌感染得不到控制感染而死 亡【引。世界卫生组织( w h o ) 估计，全世界每天约有5 万人死于感染性疾病，感 染性疾病重新成为威胁人类健康与社会发展的主要问题。耐药菌的不断出现可能 削弱甚至抵消人类半个世纪以来为有效治疗感染所做的努力和取得的进步【4 】。 我国是世界上滥用抗生素最为严重的国家之一，由此而造成的细菌耐药的问题也 尤为突出。临床分离的一些细菌对某些药物的耐药性已居世界首位。中国海口地 区2 0 0 0 年临床分离菌耐药性监测发现了耐万古霉素的表皮葡萄球菌和粪肠球菌 【5 】；同年，上海地区监测发现粪肠球菌中耐万古霉素株占6 9 ，屎肠球菌占3 3 ， 肺炎球菌儿童分离株中耐青霉素株占3 0 9 ，而m r s a 则要占6 3 6 1 ；1 9 9 7 2 0 0 0 年北京地区监测发现类肠球菌对万古霉素耐药率为2 o ，屎肠球菌为1 5 7 1 。 由此可见，中国及世界其它地区的细菌耐药性问题非常严重，见表1 1 。 新型嗯唑烷酮类药物k j y - 0 2 ( y c - 1 2 ) 的质量控制及药物代谢动力学研究 表1 1 世界范围内病原菌的耐药情况【8 l t a b l e1 1a n t i b i o t i cr e s i s t a n c eo fs u p e r b u g s 鲫o u n dt l l ew o r l d 1 1研发新抗菌药物的意义及途径 2 目前应对细菌耐药性的主要手段还是研发新结构新机理的抗生素【9 】，传统开 江苏大学硕士学位论文 发抗生素主要是从天然产物中寻找见表1 2 ，比如青霉素。另外还有化学合成法 和结构修饰等方法对已有的抗生素结构改造使其具有更强的抗菌效果或新的作 机制来改变抗菌途径，由此来应对细菌的耐药性。但随着天然产物数量有限及不 断下降，结构修饰及化学合成速度远赶不上细菌变异的速度，因此人们也在试图 通过基因工程等方法来开发新的抗生素，不少实验室通过基因工程及发酵工程技 术将复合d n a 片段接入细菌体内通过其转录翻译产生新的化合物，也有通过杀菌 酶或者研究噬菌体来研发新的抗菌药物。但缺点是研发周期长，投入经费多以及 成功率低等。 表1 2 天然产物抗生素研发状州1 0 l t a b l 2s e l e c t e dn a t u r a lp r o d u c t - d e r i v e da n t i b i o t i c sc u r r e n t l yi nc l i n i c a ld e v e l o p m e n t 1 2 暖唑烷酮类研究进展 嗯唑烷酮类是一类新合成抗菌药。1 9 7 8 年，美国杜邦( d u p o n t ) 公司科技人 员首次报道了一系列对真菌和细菌有活性的噫唑烷酮类化合物。各国学者对此类 3 新型嗯唑烷酮类药物k j y - 0 2 ( y c - 1 2 ) 的质量控制及药物代谢动力学研究 化合物研究日益深入。噫唑烷酮类抗菌药物，其适应证包括v r e 感染、院内获得 性肺炎( h a p ) 、社区获得性肺炎( c a p ) 、非复杂性的皮肤及软组织感染( u s s s i ) 、 复杂性的皮肤和软组织感染( 包括未并发骨髓炎的糖尿病足部感染) 。该类结构化 合物作用机制独特，与其他药物无交叉耐药性，在对耐药革兰阳性菌感染的临 床治疗中有明显优势，且在结核杆菌感染的治疗中有较好的应用前景。2 0 0 0 年美 国f d a 批准第一个嗯唑烷酮类抗菌药利奈畔烷( l i n e z o l i d ，商品名z y v o x ) 上市， 临床证明利奈唑烷能很好控制多药耐药菌引起的各种感染，至少和力古霉素同样 有效。