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红曲霉液态发酵法高产麦角固醇的研究 详细摘要 本试验通过筛选了四株红曲霉菌株m o n a s c u ss p z z 、h o n a s c u sr u b b e rz k 、m o n a s c u s p u r p u r e r sg x 、m o n a s c u 8s p x m ，得到高产麦角固醇的菌株一z z ，每克菌体中含麦角固醇 6 7 5 4i lg ，并对其进行麦角固醇的产量研究，得到在1 2 0 h 为菌株一z z 的麦角固醇产量峰值， 每克菌体含7 4 6 1i ig 麦角固醇。用h p l c 和紫外测定进行方法比较，两者之间没有过大差异。 在对液体培养条件的研究上发现，接种量为1 0 时每克菌体含7 7 2 8i lg 麦角固醇，接 种量越大生物量则越大；初始p h 对菌体生物量有一定影响，但是麦角固醇含量较低；培养 温度为3 0 时每克菌体含7 4 7 6i lg 麦角固醇，温度过高会对麦角固醇的合成产生抑制；转 速为2 2 0 r m i n 时每克菌体中含7 7 5 1l ig 麦角固醇，转速过大会造成细胞破损从而生物量降 低，转速过小又会对麦角固醇合成不利。 培养基的优化我们先进行了单因子的筛选，得到：乳糖3 0 9 6 时每克菌体中麦角固醇含量 有1 0 2 4 1i lg ，牛肉膏2 0 9 6 每克菌体中麦角固醇的含量有1 3 5 1 1i lg ，m g s 0 41 0 0 时每克菌 体中麦角固醇含量有9 5 7 9l ig 。再对所筛选出来的单因子进行选择，考虑麦角固醇产量和成 本的问题，对最后确定的五个因素葡萄糖、酵母膏、( n i l 4 ) 2 s 0 4 、m g s 0 4 、k h 2 p 0 4 进行回归分 析，用d 一最优先对进行分析，并采用二次饱和d 最优设计的方法进行试验设计和建立多 项式回归模型，通过整理多项式得到最高指标时各个因素组合：葡萄糖3 7 、酵母膏3 o 、 ( n i t 4 ) 2 s 0 41 7 、u g s 0 40 5 、y d t 2 p 0 41 6 ，并对该组合进行验证，得到每克菌体中麦角固 醇含量平均有2 6 7 8 6i lg ，和多项式回归分析得到的最高指标接近。 关键词：红曲，红曲霉，麦角固醇，培养条件筛选，培养基筛选 4 s t u d i e so nl i q u i df e r m e n t a t i o no f f e r m e n t e de r g o s t e r o l s u m m a r y t h es t u d yd e f i n i t e dm o n s s c g ss p z zi st h ee r g o s t e r o lg r e a t e s tp r o d u c t i o no f m o n a s c u sw h i c hi n c l u d e dm o n a s c u ss p z z ，m o n a s c u sr u b b e rz k ，m o n s s c u sp f u p u r e r sg x ， m o n a s c u ss p x m i tw a sf e r m e n t e d6 7 5 4pge r g o s t e r o l ，a n dt h ep e a ko fp r o d u c ti o n w a si n1 2 0 h ，a tt h i sm o m e n t ，i tw a sf e r m e n t e d7 4 6 1 | lg w h e nc o m p a r et h em e a s u r e m e n tb e t w e e n 胛l ca n du v 。