交泰丸对PCPA大鼠失眠模型镇静催眠的效果研究.doc

交泰丸对PCPA大鼠失眠模型镇静催眠的效果研究 廖小英： 广州市番禺区沙湾人民医院广东广州511483 周慧： 广州市番禺区市桥人民医院广东广州511490 全世建： 广东省中医药大学广东广州510405 交泰丸对PCPA大鼠失眠模型镇静催眠的效果研究 廖小英周慧全世建 SEDATIONANDHYPNOSISEFFECTOFJIAOTAIPILLSONRATINSOMNIAINPCPARATMODEL LIAOXiaoying,ZHOUHui,QUANShijian 【摘要】目的 探讨交泰丸镇静催眠的药效。方法 建立PCPA（对氯苯丙胺酸）大鼠失眠模型，将动物分组，分为模型组、交泰丸高、中、低剂量组及地西泮阳性对照，采用高效液相检测方法，观察交泰丸对失眠模型失眠状态（失眠状态观察什么？）及下丘脑中枢神经递质5HT及GABA的影响。结果 交泰丸滴丸高、中剂量及地西泮组与模型组相比，大鼠失眠状态及均中枢神经递质5HT均有显著性差异，但交泰丸高、中剂量组与模型组相比，中枢神经递质GABA无显著性差异。结论交泰丸滴丸具有镇静催眠药效，其作用机理可能与影响中枢神递经质5-HT有关，与中枢神经递质GABA关系不明显，本研究对进一步开发交泰丸具有重要意义。 【关键词】交泰丸高效液相检测方法药效学研究 【Abstract】Objective TodiscussthesedativeandhypnoticeffectofJiaotaiPillsoninsomniainPCPAratmodel.Methods ThePCPA(PCPAacid)ratsinsomniamodelwasestablished,andtheratsweredividedintothemodelgroup,high,middleandlowdosageofJiaotaiPillsgroup,anddiazepampositivecontrolgroup.ThehighperformanceliquiddetectivemethodwasadoptedtoobservetheeffectofJiaotaiPillsonratinsomniaandhypothalamusneurotransmitters5-HTandGABA.Results Comparedwiththemodelgroup,thereexistedsignificantdifferenceintheinsomniastateofratsandthecentralneurotransmitters5-HTinthehighandmiddledosagesofJiaotaiPillgroupanddiazepamgroup.However,intheparisonofthehighandmiddledosagesofJiaotaiPillgroupandthemodelgroup,therewasnosignificantdifferenceinGABAinthecentralnervoussystem.ConclusionJiaotaiPillshassedativeandhypnoticefficacy.Itsmechanismmayberelatedtotheeffectsofcentralneurotransmitter5-HT.ItsrelationshipwithGABAinthecentralnervoussystemisnotobvious.TheresearchhassignificantinfluenceonthefurtherdevelopmentofJiaotaiPills. 【Keywords】JiaotaiPill;high-performanceliquidchromatographymethodfordetection;pharmacodynamicstudy 【Authorsaddress】ShawanPeoplesHospital,PanyuDistrict,Guangzhou,Guangdong,511483,China doi:10.3969/j.issn.1671-332X.xx.07.013 交泰丸源自明韩懋韩氏医通，名见清王士雄四科简要方。以黄连、肉桂组方，治心肾不交型不寐。黄连大寒大苦，清泄亢盛之心火；肉桂辛甘，大热，引火归源，能助肾中阳气、益命门之火。两药相配，攻补兼施，寒热并用，交通心肾。