（果树学专业论文）草莓采后预处理保鲜机理的研究.pdf

摘要 革莓果实属浆果，采后极易腐烂，严重影响其营养与商品价值，限制了果实的 运销。因此如何提高革莓果实采后贮藏保鲜效果成为草莓生产中急待解决的问题。 本试验以“丰香”草莓品种为材料，从果实贮藏期间的腐烂率入手，研究了不 同贮前预处理对果实采后贮藏保鲜效果的影响，并对果实的品质指标、呼吸速率、纤 维素酶、s o d 、内源激素等生理生化特性和蛋白质组分及含量的变化规律进行了研究。 主要研究结果如下： 1 研究了贮前不同预处理对采后果实贮藏效果的影响，结果表明，与其它预热 处理相比，无论是在冷藏( 5 ) 还是室温贮藏( 1 9 一2 1 ) ，均以贮前5 0 预热 处理3 0 m i n 的果实腐烂率最低，保鲜效果最好；室温贮藏条件下，与其它预冷处理相 比，以5 预冷处理3 0 m i n 的果实腐烂率最低，保鲜效果最好。5 0 预热处理3 0 m i n 的效果优于5 预冷处理3 0 m i n 。 2 预冷处理和预热处理均能明显抑制果实v c 、可溶性糖和可滴定酸含量的下降。 3 随着果实成熟和衰老，果实纤维素酶活性不断上升，果实硬度不断下降，果 实硬度与纤维素酶呈极显著负相关。预冷处理和预热处理均能抑制果实硬度的下降和 纤维素酶活性的增加，从而减缓了果实软化进程。 4 贮藏前期，果实的s o d 活性、m d a 含量不断上升，预热处理能明显提高果实 的s 0 d 活性；贮藏后期，果实s o d 活性不断下降、m d a 含量持续上升，预处理能显著 抑制果实s o d 活性的下降和m d a 含量的增加。用愈创木酚显色法、联苯胺比色法、凝 胶电泳均未测出p o d 酶活性。采用滴定法、紫外吸收法和凝胶电泳均未测出c a t 酶活 性活性。 5 贮藏期间，果实的呼吸速率不断加强，且贮藏后期急剧上升，不同预处理可 减缓呼吸速率的上升幅度。 6 贮藏期间，a b a 含量不断增加，z r 、i 从和g a 含量不断下降，a b a 与z r 、i 从、 g a 间均呈显著负相关。不同预处理均能显著抑制a 队含量的增加和z r 、i 从及g a 含 量的下降。 7 果实贮藏期间总蛋白质含量变化呈先升后降趋势。预处理果实蛋白质含量均 低于对照组。利用s d s p a g e 对分子量 9 0 k d 的蛋白质组分进行分析，结果表明，贮 藏期的前3 6 h ，果实的蛋白质含量及组分( 5 8 5 k d 、3 7 4 k d 、2 1 6 k d 和1 7 1 k d 左右) 增加显著；贮藏4 8 h 以后，蛋白质大量降解，预处理特别是预热处理可能抑制了与果 实成熟、衰老相关的蛋白的表达。 关键词：草莓，预处理，贮藏，品质，生理生化 蒜螂霄、譬f 掰请惠 匀垒文公，督 a b s t r a c t a sa 泖i c a lb e i 吼s t r a w b e n y ( 厅q 弘，缸v p s l ，) 丘u i ti se a s i l ys u 丘鼬df m i nd e c a y a f t e rh a r v e s t ，州c hr e d u c e si t sn u t e ma i l dc o m m e r c i a lv a l u e s t h ee 丘奄c t so f p r e t e m p e r a t u r e 仃e a t m e n t so nt h es t o r a g eo fs t r a w b e r 叮f m i t sw e r ei 1 1 v e s t i g 锄e di i lt e 肋so f 如i t sd e c a yr a 把，s e k c t i n g f e n gx i a l l g a sr e s e a r c hm a t e r i a l t h eq l l a l 蚵p r o p e n i e sa n d p h y s i o l o g ya n db i o c h e m i s t r yi n d e xs u c h 懿r e s p i m t o r yr a t e ，e n z y r n a t i ca c t i v i t i e s ， e n d o g e n o u sh o m o n e sa n d 也ec h a i l g e so f p r o t e i l li ns n 耐b e 玎yf m i t s 、i n lp r e - t e m p e r a l ：u r e t r e a t m e m sw e r ea l s os t l l d i e di nt h i sp a pe r 1 t h ed f r e c t s0 fp r e t e m p e m t l l r et r e a t m e n t so nm ef k s hp r e s e r v a t i o no fs 圩a w b e r r y f m i t sw e r es t u d i e d t h er e s u l t