w ef o u n dt h ed if f e r e n c eo f d e t e r m i n er e s u l tw a sn o tr e m a r k a b l e s t u d i e do nt h el i q u i dc u l t u r ef e r m e n t a t i o n ，w ef o u n dt h a t1 0 i n o c u l a t i o nc o u l d m a k et h ef u n g if e r m e n t e d7 7 2 8i jge r g o s t e r o l ，a n d3 0 ct e m p e r a t a r ec o u l dm a k ef u n g i f e r m e n t e d7 4 7 6l ige r g o s t e r o l ，2 2 0 r m i nr o t a t i o nc o u l dm a k ef u n g if e r m e n t e d7 7 5 1 l jge r g o s t e r 0 1 s t u d i e do nt h eli q u i dm e d i u m ，w ef o u n dt h a t3 0 l a c t o s ec o u l dm a k et h ef u n g i f e r m e n t e d1 0 2 4 11 1ge r g o s t e r o l ，a n d2 0 9 6b e e fe x t r a c tc o u l dm a k et h ef u n g if e r m e n t e d 1 3 5 1 1i ige r g o s t e r o l ，1 0 0 m g s 0 4c o u l dm a k e t h e f u n g if e r m e n t e d 9 5 7 9i ig e r g o s t e r 0 1 t h r o u g hr e g r e s s i o na n a l y s isa n dd e s i g no fa n a l y t i c a le x p e r i m e n t s ，w ef o u n d t h ec o m p l e xl i q u i dm e d i u mw e r e3 7 g l u c o s e ，3 0 9 6y e a s te x t r a c t ，1 7 ( n h 0 2 s 0 4 ， 0 5 m g s 0 4 ，1 6 k h 2 p 0 4 a n dt h em e d i u mm a d et h em o n a s c u ss p z zf e r m e n t e d2 6 7 8 6 l jge r g o s t e r o li ne a c hg r a mo fw e i g h t k e yw o r d s ：m o n a s c u & e r g o s t e r o l ，l i q u i dc u l t u r e ，l i q u i dm e d i u m 5 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。 对本文的研究曾做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确 方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 埤 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解贵州大学有关保留、使用学位论文的规定，同 意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子 版，允许论文被查阅和借阅；本人授权贵州大学可以将本学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进f i - 检- 索，可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名： 6 1 率盟日 第一部分前言 红曲，又名：丹青，主要产地分布于我国福建、浙江、江苏、台湾等省，其中福建省是 我国红曲的主要产地，以古田红曲最为著名。