该方临床疗效确切，目前在临床广泛应用于治疗失眠证及相关疾病。本研究为观察交泰丸镇静催眠的药效,采用PCPA大鼠失眠模型,观察交泰丸对其失眠状态及相关中枢神经递质的影响。 1材料和方法 1.1材料 SPF级SD大鼠60只，体质量180220g，雌雄各半，分笼饲养，购自广州中医药大学实验动物中心，合格证号：0086745，许可证号：SCXK（粤）xx-0002。交泰丸滴丸由广州中医药大学方剂教研室制作；地西泮（批号：H11020898）。DionexSummit高效液相色谱仪，Chromeleon色谱工作站，HPI049A电化学检测器，RC5C低温高速离心机，PHS一2C精密酸度计。 1.2模型制备 大鼠于每日上午经腹腔注射PCPA混悬液，每天1次，连续注射2d，对照组腹腔注射相同体积的生理盐水于第一次腹腔注射2630h后，大鼠出现昼夜节律消失，白天夜晚活动不停，而对照组昼夜节律正常，表明模型复制成功。 1.3动物分组与给药 大鼠在室内适应性喂养1周后，随机分为正常组、模型组、交泰丸滴丸高剂量组、中剂量组、低剂量、阳性药物（地西泮）对照组。正常对照组、模型组分别以生理盐水灌胃(0.4g/kg/d)，每天1次，交泰丸滴丸高、中、低组分别分给以不同浓度的交泰丸液：低剂量（0.45g/kg）、中剂量（0.9g/kg）、高剂量（1.8g/kg）、地西泮组（3mg/kg）给予地西泮液灌胃，每天一次，共3天。 1.6实验方法大鼠断头处死后迅速取出大脑组织。大脑组织加入0.04mol/L高氯酸2.4ml，超声匀浆，冰浴沉淀30min；410000g15min离心，取上清，以0.75倍体积加入2molNa2HPO4中和；3000g5min离心，取上清溶液低温保存。 1.4高效液相法色谱柱DevelosilC30-UG-5(150mm4.6mm，5m，日本NomuraChemicalCo.Ltd)；流动相：磷酸二氢钾溶液(25mmol/L，内含乙二胺四乙酸二钠0.5mmol/L，用磷酸调pH3.4)：乙腈=98.2(体积比)，用前经0.45l滤膜真空抽滤，流速1.5ml/min；玻璃碳工作电极，Ag/AgC1参比电极，检测电位0.6V；柱温30，自动进样器温度10。 1.5统计学方法采用SPSS17.0统计软件进行数据统计。定量资料用均数标准差（s）表示，各组间差异性比较采用单因素方差分析，p0.05为差异具有统计学意义。 2结果 2.1大鼠一般状态每天中午10:0012:00两个小时的时间段作为观察大鼠状态的时间。模型组完全处于失眠状态，说明失眠模型造模成功。交泰丸高、中剂量组、安定组蹲卧在小平台上，较平静，有眯眼动作，并保持相当长时间，表明大鼠进入失眠状态。 2.2下丘脑中枢神经递质r-氨基丁酸(GABA)、5-羟色胺(5-HT)测定结果 3讨论 5-HT合成抑制剂对氯苯丙氨酸(PCPA)可以通过消除脑内5-HT从而达到致失眠目的，大鼠通常白昼睡眠，夜间活动，用对氯苯丙氨酸(PCPA)注射大鼠腹腔，2830h后，大鼠昼夜节律消失，几乎达到完全睡眠结果。以上实验结果表明，与模型组相比，交泰丸滴丸高、中剂量组及地西泮组能显著增加模型大鼠的入睡率，催眠疗效确切。与模型组相比，交泰丸滴丸高、中剂量组及地西泮组均能提高大脑中枢神经递质5-HT的含量，说明交泰丸催眠的作用机制与对中枢神递质5-HT的作用有关。与模型组相比，交泰丸滴丸高、中剂量组对中枢神经递质GABA含量影响无显著差异，地西泮组则有显著差异，说明两者对GABA的作用机理有差异。 中医理论认为失眠多由于心火亢盛，扰动心神或心血亏虚，神失所养所致，临床以清心泻火，镇心安神或滋养心血，养心安神治法为主。现有的安神中药多以滋养心血，养心安神为主，其作用机理也以抑制性中枢神经递质GABA为主。交泰丸由黄连、肉桂两味中药组成，以黄连清心泻火安神为主，以肉桂温肾助阳，引火归源，交通心肾，与传统的安神中药有区别，其催眠作用与中枢神经递质GABA关系不显著，其机理有待进一步探讨。本究对进一步探明中药催眠作用机理有重要意义。 参考文献 1吴志涛，曹秋菊.交泰丸加减治疗失眠76例报道.时珍国医国药J，xx，12（7）646-647. 2张坤瑞，刘耀，高军.交秦丸治疗失眠证149例临床研究J.实用中医杂志，1994，10（4）：12-16. 3潘新彦.六味地黄丸合交泰丸加味治疗老年失眠症31例J.中国现代医生,xx,50(30):76-77. 4季旭明，姜静娴.交秦丸不同配伍比例镇静安神作用研究J.山东中医药大学学报，xx，27（3）：21