目前嗯唑烷酮类抗菌药已成为国际上开发新型抗菌药物的主要领域之一， 世界个大制药公司均投入了巨大的兴趣开展研究，并且取得了很好进展。除普强 公司的利奈唑烷在2 0 0 0 年上市外，h s t r a z e n e c a 公司的a z d 2 5 6 3 处于i i i 期临床，印 度公司的r b x 7 6 4 4 进入临床前研究阶段。该类药物的发展趋势是扩大抗菌谱、提 高抗菌活性。 d n + 夕 图1 1a z d 2 5 6 3 结构 f i 9 1 1s t r u c t u r eo f a z d 2 5 6 3 h a 扑n 少 h 图1 2r b x 7 6 4 4 结构 f i 9 1 2s t r u c t u r eo fr b x 7 6 4 4 1 2 1 噶唑烷酮抗菌机制 细菌( 原核生物) 的核糖体有别于宿主细胞( 真核生物) ，前者为7 0 s 型，由3 0 s 和5 0 s 亚基组成：后者为8 0 s 型，由4 0 s 和6 0 s 亚基组成。因此，选择性抑制细菌的蛋 白质合成过程是理想抗菌药需具备的基本性质之一。细菌蛋白质合成包括起始、 4 江苏大学硕士学位论文 延长及终止阶段，其中，起始阶段需由5 0 s 亚基、3 0 s 亚基、m r n a 及起始型甲酰蛋氨 酸t r n a ( m e t t r n a ) 形成的复合物参与。在复合物中，m e t _ t r n a m e t 占据着5 0 s 亚基的肽酰位( p 位) ，而5 0 s 的氨基酰位( a 位) 暂为空位。许多嗯唑烷酮类抗菌药的 作用位点在细菌核糖体5 0 s 亚基上肽酰转移酶中心( p t c ) 及p 位附近，当药物与5 0 s 亚基结合时，可阻止m e t t r n a 结合n 5 0 s 亚基上，从而抑s w j 5 0 s 亚基3 0 s 亚基 m r n a - m e t - t r n a 复合物的形成，干扰蛋白质合成的起始阶段。虽然嗯唑烷 酮类化合物的作用位点与肽酰转移酶抑制剂( 如林可霉素和氯霉素) 的作用位点 存在部分重叠，但两者作用机制具有明显差别，前者对肽酰转移酶的抑制活性极 其微弱，故不易与其他可抑制蛋白合成的抗菌药发生交叉耐药性【儿l 。 1 2 2 嘿唑烷酮结构特点 噫唑烷酮类抗菌剂的基本结构单元见图1 3 a ，其代表药利奈唑胺( 图1 3 b ) 已于2 0 0 0 年4 月经美国f d a 批准上市，在抗革兰阳性菌及多重耐药菌方面表现出 了很好的活性，但是，对利奈唑胺具有耐药性的菌株已经出现，近年来国内外科 学家对噫唑烷酮抗菌剂进行了大量结构修饰，以期在利奈唑胺基础上开发抗菌 活性更高，抗菌谱更广的新嗯唑烷酮抗菌剂。主要工作包括( 1 ) 吗啉基( 结构单元 a ) 的结构改造【1 2 1 1 3 1 ，代表活性化合物见图1 4 ：( 2 ) 乙酰胺基甲基( 结构单元b ) 的结构改造【1 4 】【1 5 】，代表化合物见图1 5 ：( 3 ) 嗯哗烷酮环( 环1 ) 的替换【1 6 1 ，代表化 合物见图1 6 ：( 4 ) 苯环( 环2 ) 取代基修饰及替换【1 7 1 ，代表化合物见图1 7 ：( 5 ) 嗯唑 烷酮与其他抗菌剂的母环进行拼合【1 8 1 1 1 9 1 。需要指出的是，上述几个方面的研究不 是孤立进行的，往往是对同一个化合物同时进行两个或两个以上方面的修饰。 