在我国，红曲的应用已经超过了一千年，北 宋时期陶谷在清导录就记载有“红曲煮肉”；著名诗人苏轼也有“夜倾闽酒赤如丹”的 佳句。红曲共有三大类，即库曲、轻曲和色曲。库曲主要用于酿制黄酒、果酒和药酒，轻 曲主要用于酿制腐乳、酱和果酒等，色曲主要用于食品着色。我国自元代以来就有利用红曲 保存食物的传统。在 天工开物、饮膳正要和 m g s 0 4 。 优化后基础培养基配方为：3 5 乳糖、2 0 牛肉膏、0 7 5 m g s 0 4 。以优化后基础培养 基配方，重复三次试验，得到较为稳定的结果。 表2 - 3 1 正交稳定性试验 t a b 2 3 1o r t h o g o n a ls t a b il i t yt e s t 在s a b o u r a u d 作为液体种子培养基和未经过优化的基础发酵培养基上红曲霉菌株一z z 的 菌体生物量为0 4 9 ，每克菌体含麦角固醇的量为6 7 5 4i ig 。经过2 4 中对培养基碳源、氮 源及无机盐的单因子筛选，并在本小节中通过使用正交试验，确定了产生麦角固醇中不同因 素的影响：牛肉膏 乳糖 m g s 0 4 ，优化后发酵培养基为：3 5 乳糖、2 o 牛肉膏、0 7 5 m g s 0 4 ，通过优化后的培养基发酵三组得到菌体生物量在0 8 0 9 左右，每克菌含麦角固醇的 量增加到1 1 2 7 il jg ，菌体生物量比原始培养基增加0 3 8 9 ，每克菌体中麦角固醇含量增加 5 1 1 7 i j g 。 为了力求多增加菌株一z z 中每克菌体产麦角固醇的量，在下一小节中，我们使用了最优 回归设计法探讨多个因素对菌株产麦角固醇的影响，并优化培养基组合。 2 6 最优回归设计法确定优化培养基配方 2 6 1 前言 回归设计法是在以了解事物的内在规律和控制事物的发展过程及结果的基础上建立起 来的一种研究事物发展的因果之间的数量关系的方法。沪最优设计通过对因素本身的考察得 到最优的试验设计，利用m a t l a b 和d p s 软件来对试验结果进行分析，最后得到最优的组合 方案。这相较于正交设计能得到更多的组合方案，而不用局限在已经进行的试验中选择最后 的最优组合结果。 2 6 2 材料与方法 2 6 2 1 材料 2 6 2 1 1 红曲霉菌株 同2 2 1 1 - l 2 6 2 1 2 培养基 同2 1 1 1 2 2 6 2 1 3 试剂药品 同2 1 1 1 3 2 6 2 1 4 试验设备 同2 1 1 1 4 2 6 2 2 试验方法 2 6 2 2 1 菌株活化 同2 1 1 2 1 2 6 2 2 2 液体种子制作 同2 2 1 z 2 2 6 2 2 3 液体发酵 4 7 同2 4 1 2 3 2 6 2 2 4 麦角固醇测定方法 同2 2 1 2 4 2 2 6 2 2 5 确定试验因子 通过试验2 4 1 2 5 、2 4 1 2 7 、2 4 1 2 9 得到的结果以及试剂的价格，考虑到工业 生产中的成本，将试验因子确定为葡萄糖、酵母膏、( n t t 4 ) z s 0 4 、m g s 0 4 、k h z p 0 4 。设定每一 个因素对最后的结果都有一定的影响，所以对五种变量进行回归分析，用卜最优先对e 进 行分析，由于l c ( 1 ) i 0 0 5 ，p - r ( y ，x 2 * x 2 ) = o 2 9 7 4 0 0 5 ，p - r ( y ， x l * x 4 ) = o 7 7 2 8 0 0 5 ，p - r ( y ，x z * x d = o 8 8 2 1 0 0 5 ，旷r ( y ，x 2 * x s ) = 0 8 1 2 7 0 0 5 ，p - r ( y ， x 3 $ x 5 ) = 0 1 3 3 2 0 0 5 ，不显著，剔除。 根据p - r ( y ，x 3 ) = 0 0 0 0 1 = p r ( y ，x 5 ) = 0 0 0 0 1 g g s 0 4 ，氮源蛋白胨对菌株- z z 合成麦角固醇矿r ( y ，x z ) = o 4 7 4 2 0 0 5 ，不显著， 所以氮源蛋白胨对菌株一z z 合成麦角固醇没有影响。 