ss h o w e d 也a t 也ed e c a yr a t eo f 丹l l i t 谢t 1 1p r e h e a tt r e 咖e n t u n d e r5 0 f o r3 0 m i n w a s 也e i o w e s t w h e t l l e rs t 丽e da t5 o ra t r 0 0 m t e m p e m t i l r e t h e d e c a yr a t eo ff m i tw i t hp r e - c o o l 仃ea _ t n l e n tu n d e r5 f o r3 0i n i nw a sl o w e rt l l a i l 血e c o m r o lf u i ts t o r i e da tr o o mt e m p e r a t u r e t h ep r e h e a t 臼e a n e n tl l 王dab e n e r 缸s h p r e s e r v a t i o ne f r e c tt h a nt 1 1 ep r e - c o o l 订e a t i 】1 e n t 2 1 h ef m i tq u a l 时c o u l db ei m p r o v e db e c a u s eb o t l lp r e - h e a ta n dp r c c o o l e m s c o u l do b v i o u s l yi n h i b i tm ed e c r e a s eo fv cc o n t e n t ，s o l u m es l 坞a ra n dt i 乜如l ea c i d i t y c o n t e n t sd u r i n gt 1 1 ef 硒ts t o r a g ea tr o o mt e m p e r a t u r e t h er e s u h so fv a r i a n c ea n a l y s i s s h o w e dt h a tt h e r ew a sas i g l l i f i c a n td i 打b r c n c eb c t 、v c e nf m i tq u a l i t i e s 、i 也p r e _ t e m p e m t u r e t r e a t m e ma n d 1 0 s eo fc o n t r o l ，a n ds ow 踮j h er a t i oo fs u g 盯t oa c i db e m e e nf m i t sw i t h p r e 。t e m p e r a t i l r et r e a 恤e n ta i l dt h o s eo fc o n t r 0 1 3 c e l l u l a s ea c t i v i t yi n c r e a s e da i l dm eh i tf i m n c s sd e c r e 嬲e dg r a d u a l l yw i 也t h e m a t u r i t yo fs t r a w b e h yf m i t t h er e s u l t si n d i c 砒e dm a tas i g n i f i c 觚t l yn e g a t i v ec o 玎e l a t i o n e x i s t e d b e t w e e nc e l l u l a s ea c t i v 埘a n dt 1 1 e 触i tf i m m e s s 1 1 1 ed i 胝mp f e t e i n p 锄t u r e t r e a t m e n t sc o u l d 懈n a r k a b l yi n h i b i tt h ed e c r e a s eo f 矗1 l i t6 啪n e s sa n dt h ei n c r e 舔eo f c e l l u l a s ea c t i v i t yd u r i n gt h ef m i ts t o r a g ea tr o o mt e m p e r a t u r e ，w h i c hc o t l l ds l o wu pt 1 1 e s o n n e s so f s t r a w b e r 叮f m i t 4 s o da c t i v i t ya 1 1 dm d ac o n t e mmf u “si n c r e a s e dg m d u a l l ya tm ee a r l ys t a g eo f f m i ts t o r a g e t h ep r e _ h e a tt r e a t m e mc o u l do b v i o u s l yi n c r e a s es o d a c t i v i 够i n 行u i t s s o d a c t i v i t yd e