a o k 3 5 新型嗯唑烷酮类药物k j y - 0 2 ( y c - 1 2 ) 的质量控制及药物代谢动力学研究 6 o f x a o c n yz c r x ，y ，z = h f r = h n a c ，n h c o o e t ，n h c o o m e n 僻c l o p n 趟k 弋o n 矿趟氏 f b o r h n d 图1 4 吗啉基结构改造化合物 f i 9 1 4m o r p h o l i n y lc o m p o u n ds t r u c t u r et r a n s f o r m a t i o n f o l n 1 锚穴s p o l | o a 0 0 n p 掣、卜 u ：= f o 昏砖 f 杏o b c 图1 5 乙酰胺基甲基结构改造化合物 f i 9 1 5a c c t y la m i n om e t h y lc o m p o u n ds t r u c t u r et r a n s f o r m a t i o n 图1 6 三环异噫唑结构式 f i 9 1 6s t r u c t u r eo ft r i c y c l i ca n i s o - o x a z o l i d o n e 丫o h n 丫o h n 。凡弋人、 = 。 江苏大学硕士学位论文 图1 i7 吡啶替换苯环嚼唑烷酮化合物 f i 9 1 7s t m c t w _ eo fp y r i d i n er e p l a c eb e n z e n er i n go x a z o l i d o n e ff o 奄 d 日 矿 o 图1 8 嗯唑烷酮与其他抗菌剂的母环进行拼合 f i 9 1 8s m l c t u r eo fo t h e ra n t i b a c t e r i a lm o t h e rc i i c u sr i n gj o g g e dw i t ho x a z o l i d o n e 目前嗯唑烷酮类抗菌剂的结构修饰研究最多的是吗啉基( 结构单元a ) 的修饰， 其次是乙酰胺基甲基( 结构单元b ) 的修饰，这两个结构单元的修饰主要是利用二 者的生物电子等排体以及其他一些能够改善化合物药代动力学性质的基团对其 进行替换；此外，对噫唑烷酮母核的生物电子等排替换比如以异唑，三氮唑等基 团替换嗯唑烷酮母核，也是一个有潜力的研究方向：将噫唑烷酮与其他经典抗 菌剂的药效团通过各种方式进行拼合，获得具有双重作用机制的抗菌剂，是噫 唑烷酮新药研究的另一个热点领域，目前已开展的此类工作包括嗯唑烷酮与喹 7 州扩o o 弋弋 。b 、n c v o u 几n n l d ez ) a n k y 新型嗯唑烷酮类药物k j y - 0 2 ( y c - 12 ) 的质量控制及药物代谢动力学研究 喏酮类抗菌剂、大环内酯类抗菌剂以及其他天然产物中具有抗菌活性的化合物的 拼合。通过结构修饰后的嗯唑烷酮类化合物，抗菌活性及毒性等均有较大的改善， 甚至有些结构改变抗菌机制，对耐药菌有较强的活性。如图1 8 c 中噫唑烷酮与大 环内脂类抗生素骈接后其具有广谱抗菌活性，并具有抗真菌、病毒和寄生虫的活 性，具有很大研发价值。因此结构修饰是研究的热点【2 0 】。另一方面，噫唑烷酮类 抗菌剂的定量构效关系研究也有开展，对开发活性更高，抗菌谱更广的新型嗯 唑烷酮抗菌剂具有指导意义。现如今已上市的产品中仅利奈唑烷一种通过了f d a 认证。 1 2 3 利奈唑烷药物特点 9 0 年代，法玛亚西( p h a r m a c i a ) 公司发现了利萘唑烷( l i n e z o l i d ，商品名 z y v o x ) ，并于2 0 0 0 年获得f d a 批准上市如图1 3 b ，成