将试验结果代入5 2 2 7 的二次回归模型中，用m a t l a b 矩阵求逆，计算、整理得n - y = 5 0 2 4 8 5 5 堍一1 4 1 7 7 9 5 渤+ 5 0 5 9 3 6 堍一2 7 0 a 7 砜 - 8 4 2 3 0 3 1 奄一撬锄衢魂魄一3 毒。3 7 l ! l 毪魄一翁鸵唼l 敏一熬盘7 镪毪码+ 1o 。0 6 3 1 獠强 + 2 6 7 4 9 瑰耐4 6 9 16 魄+ l1 12 4 ( 呐+ 2 7 9 5 4 2 钠+ 9 3 6 16 傀一7 9 m 2 + 3 3 6 5 0 1 霹- 1 9 1 嘲+ 1 1 9 哇9 0 礴+ 3 8 屯6 8 4 嚏 此方程的复相关系数r 2 ：0 9 9 7 6 ，决定系数：o 9 9 5 2 ，f = 8 9 7 1 5 9 ，p 值为0 0 0 0 1 ，说明 此方程和试验数据之间拟合性良好，相关系数r 经过t 检验，显著水平均小于0 0 5 ，得到 的方程为最优回归方程。 2 6 3 2 最优组合培养基的验证 经过整理得到的多项式回归分析，得到最高指标时各个因素组合： 表2 3 6 基于回归方程的最优培养基组合 t a b 2 3 6t h ec o m p l e xl i q u i dc u l t u r em e d i u mb a s i s e do nr e g r e s s i o ne q u a t i o n y x lx 2x 3】【4x 5 2 7 6 0 83 73 o1 7o 51 6 5 l 以最优组合培养菌株- z z = 批，其中每克菌体中麦角固醇含量平均有2 6 7 8 6 u g ，和多项 式回归分析得到的最高指标接近。 2 6 4 小结 经过上一小结的试验结果，采用回归试验的设计方法，将试验因子确定为葡萄糖、酵 母膏、( n h 4 ) 2 s 0 4 、m g s 0 4 、k h 2 p o t ，对五种变量进行回归分析，用d 一最优先对进行分析并 设计试验方案，得到试验结果后建立多项式回归模型，用m a t l a b 进行分析，得到最优回归 方程，由最优回归方程得到麦角固醇最高指标时培养基中各个因素的组合，经过验证，该培 养基配方葡萄糖3 7 9 6 、酵母膏3 0 9 6 、( i 妊h ) 2 s 0 41 7 、m g s 0 40 5 、k h 2 p ( h1 6 能得到2 6 7 8 6 i ig g 麦角固醇。 5 2 第三部分结果与讨论 3 1 结论 通过对四株红曲霉菌株液体发酵后菌丝体中麦角固醇含量测定筛选得到高产菌株 m o n a s c u ss p z z ，菌株- z z 产量曲线显示液体发酵1 2 0 h 后麦角固醇产量出现峰值，到1 2 0 小时最高。 对两种麦角固醇测定方法比较发现：h p l c 和紫外测定法测定的结果相差不大0 5 乳糖 m g s 0 4 ，优化后最佳液体发酵培养基为：3 5 乳糖、2 0 9 6 牛肉膏、0 7 5 m 龉0 4 ， 优化后每克菌体麦角固醇的含量从6 1 5 4ug 提高到1 1 2 7 1ug ，是原有含量的1 8 3 ；菌体 中麦角固醇含量达细胞于重的1 1 3 。 使用二次d _ 饱和最优回归设计得到五个因素对麦角固醇合成影响为：( n h ) 2 s 0 4 = k h 2 p 0 4 葡萄糖 m g s 0 4 ，蛋白胨对麦角固醇合成没有显著影响。最优培养基配方为葡萄糖3 7 、 酵母膏3 o 、( n h 4 ) 2 8 0 41 7 、m g s 0 40 5 、i q l 2 p 0 41 6 ，每克菌体得到2 6 7 8 6i lg 麦角固 醇。 3 2 讨论 3 2 1 高产麦角固醇菌株的筛选 不同菌株的生长情况不同，经过试验筛选出来的麦角固醇高产菌株生物量较小，这使得 菌株中麦角固醇的总产量受到一定的限制，提高菌株一z z 生物量的研究有着重要意义。 3 2 2 不同液体种子培养基麦角固醇产量峰值不同 研究发现：两种不同的液体种子培养基对菌株一z z 液体发酵产麦角固醇有一定影响。