c r e a s e da n dm d ac o n t e n ti n c r e a s e dg r a d u a l l ya tm el a t e rs t a g eo ff m i ts t o r a g e ， b u tt 1 1 ep r e - t e i r l p e r a t i l r et r e a t m e n t ，e s p e c i a l l yt h ep r e h e a t 仃e 锄e n tc o u l do b v i o u s l yi n h i b i t t h ed e c r e a s eo fs o d a c t i v i t ya 1 1 dt 1 1 ei n c r e a s eo fm d ac o m e m si nf u i t s p o da n dc a t a c t i v i t yc o u l dn o tb em e n s u r a t e db yt i t r a t i o nm e a n s ， u va b s o r b d o nm e 趾sa i l d e l e c t r o d h o r e s i s 5 t h er e s p i r a 士o r yr a t eo ff h 】i ti r l c r e 髂e d 目a d u a l l ya tt h ee a d ys t a g eo fs t o r 鼋g ea n d s p e e d e du ps u d d e n l ya tt h el a t e rs t a g eo fs t o r a g e t h ep r e - 打e 咖e n t sb e f o r ef h i ts t o r a g e c o u l ds l o wu pt l l er i s i n g 打e n do f r c s p i r a t o r yr a t ei nf u i t s 6 t h ec h a i l g e so fe n d o g e n o u sh o n l l o n ec o n t e n ti n 州t sw i t hd i 肫r e 】1 tp r e 仃ea _ t n l e n t s w e r es t u d i e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a ta b ac o n t e n ta c c u m u l a t e d 锄dc o n t e n t so fz r 。i a a a 1 1 dg ad e s c e n d e dd l l r i n gf h i ts t o m g e b o t hp r e t r e a t e da 1 1 dp r e c o o lt r e 砒m e n t sc o u l d o b 访o u s l yi r l h i b i tt h ei n c r e a s eo f a b ac o n t e n ta i l dm ed e s c e n d i l l gt r e n d so f c o n t e n t so f z r i a aa n dg a i na d d i t i o n ，m e r ew a san o t a b l yn e g a t i v ec o 删a t i o nb e “煳1a b aa 1 1 dz r ， i a a g a 7 t h ec o n t e mo ft o t a ls 0 1 u b l ep r o t e i n 血劬i t si n c r e a s e d 砒e a r l ys t a g e 锄dm e n d e s c e n d e dd 嘶n gt h ef h j i ts t o r a g e 1 1 1 ec o n t e m so ft o t a ls o l u b l ep r i ) t e i ni n 姗t sw i t h p r e t 9 m p e r a t u r et r e a t m c n t sw e r el e s st h a nt h o s e 访c o m r o li nt h el a t e rs t a g eo f 删ts t o m g e t h ec o n t e m so ft o t a ls o l u b l ep r o t e i l li n r u i tw i t hp r e t e m p e r 船订e a t m e m sd e c r e a s e d s l o w e rt l l a l lt h o s ei nc o n 舡0 1 t h ep r o t e i nc o n l p o n e n t s 谢t hm o l e c u l a rb e l o w9 0k dw e r e a n a l y