屏障环境ABCE区动物实验室操作流程及考试内容(20160406).doc

屏障环境ABCE区动物实验室操作流程及考试内容本操作流程、各条内容前面无注明的为各区通用流程，前方有 区 字样的为各区差异流程，需要进入该区域的必须知晓，不需要进入该区的可以不看。字体标红的为重点。一、分区:1二、门禁1三、灭菌2四、穿戴与通行3五、饲养间内4六、标签：6七、补给6八、压差与风机7九、废物及小鼠尸体处理7十、动物转运7一、 分区:1. 屏障环境AB区是保种繁殖区（用于遗传修饰小鼠保种和繁殖），屏障环境C区为实验区（用于大小鼠实验操作和观察），屏障环境E区为实验和检疫区（用于ABSL-2大小鼠实验和外购种源动物检疫），普通环境G区为实验和检疫区（用于普通级大动物饲养、实验和手术操作）。普通环境F区正在改造暂不提供使用。2. 实验动物中心实行不同洁净度控制的分区管理，洁净度等级为A小区、A大区和B区 C大区和C小区 E区 G区。实验动物中心要求同一个人同一天需要进不同洁净度区域时，应先进入洁净度高的区域，再进入洁净度低的区域，不得逆反或随意顺序进入到两个不同洁净度等级区域。 同一洁净度A、B区中，应该先到保种繁殖区（A小区或B区保种房间）再到实验扩大区（A大区或B区房间）。门卫登记处必须填写每个区域的房间号。3. AB区不允许任何实验操作，所有实验操作均在屏障环境C区或E区进行。4. C区屏障环境C区实验室又分为C大区和C小区，其中C小区包括转基因平台实验区、备用实验区，C大区包括外科操作实验区、基础代谢实验区、免疫缺陷动物实验区及其他单个实验房间。5. E区 E区为动物生物安全二级实验室（ABSL-2），动物实验方案必须经过该区老师统一审核管理，递交实验动物中心质量安全负责人审批，同意后方可安排实验。二、 门禁1. 实验动物中心所有出入通道及饲养间都设有门禁，培训通过后发给门禁卡，每卡押金10元，退卡时返还押金。考试没通过无法取得门禁卡权限的不收取押金。2. 获取门禁卡流程：参加每月一次的理论培训，培训前会提供相关资料。现场培训前先集中闭卷理论笔试，合格者才可参加现场培训。现场培训考核通过后开通门禁卡权限，交纳门禁卡押金。第一次单独进屏障区的由工作人员现场陪同或监控录像考核。以上各环节不合格均只有一次补考机会，理论知识补考时间暂定当期考试的第二天，现场考试未通过者不开通门禁卡权限。单项补考未通过者均取消再考资格，必须参加下期的培训后再考。3. 门禁卡一人一刷，监控可查看，不得借用别人的卡进入屏障，不得尾随进入。不得两人共用一卡。严禁无卡人员进入。4. 实验人员只需开通1张卡，但必须严格按照从高洁净度区域到低洁净度区域的要求使用，中心定期调取门禁记录检查，违者取消所有权限，不得再次到实验动物中心参加任何项目。5. A小区每个课题组少于100笼位允许2人进入，100200笼位4人进入，依次类推。一个房间多个课题组时，没有固定门禁卡，通过同一房间的微信群按预约进入时间顺序，凭身份证或学生证从门卫值班处换取门禁卡。6. C大区C大区免疫缺陷实验室因超净工作台数量限制，同一时间段只允许68人通过微信群提前一天预约成功后才能进入（凭证件到门卫处换取门禁卡），使用完毕立即送回门卫值班处。该区观摩的学生不得超过2人。7. C大区C大区预约现场培训流程：（1） 条件审查：凡经过理论集中培训、笔试通过（三个月内成绩有效）且C区有寄养动物的实验人员方可参加预约现场培训。（2） 预约流程：符合条件的实验人员必须在每周二17:30之前发送预约邮件（标题为：C区预约现场培训）至。管理老师当周三审查并邮件回复符合条件的人员名单，当周四14:15在C区门前统一安排现场培训（若人数偏多，则分批安排）。8. 实验动物中心准许实验人员进入实验室时间：正常工作日为： 8:0018:00；周末节假日为：9:0017:00；门禁卡关闭时间： 18:30。在临近下班时进入屏障区可能导致门禁卡自动关闭不能使用。