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文档简介

制作人：刘康吕胜,微生物PPT课题制作,1,DNA的变性和复性,2,DNA的变性和复性,一）DNA的变性二）DNA的复性三）核酸分子杂交,3,变性(denaturation)和复性(renaturation)是双链核酸分子的两个重要物理特性。是核酸研究中经常引用的术语。双链DNA、RNA双链区，DNA:RNA杂种双链(hybridduplex)以及其它异源双链核酸分子(heteroduplex)都具有此性质。,4,一)DNA的变性,指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。本质：氢键和疏水键断裂部分的或全部的可逆的或非可逆的不涉及到其一级结构的改变,5,变性DNA的理化及生物学性质,溶液粘度降低溶液旋光性发生改变,增色效应或高色效应,DNA的增色反应,6,破坏双螺旋稳定性的因素加热极端的pH甲醇乙醇尿素甲酰胺,7,热变性使DNA分子双链解开所需温度(meltingtemperature)很狭的温度范围内突发的跃变过程,熔解温度（Tm）,8,不同来源DNA间的Tm存在差别的原因,（A）DNA的均一性DNA分子中碱基组成的均一性待测样品DNA的组成是否均一,9,(B)DNA的(G+C)含量(G+C)含量越高，即G-C碱基对越多，Tm值越高。Tm与(G+C)含量(X)百分数的关系可用以下经验公式表示(DNA溶于0.2mol/LNaCl中)：X%(G+C)=2.44(Tm69.3),DNA的Tm值与G-C含量的关系,10,离子强度低，Tm值低，融点范围宽离子强度增高，Tm值增高，融点范围变窄DNA制剂不应保存在离子强度过低的溶液中，一般保存在1mol/NaCl溶液中较稳定。,（C）溶剂的性质,11,二)DNA的复性,指变性DNA在适当条件下，两条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象。是变性的一种逆转过程经缓慢冷却即可复性，又称为“退火”,12,热变性过程和两种冷却过程示意图,13,影响因素,a）温度和时间比Tm低25左右的温度是复性的最佳条件越远离此温度，复性速度就越慢,复性时温度下降必须缓慢降温时间太短及温差大不利于复性,14,b）DNA浓度复性速度与DNA浓度的平方成正比,15,c）DNA顺序的复杂性顺序越简单，配对越快。,DNA片段愈大，扩散速度愈低，
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