使 用液体种子培养基p d a 时，生物量峰值在1 6 0 h 出现，为0 5 9 ，麦角固醇产量的峰值则在1 4 0 h 出现，每克菌体中麦角固醇含量为6 5 4 2l lg ；使用液体种子培养基p s a 时，菌株一z z 液体发 酵生物量峰值在1 4 0 h 出现，有0 5 9 ，麦角固醇产量峰值在1 2 0 h 出现，有7 4 8 1 i ig 。 以p s a 为种子培养基时，麦角固醇的产量峰值比以p d a 为种子培养基时提前出现2 0 h ， 并且产量更高，所以p s a 是较为良好的菌株一z z 液体种子培养基。 在试验结果中，有几组数据( 以p d a 为液体种子培养基，液体发酵1 4 0 h 和1 6 0 h ；以p s a 5 3 为液体种子培养基，液体发酵l o o h 、1 2 0 h 和1 4 0 h ) 出现当麦角固醇含量较大时一般菌体重 量都较小，而麦角固醇含量较小时一般菌体重量都较大，直观上呈现负相关的情况，这种情 况在诸多文献中也有提到。s p s s l 3 0 中的线性相关分析能够揭示因素间彼此存在的相互联 系、相互制约的关系，这是一种不确定的相关关系，因素间既有关系、但又不存在完全确定 的函数关系，经过分析得到在以p s a 为液体种子培养基时，菌体重量和每克菌体中麦角固醇 含量的关系： 因为r = o 4 2 9 ，p = o 3 3 7 0 0 5 ，说明了菌株- z z 重量和每克菌体中麦角固醇的含量之间 相关关系不显著。 在试验中，麦角固醇含量的下降先于菌体细胞生物量的下降，说明了麦角固醇是菌株一z z 细胞膜中的重要组成部分，关系到菌体细胞的完整性，当细胞膜中麦角固醇含量下降的时候 会导致菌体细胞膜缺损或破坏，从而使菌体死亡。 3 2 3 对不同测定方法的讨论 h p l c 测定麦角固醇色谱柱为s h i m - p a c kv h sc 1 8 ( 4 6x1 5 0 r a m ；5 u m ) ；流动相为甲 醇：水= 9 7 ：3 ；流速( f l o w ) 1 5 0 0 m l m i n ，停留时间( s t o p ) 1 0 5 0 m i n ，柱温( t ) 3 0 ，检测 波长( v w ds i g n a l ：2 8 2 n m ) ，进样体积1 0 pl 。样品经过皂化、萃取、重结晶后进行测定， 0 5 9 菌体- z z 中麦角固醇含量为3 7 5 6i lg m l ，每克菌体中含7 5 1 2 i lg 麦角固醇。同样的 样品在紫外测定下每克菌体中麦角固醇含量为7 4 7 2i ig 。h p l c 测定的结果和紫外测定结果 相差不大，但是紫外测定法便捷快速，h p l c 测定法较为繁琐、时间较长，需要将提取液重 结晶后溶解，使用“皂化一萃取一紫外检测法”能较方便快捷的得到菌体中麦角固醇的含量。 3 2 4 不同培养条件的优化讨论 四个培养条件因素：接种量、初始p l 、培养温度、转速都对菌株一z z 中麦角固醇的产量 有一定影响。 其中，接种量对菌株- z z 产麦角固醇的影响最大，同时接种量的多少还影响了菌株生物 量的大小，在接种量为1 0 时，可以得到较大菌体生物量和麦角固醇产量，接种量的增大有 利于菌体生物量的增大，但是，当接种量过大时会造成菌体中麦角固醇的下降，说明菌体对 营养的利用还是优先在生长发育，其次才是麦角固醇的合成。 初始p h 对菌体生长的影响说明了红曲霉菌株一z z 是一种嗜酸的真菌，但是酸性条件下 对菌株一z z 中麦角固醇产量比自然p h 下低，说明酸性条件不利于菌体一z z 产生麦角固醇。 菌株- z z 生长的温度范围较广，不同温度对麦角固醇产量的影响较大，充分说明了麦角 固醇的合成是与多种酶相关系的，见图3 一1 图3 - 1 麦角固醇生物合成 f i g 3 1t h ee n g e n d e rc o u r s eo fe r g o s t e r o li nf u n g i 以产麦角固醇为考虑的主要因素则3 0 c 最佳，且在此温度下菌体的生长较为旺盛。 转速和液体发酵中溶氧量有一定关系，转速越大，菌株一z z 的生长就越快，说明氧的溶 解是有利于菌株- z z 的生长的，当转速达到2 4 0 r m i n 时，菌体生物量和麦角固醇的含量都 降低。