z e d b ys d s - p a g e t h er e s u l t ss h o w e dt h a tm ec o m e n t 觚dt l l ec o i n p o s 试o no f p r o t e i ni nf m i t si n c r e a s e ds i g m f i c a n t l ya t 廿l ee a r l ys 乜g eo ff - m i ts t o r a g e ，b u td e c o m p o s e d a tt h el a 把rs t a g eo f 洲ts 魄e t h ep r e t e m p e f a t u r e 毛陀a t m e n t s ，e s p e c i a l l yp r e _ h e a t t r e a 扛n e n tc o u l di n l l i b i tt h ee x p r e s s i o no fe n z y m e sc o n c e n l e dw i t h 也er i p e n i n ga n d s e n e s c e n c eo f f u i t s ( 5 8 5 k d 。3 7 4 k d 2 1 6 k da n d1 7 1 k d ) k e y w o r d s ：s t r a w b e h y ( f r a g a d av e s c al ) ，p r e 船砌e n t ，s t o r a g e ，q u a l 咄 p h y s i o l o g ya 1 1 d b i o c h e 商s 时 i i i 独创性声明 y 6 0 7 3 2 e 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明 确的说明并表示了谢意。 研究生签名：三套善雌时间：年月日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可阻用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名 时间：年 月日 导师签名：立l j 囱牟 时间：年 月日 第一章前言 草莓( 厅a 韶，妇阳s c al ) 属蔷薇科，果实系假果。它是欧美国家的主要水果，引 入我国栽培只有五六十年，但发展已有一定规模。草莓果实色泽鲜红、柔软多汁，可 食部分高达9 8 ，是老少皆宜的水果，不仅可以鲜食，还可以做成天然保健果脯( 蜜 饯) 、天然保健饮料( 果酒、果茶、清凉饮品) 及部分速冻食品等。其营养成分不仅 含糖、酸和蛋白质，还含有丰富的营养元素( 钙、磷、铁含量比苹果和葡萄高2 4 倍) 和大量v c ( 5 0 1 2 0m g 1 0 0 9 一) ，素有“水果皇后”称号。1 。草莓不仅食用价值高，而 且还有一定药用价值，如具有清火解热、生滓止渴、利尿止泻等药理作用；具有治病、 防病、防癌等食疗功能。3 。由于草莓成熟期短、上市集中，又不耐储存，限制了草莓 的远销和生产的大规模发展。因此，延长革莓果实货架寿命，保持其商品价值，是草 莓生产和开发中急需解决的问题。 1 1 国内外草莓保鲜技术和发展方向 国内外草莓的保鲜有以下六种技术：低温冷藏、气调贮藏和薄膜包装、高分子 膜技术、辐射贮藏、化学保鲜和贮前预处理。 1 1 1 低温冷藏 低温冷藏( 2 一5 ) 是草莓保鲜的重要方法。有文献报道，草莓果实在近 冰点温度贮藏能显著抑制呼吸作用，降低其呼吸等各种代谢活动，且使周围寄生、 腐生微生物的滋生和污染减少到最低限度，从而可延长保鲜的期限“3 。我国农村用 地窖贮藏瓜果就是利用低温贮藏原理的民间贮减方法。现在我国各大城市建立冷库 用于果实的保鲜。 1 1 - 2 气调贮藏和薄膜包装 气调贮藏也是使用较广的技术之一，其主要方法是降低空气中o 。浓度，增加c 0 ： 浓度。此技术6 1 能减弱呼吸代谢强度，抑制内源乙烯和脱落酸生成及纤维素酶活性， 从而延缓草莓果实的完熟和衰老。近几年，该技术不断得到改进，为适应采后果实 不同阶段对氧气和二氧化碳含量要求，对气体成分控制也更加精细。为克服传统低 o 。、高c o ：气调贮藏的不足，如o ：浓度过低或过高均会对果实产生伤害“1 ，有人嘲 用纯氧处理草莓果实结果表明：贮藏前期，促进其呼吸上升和可滴定酸下降；而贮 减后期，则抑制其呼吸代谢、延缓硬度和v c 的下降从而降低腐果率，特别是进入货 架期后，有很好的保持果实品质效果。薄膜包装技术也得到广泛应用，草莓果实”1 采收时，将其装入果盘内，再用厚0 0 4 毫米聚乙烯薄膜套好、密封，置于0 5 、 相对湿度为8 5 一9 5 的环境贮藏，袋内气体指数：氧3 、二氧化碳6 ，用此方法 草莓可保存2 个月以上。气调和冷藏技术虽耗资大，但效果好，因此在国外一直受 到青睐。 1 1 3 高分子膜技术 目前，蜡型被膜商业应用非常广泛，市售有p r o 1 0 n g 和s e m p e r f r e s h 高分子膜。 