9. 如有特殊要求需要延长实验时间，请向该区分管老师递交书面申请，导师（负责人）签字，中心同意后方可延长。10. 每周三下午2：004：30为实验动物中心各区全面消毒时间，应避免这个时间段来实验动物中心。三、 灭菌1. 所有物品传递到屏障区内都需要实验动物中心的工作人员操作，不得私自操作。2. 实验要求高压灭菌的物品，应提前2天送到相应区域的待灭菌物品处。有避光、冷藏等特殊要求的药品，需提前发信息或电话告知工作人员，需要委托技术人员操作的细胞等也要提前联系好，以便更好地安排时间。周末需要使用到的高压灭菌物品，最迟应在本周五下午3:00前送到。3. 传入实验室的物品如需使用传递窗紫外照射时，必须由实验动物中心工作人员操作， 开启紫外灯照射30分钟（会自动关闭）后才能取出拿到实验室。4. 所有物品灭菌方式由实验动物中心工作人员确定，有特殊需求的可以双方商定。5. 饲养室、实验室、操作室中各课题组暂存或重复使用的物品、器械等必须两周灭菌一次，不得锁在柜内，长期不用。6. E区 传染性病原微生物实验所产生的笼盒、饮水瓶、垫料、注射器、EP管、纸张等打包封存后放在待灭菌区；动物尸体用两个封口袋交叉封住放置-20冰柜保存；使用过的口罩、手套、无菌服等在污物暂存室按分类集中储存。以上物品均由工作人员集中消毒处理后移出屏障外区。7. E区 低毒染毒实验应先做好物质降低毒性的准备预案，经该区负责人审批后实施。四、 穿戴与通行1. AB区 AB区人员行走方向为：二楼AB区出入口 男、女换鞋、更衣室淋浴室洗澡（更换桑拿服） 男、女一更 男、女二更 风淋室 洁净走廊1 洁净走廊2或3 饲养间 污物走廊 洗刷区（脱无菌服）灭菌区淋浴室（换回自己衣服）男、女换鞋、更衣室二楼大门外区。若出了AB区大门（如到休息室喝水、上卫生间等），需再次进入AB区的必须重新洗澡。若没有走出AB区大门，第二次或以上次数需再次进入AB区（如A小区A小区、A小区A大区、A大区A大区、B区B区）的走向应为：饲养间 污物走廊 洗刷区洗刷区与灭菌区相邻门边指定处（脱无菌服）进一更前走道，在铁皮箱里拿出高压灭菌过的湿毛巾（将脸、脖子、手臂擦洗干净）重复下面第11、12、13条的步骤再次进入屏障。2. AB区 进入A小区、A大区和B区的，进入前必须洗澡。进去洗澡的，出来可以洗澡；进去没有洗澡的出来不可以洗澡。违规必须处罚。3. AB区留中长发的同学进入男、女一更前应将马尾绑好后盘成小丸子头发，刘海可以戴头箍或者用皮筋、发夹固定住。4. C区 C区人员行走方向为：一楼CD区出入口 换鞋男、女更衣区（更换桑拿服） C大区或C小区入口一更 淋浴室 二更 风淋室 洁净走廊1 洁净走廊2或3 各实验区（间）或操作室 污物走廊 洗刷区（脱无菌服）灭菌区男、女更衣区（换回自己衣服）换鞋一楼CD区出入口。C大区的外科操作实验区和基础代谢实验区，C小区的转基因平台实验区均设有操作室，允许从操作室内往两侧饲养间开的小门来回通行，但必须做到随手关门。5. E区 E区人员行走方向为：EF出入口二楼大门外区 更衣室缓冲室二更 风淋室 洁净走廊 饲养间 污物走廊 污物暂存室更衣室二楼大门外区6. 平时应及时修剪指甲、胡须，不得化妆和佩戴戒指等饰物，尽可能留短发。7. 有看到自动消毒器时，应先消毒双手，后到一更入口前刷卡开门，用身体倚着门，套上鞋套进入，将拖鞋脱在门口的塑料筐中。8. 从一更二更进入屏障环境实验室途中，一旦看到有75%酒精喷壶的地方都要消毒双手，当穿戴头套、无菌服等步骤结束后必须再次消毒双手和脚底。9. 二更内操作：进到二更时将眼镜先放入消毒液中浸泡 双手用75%酒精消毒 将需要穿戴的物品（如口罩、手套、眼镜布、无菌服）依次拿出、戴上或备用 当所有物品穿戴整齐后 拿出眼镜擦干戴上 在平面镜前整理，看是否穿戴齐全，头发不能露出再次消毒双手和脚底进入风淋室自动风淋60秒。10. 