麦角固醇是真菌细胞质膜的重要组成成分，它是一种准平面体分子，通过与磷脂结合 稳定磷脂相，从而增加膜的稳定性。麦角固醇的缺乏，必将引起真菌细胞膜功能异常，甚至 发生细胞破裂( 谢小梅，2 0 0 6 年) 。说明在此转速下，菌体细胞容易破损，从而造成菌体死 亡。 3 2 5 不同培养基组分的优化 经过试验，碳源对菌体中麦角固醇的含量有一定影响，水解易产生葡萄糖的碳源对菌体 生物量的增加有促进作用，比如：大米粉、蔗糖，其中蔗糖最有利于菌体生长，平均生物量 有1 o g ，这可能是菌体对碳源水解出葡萄糖的利用主要为生成构建细胞骨架的n _ 乙酰葡萄 糖胺( n a g ) 有关，但是乳糖有利于菌体产生麦角固醇，平均每克菌体中麦角固醇含量可以 达9 2 4 1pg ，这可能是和乳糖不容易被利用，以及水解后对培养基造成的p h 改变有关，同 时乳糖分解出的单糖d - 半乳糖和卜葡萄糖在酶的作用下转化为6 - p 一葡萄糖进入糖酵解生成 麦角固醇合成骨架乙酰一c o a 。乳糖成本较高，在进行大规模生产的时候利用葡萄糖要更好些。 对菌株一z z 产麦角固醇影响最大的因素是氦源，氮源的不同会造成菌体中麦角固醇的差 异，这和氮源分解产生的氨基酸有利于合成各种蛋白酶有关。在这五种氮源中，三种有机氮 源对菌体产麦角固醇的影响都较大，比较而言，牛肉膏有利于麦角固醇的产生，平均有 1 1 2 8 8l jg ，但是牛肉膏对菌体生长不是最有利的，酵母膏能使菌体得到较高的生物量，平 均有0 9 9 。说明菌株- z z 对牛肉膏的利用率不是最高的，且通过浓度试验得到，牛肉膏的浓 5 s 度过大又会对麦角固醇的合成产生抑制作用。 试验中的六种无机盐对菌体产生麦角固醇有一定促进作用，其中以作为大多数酶的辅酶 的m 9 2 + 对麦角固醇的合成影响最大，以m g s 0 4 作为无机盐添加入培养基时，平均每克菌体中 麦角固醇含量可达9 5 7 4l ig ，这是因为在麦角固醇的合成代谢中有还原酶的参与，m g s 0 4 解 离出的m 9 2 + 作为还原酶的辅助因子，可以加强麦角固醇合成途径中多个还原酶的活性；当以 k h 2 p 0 4 、k 2 h p t h 、n a h 2 p 0 4 作为无机盐添加入培养基时，菌体一z z 的生物量都较高，这应该是 由于k h 2 p 0 4 、k 2 h p 0 4 、n a i - 2 p 0 4 这三种无机物在水溶液中都容易解离出h + ，从而使得培养基的 p h 值下降，使培养基呈酸性环境，又因为经过对培养基初始p l l 的讨论后证明酸性环境对菌 体- z z 的生长是有利的，所以才表现出k h 2 p 0 4 、i f a b p 0 4 、n a l h p 0 4 这三种无机物作为培养基无 机盐添加时对菌体生长有利，这也再一次证明了红曲霉菌株一z z 是一种嗜酸的真菌。 在对单因子进行浓度优化时发现，在一定区间内随因子浓度升高，麦角固醇含量也升高， 在达到峰值后又会随因子浓度的升高而降低，这和菌体中麦角固醇富集产生对合成过程中 h m g - c o a 还原酶的抑制有关，同时和菌体中对有机物分解代谢相关的酶趋于饱和，不再结合 底物有关。 致谢 本论文从选题开始到最后的成稿都倾注着导师谭艾娟教授的心血，研究生三年中导师不 仅仅在生化药学和生物化学的理论知识上给予了我充分的引导，更教授给我微生物发酵及真 菌次生代谢产物研究的思路和方法，导师严谨正直的治学态度以及亲切和善的师风师德使得 我在试验设计和对结果分析中遵循经典传统也能尝试探索新方法。同时，也感谢谭老师在工 作和生活中给我诚恳的意见和建议，才让我在遇见困境和失败时能总结出经验和教训。 感谢刘爱英教授和吕世明教授对我的试验提出的宝贵意见。 感谢我的同门欧翔、黄锴、潘明志、王珂佳、师兄武立琨以及师妹郑珊、吴颖的支持和 帮助，愿友谊长存。 特别要感谢我的父母，养育之恩无以为报，谢谢父母对我最无私的体贴和最宽宏的包容， 谢谢父母为我做出的每一次牺牲、给我的每一个提点，谢谢父母从未对我失去信心、对我的 爱也从未减少。同时，也要谢谢我的家人，谢谢我的姐姐邹磷、哥哥钟剑磷，谢谢你们在后 期给我的帮助。 最后，衷心感谢评审本论文的各位专家教授。 