有研究93 用浓度1 2 5 壳聚糖涂抹剂( 酒石酸、柠檬酸、琥珀酸和l 一谷氨酸为容剂 配制) 处理革莓果实并置于室温( 2 5 一3 0 ) 下贮藏，保鲜效果很好，其原因可能 是减缓果实对氧气的吸收、降低膜脂过氧化程度，从而延缓了衰老。徐维娅等“”也 利用壳聚糖添加剂( o 5 ) 处理草莓果实得到同样保鲜效果。蔡永萍等3 利用保鲜 液膜处理草莓果实，结果抑制草莓的呼吸代谢，提高s o d 活性和a s a 含量，从而延 缓了果实衰老。目前，纯天然可食性、符合“绿色”食品要求、具有良好水蒸气屏 障的高分子被膜如多糖膜，蛋白质及脂类等很多复合膜”“j 下在被研制和应用。 1 1 4 辐射贮藏 此技术利用y 等射线具有良好杀菌效果。赵永富等“1 3 用c o y 射线( 低温4 下， 3 k g y 为最适辐照剂量；室温2 0 下，4 k g y 为最适辐照剂量) 辐照革莓果实，减缓 了果胶降解的速度，减少了果胶降解的量，从而保持果实硬度，可显著提高保鲜效 果，但大剂量却加速草莓果实组织软化。目酊，有些国家已经应用中剂量射线控制 草莓果实腐烂。虽然此技术能有效地控制草莓果实病害，但草莓的成熟季节集中， 体积比较大，具体操作起来困难，且其经济的可行性也制约着此技术应用和发展。 1 1 5 化学保鲜 此技术利用化学保鲜剂和防腐剂进行果蔬保鲜。由于化学药剂的毒性及残留问 题，二氧化硫和过氧乙酸熏蒸处理等方法很难得到推广。现在国内外有关专家正致 力于开发研制无毒性的化学保鲜剂，有人。发现：脱水醋酸是一种广谱性的食品防 腐荆，能有效地抑制霉菌、酵母和细菌的生长：植酸也是无毒的天然食品抗氧化剂， 章一平等“”发现其能保持草莓果实品质，但防腐效应不明显。迄今为止，虽然化学 保鲜是控制果实采后病虫害的主要方法，但出于环境和健康等因素，其在果实保鲜 领域的应用将逐渐被淘汰。 1 1 6 贮前预处理 贮前预处理包括贮前预热处理和贮前预冷处理。 贮前预热处理即热激处理，一般是用高于果实成熟季节的温度对果实进行采后 处理的一种方法“。贮前预热处理最早在果实上的研究和应用是从防治果实病虫害 丌始的，有文献1 报道，热处理可以防治番木瓜、芒果、节果采后炭疽病，减少苹 果贮藏中虎皮病。目前，此技术已经被商业性或半商业性地应用于芒果、柑橘、节 果等果实的采后病虫害的控制。预热处理对采后草莓果实的生理效应有很多文献“” 报道：热处理能抑制乙烯的生成、“”抑制p g 酶和酸性磷酸酶的活性及蛋白质的合成 1 ，保持果实硬度、延长了果实的贮藏期“、明显改善了果实的品质。 出于刚采收的果实带有大量的田问热，呼吸作用十分旺盛，使果实内物质消耗 较快，极易腐烂变质。贮前预冷处理旨在使采收后果实迅速去除田间热、抑制腐败 微生物的生长、抑制酶活性和呼吸作用，从而延缓果实的衰老”。适当的预冷能最 大限度地保持果实采前的新鲜度和品质，预冷速度愈快愈好，特别对组织娇嫩的、 采后寿命短的果实，最好在产地进行预冷处理”。贮前预冷可以推迟香蕉在运输过 程中的后熟，从而延长贮藏时间“。延迟预冷可以增加鸭梨和雪梨内部的褐变1 。 预冷处理能延缓桃果实成熟软化“，但目前还没有报道此技术在草莓果实保鲜领域 中应用。 综上所述，目前较先进的保鲜方法为气调贮藏，但此技术投资大，对发展中国家 来讲，尤其是我国不宜大量发展。又基于环境和健康等因素考虑，化学保鲜技术的 应用越来越受到质疑。现在，世界各国都在积极研究无残留、无污染和无毒的果实 采后保鲜技术，其中生物和物理的保鲜方法备受人们的关注。贮前预处理保鲜技术 由于无毒、无污染和易操作等特点，是符合绿色水果要求的物理保鲜方法。是今后 草莓保鲜的发展方向。 1 2 本课题研究的目的和意义 本试验以“丰香”草莓品种为材料，从果实贮藏期间的腐烂率入手，研究了贮前 不同预处理对果实采后贮藏保鲜的影响，并进一步从果实的品质指标、呼吸速率、成 熟软化进程、活性氧清除系统、内源激素等生理生化变化和蛋白质合成表达的差异等 方面探讨贮前不同预处理的保鲜机理： 本课题为草莓果实保鲜提供了实用的技术，也为果实成熟基因工程和遗传工程 的研究提供理论基础，争取培育出耐贮藏的品种。 3 第二章研究材料和方法 2 1 实验材料及贮前预处理 2 1 1 试验材料 供试品种为“丰香”草莓( f r a g 撕a v e s c al v a l f e n g 趾g ) ，成熟度为八成熟( 粉 红期“”) ，采自安徽省长丰县。要求草莓果实保持生长条件( 土壤、湿度、营养等) 、 成熟度及大小一致，无病虫害及机械损伤。采后立即运回实验室做各种预处理。 2 1 2 贮前预处理 将采后草莓果实置于白瓷盘中。放入l r 卜_ 2 5 0 _ g 培养箱内，进行不同温度 ( 5 、1 5 、3 0 、4 0 、5 0 ) 和不同时间( 1 0 、2 0 、3 0 m i n ) 的贮前预处理。处理过程中 果实用保鲜膜覆盖，以免蒸发失水。每处理设3 个重复。次年重复一次。 2 1 3 贮前预处理后草莓果实的贮藏方法 低温冷藏：将经过不同预温处理的草莓果实和未经处理的草莓果实( 对照) 置于 瓷盘内，用保鲜膜覆盖，于5 条件下贮藏，每2 4 h 取样观察，计算果实腐烂率。 