出风淋室时，要注意拖鞋放在风淋室出口左侧或右侧，应在踩入洁净走廊之前拿出拖鞋放在地上穿好，不能直接踩入洁净走廊。11. 所有饲养间实施单向通行的区域有A大区、A小区、B区、C大区、C小区、E区，为了避免污染进入这些区域饲养间后在任何情况下都不允许返回任何一条洁净走廊。12. 出屏障区到洗刷区后：将手套、口罩、头套、脚套分类回收。注意头套、脚套要记得先拿出来，不要与无菌服混在一起，以免影响洗衣机正常工作。无菌服和桑拿服均应脱成正面且必须拿掉一次性脚套，拉链拉回原位。13. E区 传染性实验要求自己换笼，在洁净走廊自己配好消毒液、拿上抹布带进饲养室。14. E区 出屏障区到洗刷区后：告知屏障内待消毒物品（污物）情况， E202、E203、E204动物生物安全实验室按实验小组实行微信提前一天预约下次进入时间，实验结束后登记人员离开时间。五、 饲养间内1. 饲养间不锈钢平板架每层只能放 9个小鼠笼盒，超过一个小鼠笼盒按原价格10倍计算。每间地面不得饲养动物，否则每笼按原价格100倍处罚计算。每笼饲养断奶后的小鼠不能超过5只，超过要求时会贴上红标签并发邮件通知分笼。自通知日起4天内必须前来分笼，不按时分笼的，工作人员有权强制替代分笼，并且每笼按100元价格收取分笼费。2. B C E区 IVC饲养笼属于独立通风笼具，主机的参数不能随意改动。IVC每笼饲养断奶后的小鼠不能超过5只，IVC的插口要对准饲养架的接口，笼盒内有雾气或水珠，说明IVC笼盒没对好或没通气（风管堵塞）。3. 在屏障环境饲养间内的饲料均可饲喂动物，但应根据小鼠的只数进行添加，最适合添加量为34天内吃完，不可添加过多饲料，造成浪费或发霉。剩余饲料要把袋口封好或者用有盖笼盖好。4. 给动物饮水瓶加水时要注意：1、水瓶水要灌满（为方便检查小鼠是否正常饮水），2、用力拧紧瓶塞（怕漏水） 5. 鼠盒操作应规范，离开视线范围应立刻盖好以防小鼠逃逸。若发现小鼠逃逸，应马上抓捕，如未抓捕到，应告知工作人员。6. 增减笼数要自觉登记，表格贴在往污物走廊出去的门上，工作人员每周也会统计一次。如不自觉登记，以工作人员记录为准进行计费。7. 离开动物饲养室的时候记得将日光灯关掉（淡黄色的照度灯自动控制，关不掉的。），随手将每一道门拉紧关好，带有门禁的门如听到“滴答、滴答”的声音代表门未关好。8. 如果有人需进入饲养间内，另外一个人需离开同一饲养间时，饲养间两侧门不能同时打开，避免没有压差梯度。9. 饲养间内保持安静，不允许大声说话，喧哗，尽量减少操作产生的声响。10. 为防止污染，饲养间地面禁止坐、躺。11. 屏障区内任何情况下不得脱掉无菌服，口罩，手套等。如遇紧急情况应迅速出屏障外区处理。手套有破口，马上拿一双新手套戴上。重感冒不允许进入屏障区。12. 饲养间内的操作车不得当运输车，将其拉到污物走廊再拉到外区。13. 饲养间内的所有物品（如操作车、笼具、记录纸、实验用品等）不得搬到其他饲养房间使用。14. 饲养间虽然放置一定数量的备用笼和垃圾清理笼，但使用时还需提前预约数量。15. C大区 C大区含两个操作室，分别为外科操作实验区和基础代谢实验区。外科操作实验区主要承接大小鼠外科手术。基础代谢实验区主要承接小鼠代谢相关实验，仪器包括：动物行为与生理代谢监测系统Promethion、小鼠跑步机和大小鼠高血压检测系统。此间操作室使用时尤其注意关闭临近饲养室的门，避免来回人员流动产生的噪音对动物监测指标的影响。16. C小区 C小区含两个操作室，分别为转基因平台实验区以及备用实验区。17. A B C区 操作时必须在操作车上或架子上，不能在地板上进行操作。做完操作需将台面收拾整齐（喷晒酒精于台面，用纸巾擦拭干净），地面清扫干净（如地板有脚趾头、血迹等，用酒精喷晒后用纸巾擦拭干净），所产生的垃圾，操作人都得带到洗刷室处理。可以换一个脏笼，垃圾倒里面带走。18. A B区每操作完一笼手均需用酒精等消毒液消毒双手后再操作下一笼。