YC-T 166-2003 烟草和烟草制品 总蛋白质含量的测定.pdf

YC / T 1 6 6 -2 0 0 3P 1i舌 本标准是参照 I S O/ C D 1 5 6 7 7和美国公职分析化学家协会( A O A C 分析方法手册 ( 第十四版) 中3 . 1 4 8 - - 3 . 1 5 0制定的。 在参照I S O / C D 1 5 6 7 7 的同时， 考虑到国内 烟草行业对总氮含量的 测定方法， 尽量在可溶性氮的测定步骤上与 Y C / T 3 3 保持一致， 因此亦参考了AO A C 分析方法手册 。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会( T C 1 4 4 ) 归口。 本标准起草单位: 国家烟草质量监督检验中心。 本标准主要起草人: 王芳、 张艳革、 李萍、 杨进。YC / T 1 6 6 -2 0 0 3烟草 和烟 草 制品总蛋白质含量的测定范 围本标准规定了克达尔法测定烟草及烟草制品中蛋白质氮的方法。本标准适用于烟草和烟草制品。2规范性 引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日 期的引用文件， 其随后所有的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 5 6 0 6 . 1 卷烟抽样 Y C / T 5 烟草成批取样的一般原则 Y C / T 3 1 烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3原理 用乙酸沉淀烟草样品中的蛋白质氮， 然后在浓硫酸及催化剂作用下转化为硫酸钱。强碱蒸馏释放出氨， 用标准酸液接收。反滴定。4试荆 所有试剂均应为分析纯级， 水应为蒸馏水或至少同等纯度的水。4 . 1 锌粒。4 . 2 浓硫酸: d =1 . 8 4 g / mL ( 该试剂可引起严重烧伤) 。4 . 3 红色氧化汞。4 . 4 硫酸钾。4 . 5 氢氧化钠一 硫代硫酸钠溶液: 将 5 0 0 g氢氧化钠和 4 0 g硫代硫酸钠( N a i S 2 O a 5H,0)溶于水， 稀释至 1L4 . 6 乙酸， 质量分数为 。 . 5 %04 . 7 硫酸钱溶液， 0 . 1 mo l / L4 . 8 硫酸标准滴定溶液， c ( 0 . 5 H 2 S 0 , ) =0 . 1 m o l / L ,4 . 9 氢氧化钠标准滴定溶液, c ( N a OH) =0 . 1 mo l / L o4 . 1 0 甲基红指示剂， 0 . 1 %e5仪器设备分析天平， 精确至。 . 0 0 0 2 g ,抽滤装置， 直径1 2 0 m m布氏漏斗， 真空抽滤装置。蒸馏装置， 5 0 0 mL克氏烧瓶， 连接头， 4 -5 球冷凝管和3 0 0 mL锥形瓶。锥形瓶， 3 0 0 m L .克氏烧瓶， 5 0 0 ml 。515253: . :YC / T 1 6 6 -2 0 0 3移液管， 2 5 m l , .滴定管 ， 5 0 mL ( 0 . 1 ml _ 刻度 ) 。量筒， 2 5 m L, 1 0 0 mL , 2 5 0 mL .定量滤纸 ， 无 氮。5657585.96分析步骤6 . 1 抽 样6 . 1 . 1 烟叶 按 Y C / T 5 抽取烟叶作为实验室样品。6 . 1 . 2 卷烟 按G B / T 5 6 0 6 . 1 抽取卷烟 作为 实验室 样品。6 . 2 试样的制备 按Y C / T 3 1 制 备试样。6 . 3 测定次数 每个试样应平行测定两次。6 . 4 水分含f的测定 按Y C / T 3 1 测定试样的 水分 含量。6 . 5萃取 称取约 1 . 5 g ( 精确至 0 . 0 0 0 2 g ) 试料置于3 0 0 m L锥形瓶( 5 . 