室温贮藏：将经过不同预温处理的草莓果实和未经处理的草莓果实( 对照) 置于 瓷盘内，用保鲜膜覆盖，于室温( 1 9 2 1 ) 条件下贮藏，每1 2 小时取样观察，计算 果实腐烂率。 2 1 4 最佳贮前预处理的筛选 以果实腐烂率指标为依据，应用统计分析软件s p s s l o 0 软件进行回归分析、相关 分析，筛选出最佳贮前预处理，并按2 1 3 方法定时取样测定草莓果实的硬度、维生 素c ( v c ) 、可溶性糖、可滴定酸等品质指标和呼吸速率、s o d 、p o d 和c a t 酶的 活性、m d a 含量、纤维素酶活性、内源激素含量、蛋白质含量及组分等生理生化指 标。 2 2 草莓果实品质及生理指标的测定 2 2 一草莓果实品质指标测定 2 2 1 1 草莓果实腐烂率的测定方法 果实腐烂率：按果实腐烂面积大小将果实划分为4 级o 。： o 级，无腐烂； 1 级，腐烂面积小于果实面积的l o ： 2 级，腐烂面积占果实面积的1 0 一3 0 ； 3 级，腐烂面积大于果实面积的3 0 ： 按下式计算腐烂指数： 腐烂率= ( 腐烂级别 该级果实) 最高腐烂级别木总果实$ 1 0 0 。 2 2 1 2 草莓果实硬度的测定方法 4 用g y l 型果实硬度计测定。每样品每次取6 个果实，每个果实在肩部取位对 称测定。 2 2 1 3 草莓果实可溶性糖和可滴定酸的测定方法 可溶性糖采用蒽酮法测定”“。具体操作如下：取lg 样品放入5 0m l 的三角瓶 中，再加入2 5 m l 蒸馏水，放入沸水浴煮沸2 0 m i n ，取出冷却，过滤入1 0 0 m l 容量 瓶中，用热水冲洗残渣数次，定容至刻度，即可溶性糖提取液。取适量样品提取液， 加蒽酮试剂，用7 2 3 型分光光度计测波长6 2 0n m 的o d 值。 有机酸采用滴定法测定。”。具体操作如下：取5g 样品，放入研磨中，加少量石 英砂研磨匀浆，用蒸馏水洗入5 0m l 三角瓶中，加适量的水，放在8 0 水浴中浸提 3 0m i n 。取出冷却定容至刻度，即为可滴定酸提取液。用0 1m 0 1 l 以n a o h 溶液滴定。 结果采用以下公式计算： 有机酸含量( ) = a + o 1 + k + c l o o ，w + d 其中：a 为滴定时消耗的n a o h 毫升数： c 为稀释有机酸的总量m l ； k = 0 0 7 5 ： 0 1 即o 1 m o l _ 1 l n a o h = 4 9 + 1 0 3 m 1 _ 1 ； d 为滴定时所取样液毫升数； w 为测定样品重。 2 2 1 4 草莓果实v c 含量的测定方法 v c 采用分光光度计法测定”1 。取5g 样品加少量草酸- e d t a 于冰浴研磨匀浆， 置1 0 0m l 具塞三角瓶中，加5 0m l 草酸e d l a 于磁力搅拌器上搅拌2 0m i n ，静置 3 0m i n ，4 0 0 0g 离心1 5m i i l ，取适量上清液，加草酸e d l a ，再加钼酸铵待显色1 5m i n ， 再以4 0 0 0g 离心2 0m i n ，取上清液于波长7 6 0n r n 测光密度值。 计算公式：维生素c 的含量= c + v t 4 1 0 0 w + v m 其中：c 为测定液中维生素c 的毫克数； v t 为提取液总体积m l ； w 为测定样品重g ； v m 为测定液体积m l 口 2 2 2 采后草莓果实贮藏期间生理指标的测定方法 2 2 2 1 采后草莓果实呼吸的测定方法 采用红外仪法测定1 。取三个草莓果实称重后放入反应瓶，经过一段时间待记录 仪指针稳定后、圮录有关数据，更换材料进行下次的测定，每样品三个重复。呼吸速率 ( m g c 0 2 g “h r 1 ) = c 0 2 p p m 事l o 吨4 d 4 f w 2 2 2 2 超氧化物岐化酶( s 0 d ) 活性的测定方法 采用n b t 光化还原法。”。取1g 材料加入3m l 磷酸缓冲液( p h 7 8 ) ，加入少量 石英砂于冰浴中研磨呈匀浆，定容到5m l ，于1 3 0 0 0g 冰冻离心1 5m i n 。上清液即 为酶提取液。采用n b t 光化还原法测定，以抑制n b t 还原5 0 为一个酶活力。 2 2 2 3 丙二醛( m d a ) 含量的测定方法 采用硫代巴比妥酸( t b a ) 显色法测定3 。酶样提取同超氧化物岐化酶( s o d ) 。 由于丙二醛测定时受多种物质的干扰，特别是可溶性糖类物质，而草莓果实含有大量 可溶性糖类，因此利用公式c ( u i n o l ，l - 1 ) 4 5 ( d 5 3 2 二d 6 0 0 ) = o 5 6 d 4 5 0 计算草莓果实 的丙二醛含量，以排除此类物质的干扰。 2 2 2 4 过氧化氢酶( c a t ) 和过氧化物( p o d ) 酶活性的测定方法 取l g 样品，加入4 下预冷的o 1 mp h 8 5 t r i s 一盐酸缓冲液5 m 1 和少量石英砂， 放入研钵中研磨匀浆。5 0 0 0g m i n 离心1 5 m i n ，上清液即为待测液。