19. E区 操作时必须在生物安全柜或换笼机内，不能在饲养架、推车或地板上进行操作。做完操作需将台面收拾整齐（喷晒酒精于台面，用纸巾擦拭干净），地面清扫干净，所产生的垃圾，操作人都得带到灭菌室和污物暂存室处理。20. 饲养间、实验间使用的电子设备在无人观看的情况下必须拔掉电源插头，放置安全地方。六、 标签：1. 需要送到屏障区的待灭菌物品：应至少写上姓名、房间号、日期并放到指定位置。2. 屏障环境内冰箱物品应至少写上物品名称、姓名、起止日期，不写会随时被扔掉 。3. 小鼠笼子挂牌标签格式已规范（网站有公布），必须填写姓名、电话、课题组。如果课题组成员喜欢缩写名字的，请在墙上显眼的地方写上中英文对照和联系方式。挂牌最好只贴一张，不要多层累积张贴，以防脱落。标签书写不规范每张处罚50元。4. 各课题组实验员交接后，标签纸上姓名必须当天改成现任实验员。5. 繁殖鼠笼标签颜色的含义：红色标签代表警告分笼。违反以下几种规定，工作人员即贴上红色标签。并发邮件告知。a) 实验用、断奶小鼠的饲养量：按照成年小鼠每笼不超过5只。b) A小、B区保种繁殖区的配种比例为1：1。每种品系的配种笼位最多4笼。c) A大、B区扩大繁殖区的配种比例最高为1：2。d) A大、B区如母鼠生育能力强，2只母鼠均下崽，仔鼠数量合起来超过15只。看到红色标签应按时分笼，分笼后只需在标签上打钩，不能将红标签撕掉。黄色标签代表有小鼠死亡。看后撕掉。粉红色标签代表表示不需要工作人员换笼并标明日期。蓝色标签代表同区笼位的转运。C E区C E区需要饲喂高脂饲料或者需要保存尸体，或是禁食等特殊要求，应贴绿色标签注明（绿色和粉色标签需发邮件到相应区域预约）。七、 补给1. 如需要笼具、水瓶、铁盖等物品，又或者有什么特殊实验要求，请发邮件到相应区域预约。A201A214房间邮箱：，A215A223房间邮箱:，B区邮箱： ,C区邮箱：。E区邮箱：。2. 实验动物中心不提供水笔、记号笔，需自带（未开封使用过的）经工作人员消毒后使用。如果要代买，须登记品名和数量。八、 压差与风机1. 屏障区通过压差梯度来保持洁净度、而压差由空调送排风形成。2. 当发现饲养室、洁净走廊、污物走廊、缓冲室等风机不送风或停电时,应原地等待、并马上与工作人员电话联系，决不能开门离开饲养室等区域。3. 风机是否送风的判断方法：可以用手靠近房间墙角处的排风口，感觉是否有微微的风，如果有风，则表示风机已经正常。4. 不允许长时间开饲养间的前后门（如倚着门说话等）。九、 废物及小鼠尸体处理1. 用过的注射器和刀片应放置在洗涤间指定回收处，不能放在脏笼或垃圾桶内，以免意外刮伤工作人员。2. 换笼后应将脏笼带出饲养间至洗刷区，不能将污物留在饲养间或污物走廊上。当需要移出的物品较多时，可以像“蚂蚁搬家”的方式：先全部从饲养间后门移出到污物走廊，再移到缓冲间，最后移到洗刷区。3. 大小鼠必须自行处死，量多时可用CO2处死（注意关好气瓶阀门），放到冰柜编织袋里（垫料、纸张、注射器、刀片等勿倒入，需另外处理），放完后冰柜门一定盖好。4. 离开实验动物中心时，一定要在一楼大门值班室登记离开时间和带走的动物及物品种类、数量。从实验室带回的动物尸体及物品送回实验动物中心时，一定要在门卫电脑上注明送回时间和经办人，笼具等直接放在大厅门卫指定的地方，动物尸体不得进入实验动物中心大厅，由值班门卫安排处理。十、 动物订购1. 种源动物引进： 严格执行种源动物引进屏障环境管理流程的各项规定和措施。 从网站下载引种动物隔离饲养申请表，每个品系必须填写一份，提前5个工作日发送至，申请隔离观察笼位数。确定隔离观察笼位数后保留15个工作日，逾期动物未到，该申请表作废，必须重新申请。 至少提前24小时电话通知郑老师动物预计到达时间，以便验收。遇正常下班后、周末或节假日协商处理。2. 国内实验动物采购： 课题组负责人必须在实验动物中心网站中的