4 ) 内， 加人 7 5 mL乙酸溶液( 4 . 6 ) ， 加热保持沸腾 1 5 min 。迅速用定量滤纸( 5 . 9 ) 在真空抽滤装置( 5 . 2 ) 内进行抽滤， 并用乙酸溶液冲洗锥形瓶和沉淀物至滤液无色。然后转移滤纸和沉淀于克氏烧瓶( 5 . 5 ) 中。6 . 6消化 向克氏烧瓶中加人。 . 7 g红色氧化汞( 4 . 3 ) , 1 0 g硫酸钾( 4 . 4 ) 及 2 5 m L浓硫酸( 4 . 2 ) , 混合均匀。 将克氏烧瓶移人通风橱内， 斜置于定氮架上， 瓶颈与水平面成 4 5 0 -6 0 0 夹角。缓慢加热， 待泡沫停止， 溶液澄清后， 再继续煮沸 1 h 。冷却， 用约 5 0 mL -7 0 m L水冲洗瓶颈。6 . 7蒸馏 向克氏瓶中加人约2 0 0 mL水， 加锌粒( 4 . 1 ) 三颗， 沿瓶壁小心加人氢氧化钠一 硫代硫酸钠溶液( 4 . 5 )9 0 m l。 立即连接于蒸馏装置上， 用内有 2 5 mL硫酸标准滴定溶液( 4 . 8 ) 和 3 -4滴指示剂( 4 . 1 0 ) 的锥形瓶( 5 . 4 ) 作接收器。冷凝管末端应浸人酸液中。 蒸馏直到馏出液体积达 1 5 0 mL , 注:氢氧化钠一 硫代硫酸钠溶液应小心加人， 以避免温度迅速升高而失去氨。燕馏过程中三角瓶中液体应保持红色 否则， 应减少称样量重新消化蒸馏。 蒸馏结束， 移开锥形瓶， 以免倒吸， 用水冲洗冷凝管末端。6 . 8滴定 用氢氧化钠标准滴定溶液( 4 . 9 ) 滴定馏出液至指示剂颜色由红色变为无色即为终点。69测试6 . 9 . 1 空白试荆测试 用等量的蔗糖替代样品测试， 重复 6 . 6 , 6 . 7和6 . 8 , 该滴定的终点应是有效的零点， 并对滴定( 6 . 8 ) 进行校正。 如果误差较小， 对样品测试值加以修正。如果误差较大， 应查找哪一种试剂引人了氮或者设备的某位置消耗了氢氧化钠。纠正错误并重复测试。 注:假设任何不含氮的有机化合物， 带有含氮的或派生氮的试剂也可能被使用， 会引起同样的反应。 2YC / T 1 6 6 -2 0 0 36 . 9 . 2 仪器校验测试6 . 9 . 2 . 1 蒸馏装置的测试 加人 1 0 mL硫酸钱溶液( 4 . 7 ) 于蒸馏瓶中， 然后继续 6 . 7 和 6 . 8 操作。结果偏低， 是由于蒸馏不完全或仪器可能有渗漏。纠正错误并重复测试. 注: 在蒸馏仪器第一次使用和以后， 应定时执行这种校验测试.6 . 9 . 2 . 2 方法的测试 测定己知氮含量 0 . 5 g的有机氮化合物的混合物， 如色氨基酸、 赖氨酸、 丙氨酸、 亮氨酸等和0 . 5 g的无有机氮化合物( 蔗搪或葡萄糖) 进行6 . 6 , 6 . 7 和6 . 8 操作。 结果偏低， 应是6 . 9 . 2 . 1 的原因， 或由于消化期间产物的丢失， 消化不充分( 如加热温度不合适或催化剂质量太差) 。 注: 在实验室第一次采用这种方法时讲行该校聆7 结果 的计算与表 述蛋白质含t的计算方法样品的蛋白质含量 P以干燥样品的百分比表述， 由式( 1 ) 得出:n，。 ， 、 ( V , 一V o ) Xc ; 一V i X。 : X1 4、 ， ， _ _ n /f 今. LJ 入 一 - - - - - - - 下 代 ， 万 一石 戒 - 丁 了 二 下 花 丁 二 丈入 1 VV%0 . . . . . . . . . . . . . 二“ 气 土 少 刀j入 1 1 一v v ) 入1 VU U 式 中: 6 . 2 5 蛋白质中氮的转换系数; V a 空白滴定消耗硫酸标准溶液的体积， 单位为毫升( mL ) ; V ,硫酸标准溶液的体积， 单位为毫升( ML ) ; V 2 滴定耗用的氢氧化钠标准溶液的体积， 单位为毫升( mL ) ; 硫酸标准溶液浓度， 单位为摩尔每升( m o