上海理工大学医疗器械与食品学院-OLYMPUS IX71倒置相差荧光显微镜使用说明.doc

OLYMPUS IX71倒置相差荧光显微镜使用说明一、明场方式的使用说明1) 打开明场卤素灯控制器（TH4）电源，“I”为打开，“o”为关闭。 TH4电源开关 TH4光强调节旋钮2) 调节TH4上的光强调节旋钮，获得合适的光强度。4) 选择合适的物镜并将聚光镜上的调节环至BF或空档位置。5) 调节调焦旋钮，获得清楚的明场图像。6）进行拍照时，要将光路切换到目镜和软件里都可看的位置。光路切换旋钮当前位置为完全目镜位置，光100%到目镜，软件下看不到；若将旋钮逆时针旋转至最下方时，此时目镜下和软件里都可以看到，拍照时要将光路切换到此位置。二、相差方式的使用说明1) 选择合适的物镜和聚光镜中的相差环。聚光镜（5孔位）1号孔位相差环 PHL2号孔位相差环 PH13号孔位相差环 PH2在聚光镜右侧旋转调节相差环，白点处的显示数字即代表相对应的相差环已放入光路 4X物镜用PHL10X、20X物镜用PH140X物镜用PH22) 调节调焦旋钮，获得清楚的相差图像。3) 20X、40X的物镜上有矫正环，根据不同的培养容器需要调节矫正环，在聚焦到相对最清楚后调节矫正环至图像最清晰。*观察相差时，要使用与相差物镜放大倍数相匹配的相差环板。三、荧光方式的使用说明1) 打开汞灯光源控制器U-RFL-T的电源（开关在控制器前面板右下方）“I”为打开，“o”为关闭；2s后“BURNER ON”指示灯点亮为绿色，荧光光源完全打开。汞灯光源控制器电源开关“BURNER ON”指示灯显示汞灯灯泡已用小时数 注意：汞灯光源不要频繁开关，打开后至少使用半小时以上，关闭后至少等待半小时再打开。2）调节荧光滤色块转盘到合适的位置进行荧光观察。观察之前确保荧光滤色块转盘上的光闸shutter处于打开位置（“o”为打开，反之为关闭）。I、调节荧光滤色镜转盘时，需要确认荧光滤色镜和标本所需的激发波长一致UW蓝色荧光（DAPI、Hochest等）BWA绿色荧光（AlexFluo 488、GFP等）GW红色荧光（TRITC、DsRed等）、为了防止标本的淬灭，观察或成像后请及时关闭荧光滤色镜转盘上的荧光光闸（SHUTTER）。6孔位荧光滤色块转盘光闸shutter4、 DP2-BSW软件使用1）单张实时图像预览及图像采集左侧为软件预览及采集界面，在该界面下可以调节单张采集时的各种参数：实时预览图像采集Movie 模式采集曝光选项，分为手动曝光/自动曝光和超级荧光模式曝光区域选择，有0.1%/1%/30%和Full Image 四种灵敏度选择，一般选择ISO200曝光补偿,一般选择“0”预览分辨率选择，最高可选1360X1024采集分辨率选择，分辨率越高，图像越清晰，相应拍摄时间也略有会增加图像对比度调节2） 图像添加标尺及标尺保存I、拍照前在软件中选择正确的物镜倍率。 、在View菜单下选择Scale Bar 选项，标尺即会在图片上显示出来。 、拍照以后如果想将标尺保存在图片中，则在Image 菜单下选择Burn In Info 选项，然后保存图片。3） 白平衡和黑平衡、在预览界面下可使用黑白平衡功能，根据标本类型不同，黑白平衡功能之一分别可用（明场观察时白平衡可用，荧光观察时黑平衡功能可用）。黑平衡 、点击黑（白）平衡按钮，然后在预览图片上选取合适的背景地方划一块区域，软件会自动完成黑（白）平衡。、执行完黑（白）平衡以后，若要恢复图像原来的色调，可通过点击“acquisition setting”找到”Camera”然后将