5 7 参考文献 1 习兴梅曾光明郁红艳真菌生物量指示剂麦角固醇的分离及测定方法 j 微生物学通 报2 0 0 63 3 ( 3 ) ：1 2 8 - 1 3 2 2 王镜岩朱圣庚徐长法生物化学高等教育出版社2 0 0 2 ：6 3 1 7 5 3 邓玉清王纪虞龙微生物麦角甾醇的研究进展 j 微生物学杂志2 0 0 12 1 ( 3 ) ：4 5 4 7 4 孙佰申周立平陈旭峰马莉锋b p l c 法测定红曲霉发酵样品中麦角固醇的含量中国 食品添加剂2 0 0 4 ( 2 ) ：8 9 - 9 2 5 邢旺兴苏国同等关于红曲霉分类地位的认识解放军药学学报2 0 0 42 0 ( 2 ) ：1 1 9 6 纪远中红曲及红曲霉的研究现状及进展天津药学2 0 0 51 7 ( 2 ) ：6 5 6 7 7 李素玉环境微生物分类与检测技术北京化学工业出版社2 0 0 5 8 许旭萍李惠珍余晨兴等麦角固醇产生菌t o r u l l o p s i sf a m a t a 优化发酵条件的研究 生物学杂志2 0 0 21 8 ( 2 ) ：1 5 - 1 7 9 朱效刚陶冠军陈蕴许赣荣高效液相色谱法测定功能性红曲中的麦角甾醇食品与发 酵工业2 0 0 43 0 ( 9 ) ：1 0 4 - 1 0 7 1 0 邵伟熊泽吴炜仇敏红曲色素液体发酵动力学模型的构建江苏调味副食品2 0 0 6 2 3 ( 6 ) ：8 1 0 1 1 邵力平真菌分类学北京中国林业出版社1 9 8 4 1 2 邱从平张慧波施立钦等麦角固醇提取及分离纯化研究 j 中国科技信息2 0 0 5 ( 1 2 ) ：1 3 8 1 3 宋文霞于雪云关凤梅郭利美王瑞明酵母中麦角固醇含量测定的研究山东商业职 业技术学院学报2 0 0 51 2 ( 5 ) 4 1 4 张俊杰赵树欣赵华红曲霉及其生理活性物质食品研究与开发1 9 9 81 9 ( 2 ) ：1 4 一1 8 1 5 张沧桑李惠珍许旭萍等麦角固醇突变株啤酒酵母s 嘶一7 1 的诱变选育及其优化发酵 条件的研究药物生物技术2 0 0 18 ( 5 ) ：2 5 1 2 5 4 1 6 张博润何秀萍等麦角固醇高产菌株的构建及其培养条件优化的研究 j 生物工程报 1 9 9 91 5 ( 1 ) ：4 6 - 5 1 1 7 张照明谭天伟麦角固醇的市场前景 j 精细与专用化学品2 0 0 2 ( 2 2 ) ：9 - 1 1 1 8 张曼夫生物化学中国农业大学出版社2 0 0 2 ：2 7 7 2 8 0 1 9 3 张力s p s s l 3 0 在生物统计中的应用厦门大学出版社2 0 0 6 ：1 0 4 1 2 0 2 0 杨德试验设计与分析中国农业出版社2 0 0 2 ：2 4 6 - 2 5 6 2 1 何秀萍张博润微生物麦角固醇的研究进展 j 】微生物学通报1 9 9 82 5 ( 3 ) ：1 6 6 1 6 9 2 2 】何秀萍郭雪娜张博润谭华荣甾醇酰基转移酶基因高表达对酵母菌麦角甾醇合成的 影响微生物学报2 0 0 44 4 ( 1 ) ：6 8 - 7 1 5 8 2 3 远腾章( 日) 文陈瑞娟译胆固醇合成抑制剂莫纳科林k 一关联物质的探索酿酒科 技1 9 9 93 3 ( 3 ) ：8 1 8 3 2 4 谷学新赵红帅邹洪夏敏高效液相色谱法测定功能性红曲米粉中的麦角甾醇首都 师范大学学报( 自然科学版) 2 0 0 62 7 ( 5 ) ：4 1 4 3 2 5 陈彦霖李昭蓉陈建州红曲霉菌种的研究与应用食品工业月刊1 9 9 83 0 ( 7 ) ：卜l o 2 6 俞艳玲邢旺兴陈士景七种红曲霉的扫描电镜观察浙江中医学院学报2 0 0 52 9 ( 1 ) ： 7 8 7 9 2 7 索江华黄现青郭爽等红曲霉及其主要产物 n 郑州牧业工程高等专科学校报2 0 0 6 2 6 ( 1 ) ：2 1 2 3 2 8 徐孝华普通微生物学中国农业大学出版社1 9 9 9 ：9 4 1 2 7 2 9 黄艳李从文姚广龙红曲及其安全性研究进展食品研究与开发2 0 0 62 7 ( 8 ) ： 2 1 7 2 2 0 3 0 童群义红曲霉产生的生理活性物质研究进展 j 食品科学2