用愈创木酚显 色法o ”、联苯胺比色法1 、凝胶电泳法测定p o d 活性。 取1 9 样品，加5 m 1 4 下预冷的p h 7 o 磷酸缓冲液和少量石英砂，放入研钵中研 磨匀浆。5 0 0 0 9 m i n 离心1 5 m i n ，上清液即为待测液。采用滴定法。紫外吸收法和 凝胶电泳法测定c a t 酶活性洲。 2 2 2 5 采后草莓果实软化相关酶一纤维素酶活性测定 纤维素酶的提取：采用水浸法提取。“，具体步骤如下，取样lg 加入5g 蒸馏水， 3 0 水浴浸提1h ，过滤离心( 6 0 0 0gl om i n ) ，上清液即为纤维素酶提取液。 纤维素酶用滤纸糖化法测定。”1 。试管底部放约5 0 m g 剪成条形的滤纸，加入1m l 柠檬酸缓冲液和适当稀释的酶液，混匀，于5 0 下保温反应l h ，然后加二硝基水杨 酸显色液( d n s ) 试剂终止反应。摇匀后在沸水浴中精确放蜀5m i n 后，用水冷却。 加入2 0m l 蒸馏水再充分摇匀。最后静置2 0m i n 以沉降浆状物。然后在波长5 4 0 眦 处比色测定。空白以蒸馏水代替酶液。一个酶活单位( u ) 定义为每1 0 m i i l 内释放出 l u g 葡萄糖所需的酶量。 2 2 3 采后草莓果实内源激素的测定方法 2 2 3 1 内源激素的提取和纯化 称取草莓果实o 5g ，分三次加入预冷的8 0 甲醇3m l ，在弱光下分次冰浴匀浆， 将匀浆液倒入离心管中，于4 ，5 0 0 0g 离心1 0l i l i n ，倒出上清液，残渣加8 0 甲 醇0 5m l ，再离心一次，合并上清液。上清液采用s e p c l 8 胶柱做进一步纯化，收集 甲醇沈脱液备用。 样品的重氮甲烷化：在通风橱中取三支带盖的试管a 、b 、c ，于a 管中加入4 0 ( w ) k o h2 m l 和1 0 m l 乙醚，并置于冰浴，然后加入2g 亚硝基甲基脲，磁力 搅拌1 0m i n ，待上层乙醚相呈黄色后，将含重氮甲烷的乙醚液转移至试管b 中，并 在b 管中加数粒k o h 颗粒吸水2 0m i n ，去除水分后的重氮甲烷乙醚液倒入c 管即为 重氮甲烷。 取上述甲醇溶解的样品2 0 0u l 放置冰浴预冷，再加过量的重氮甲烷，至样品呈 黄色，反应1 0m i n 后，以半滴0 2m 0 1 l 。乙酸甲醇液破坏过量的重氮甲烷( 黄色消 失) ，用氮气吹干样液，加3 0 0u l 稀释缓冲液溶解，即可用于测定i a a 、a b a 。 植物内源激素中g a 和z r 不需甲酯化，取出3 0 0u l 甲醇溶解的样品液，用氮气 吹干，加3 0 0 l l l 稀释缓冲液溶解，即可用于测定。 2 2 3 2 内源激素的测定方法 采用酶联免疫吸附法测定“。 2 2 4 采后草莓果实蛋白质含量及组分的的测定 2 2 4 1 蛋白质含量的测定 总可溶性蛋白质的提取：准确称取1g 样品，加入4 m l 样品提取液( 5 0 m m o l l 1 p h 7 5 的t r i s h d 液：2m m o l - l 1m g s 0 4 ；2mm o l l _ 1e d t a ；5mm o l l - 1b 一巯基 乙醇) 于冰浴匀浆，8 0 0 0g 离心l om i n 去除沉淀，上清溶液即是总可溶性蛋白质液“。 用考马斯亮兰g - 2 5 0 测定蛋白质1 。 2 2 。4 2 蛋白质组分的测定 分别称取1 0g 草莓果实，用4 倍体积( 2 0 m 1 ) 的缓冲液( 5 0mm o l l 1p h 7 5 的 t r i s h c l 液；2mm d l l 1m g s 0 4 ： 2mm o l - l 。e d t a ；5mm o l l “b 一巯基乙醇) 于 冰浴匀浆，8 0 0 0 9 离心1 0 m i n 除去大颗粒，取上清液于冰浴条件下加硫酸铵至饱和度 1 0 ， 4 静置1 h 后1 5 0 0 0g 离心2 0 m i n ，沉淀物电泳备用，上清液于冰浴条件下 加硫酸铵至饱和度2 0 ，4 静置l h 后1 5 0 0 0g 离心2 0m i n ，沉淀物电泳备用，依 此类推，并收集不同分部的蛋自质样品沉淀。 s d s 聚丙烯酰胺凝胶电泳( s d s p ：a g e ) 条件”1 ： 采用不连续电泳，5 浓缩胶，1 2 分离胶。 将待分析样品与样品缓冲液 ( o 1 2 5m o l - l op h 6 8t r i s 。h c l ，2 0 甘油，5 b 一巯 基乙醇，0 0 1 溴酚蓝) 按体积比l ：1 混合并在沸水中煮3m i n ，然后用微量注射器 加样，加样量视蛋白质浓度和孔穴体积而定。每孔穴加样量2 0 5 0u l 。 在孔穴中的样品处缓缓加入电泳缓冲液( 0 0 2 5m o l l 1 t r i j h c l ，o 1 9 2m o l ：l - 1 甘 氨酸，o 1 s d s ) ，待孔穴加满覆盖后，分别在上下槽加入电泳缓冲液。接通电源， 稳压5 0v ，当指示染料溴酚蓝迁移至分离胶时，将电压调至1 0 0 一1 5 0v ，溴酚蓝迁移 至距离下方尚有1 2c m 时，即可切断电源，停止电泳。 将剥离的胶放于密闭容器中( 一般用大培养皿加保鲜膜封闭) ，用染色液( o 。5 考马斯亮蓝r - 2 5 0 ，4 5 乙醇，1 0 乙酸) 染色( 一般2h ，过夜更佳，染色时需 轻微摇动) ，脱色后用数码相机拍照。 2 3 统计方法 应用统计分析软件s p s s1 0 0 对实验结果进行相应的均值比较、方差分析、相关 性分析等，并利用e x c e l 绘图工具绘制有关指标线形变化图。 7 第三章结果与分析 3 1 贮前预处理对草莓果实腐烂率的影响 3 1 1 贮前预热处理对果实腐烂率的影响 果实腐烂率是判断贮藏效果的主要表观指标。不同温度和不同时间的贮前预热处 理对采后草莓果实冷藏期问和室温贮藏期间的腐烂率有明显的影响( 表1 、表2 ) 。不 论是冷藏还是室温贮藏，预热处理对果实腐烂率影殉均呈相同趋势，即在3 0 5 0 范 围内，随着温度的提高，果实的腐烂率有所下降，说明预热处理有利于果实贮藏。当 预热处理温度高于6 0 时，果实出现烫伤现象，腐烂较快，不耐贮藏；同一温度下 预热处理1 0 3 0 m i n 期间，随着时间的增长，果实腐烂率下降。由表l 和表2 还可以 看出，冷藏条件下果实的腐烂率比室温贮藏条件下低得多，说明低温有利于果实的贮 藏。但感官审评结果显示，室温贮藏下的果实色泽鲜艳，香气浓郁，而冷藏条件下的 果实则色泽及风味欠佳，从而影响其商品价值。 表l 冷藏条件下预热处理的果实腐烂率( ) t 曲l elf m j td e c a yr a t et 心a t e dw i t hp r e - h e a tt r e a t m e n t _ n ds t o r i e di t5 址：l 表巾i q 倒不h 的字母表示经l s d 法检验在p ( 0 0 1 ( 人写) 或p o0 5 ( 小写) 水甲1 麓异显著。以卜裘巾丰h 刊 表2 室温贮藏条件下预热处理果实的腐烂率( ) t h b l e2 f r u “d e c a yr a t e 仃e a t e dw i t hp r c h e a tt 佗a t m e n t 卸ds c o r i e da tm 帅i e m p c r a t u r e 应用统计分析软件对表1 、2 中果实腐烂率与预处理温度和处理时间进行多元线 性回归分析，结果表明，冷藏条件下，果实腐烂率与预热处理温度呈线性关系，其线 性方程为y = o 9 6 2 x + 7 1 6 8 5 ，时间因素被剔除：室温贮藏条件下，果实腐烂率与预热 处理温度呈线性关系，其线性方程为y = 0 7 0 2 x + 1 1 9 8 3 3 ，时间因素也被剔除。对果 实腐烂率、预处理温度和处理时间做定距变量相关性分析，结果表明，冷藏条件下， 果实腐烂率与预热处理温度呈极显著负相关，与处理时间呈负相关，但不显著( 表j ) ； 室温贮藏条件下，果实腐烂率与预热处理温度呈显著负相关，与处理时间呈负相关， 但不显著( 表4 ) 。以上分析结果说明预热处理的温度因子对贮藏期间果实的腐烂率 起关键性作用，而处理时问是次要因素。 表3 冷藏条件下果实腐烂率与预热温度和处理时问的相关性分析 r 曲i e3c o n l 砒i o n 锄a l y s i sb 就w e e nf h j i t 曲c a yr a i c 卸dp r c h “e m p e r a l u 阳s 锄dt i m 嚣s 州e da t5 t 注：在00 l 水平显著相戈：o0 5 水甲显著棚荚。咀f 裘f | 棚同 9 表4 室温贮藏条件下果实腐烂率与预热处理温度和处理时阃的相关性分析 t a b l e4c o m l a t i o n 蚰a i y s i sb c t w c c n 肌i td e c a yr 眦柚dp f e - h e a tt e m p e 嗽u r e s a n dt i m c ss t 0 e da tr 0 0 mt 哪d e 哪u r e y x 1 0 7 3 9 ( d = o 0 1 5 ) x ! 一0 5 4 00 3 7 51 ( p = o 1 0 7 ) ( p = 吼2 8 6 ) 3 1 2 贮前预冷处理对果实腐烂率的影响 表55 贮藏条件下预冷处理果实的腐烂率( ) t a b l e5 f m i td e c a yr a l et r e a l e dw i t hp 降c o o l t r c a l m e n t 柚ds t o r i e da t5 表6 室温贮藏条件下预冷处理果实的腐烂率( ) t a b l e6f r u i td 耽8 yr a t et r 明t e dw n hp r e - e o o it 肿越m e n ta n d s t o r i e d “r o o mt e m p e r b t u r e 处理 1 2h2 4h3 6 h4 8h6 0h c k 5 3 0 m i n 5 2 0 m i n 5 1 0 m i n 5 3 0 m i n 5 2 0 m i n 5 5 7 a b 4 3 2