人感染H7N9禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测ppt课件.ppt

人感染H7N9禽流感病毒 病原学特点及标本采集、实验室检测,1,目 录,人感染H7N9禽流感病毒病原学特点 人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略 人感染H7N9禽流感病例诊断程序 人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版） 病原学检测的解析,2,人感染H7N9禽流感病毒病原学特点,3,流感病毒株,H1N1,H2N2,H3N2,流感大流行造成的死亡人数,第一次世界大流行 20004000万 （第一次世界大战战亡人数1000万）,第二次世界大流行 200万,第三次世界大流行 70-100万,2009,1957,1968,1918,39 Years,11 Years,41 Years,流感大流行和流感病毒的变异,CNIC,甲型H1N1,第四次世界大流行2010年2月28日 ，至少 16455人,4,流感病毒,EM Image: from Linda Stannard Dept of Medical Microbiology University of Cape Town,Sketch map: from Paul Digard Dept Pathology University of Cambridge,NIC,5,6,神经氨酸酶,血凝素,RNA,M2 蛋白 (only on type A）),流感病毒表面蛋白,7,分类和命名,根据分类学分类流感病毒属正粘病毒科流感病毒属。 根据宿主分类为人流感病毒,禽流感病（AIV）,猪流感等 根据流感病毒核蛋白（NP）和基质蛋白（MS）抗原性的不同，将其分为A、B、C三个血清型,8,根据流感病毒血凝素HA和神经氨酸酶NA抗原性的差异，又可将其分为不同的亚型。目前，A型流感病毒有16种特异的HA和9种特异的NA。 人A型流感病毒：H1N1、H2N2、H3N2 人禽流感病毒： H1N1、 H5N1、 H9N2、 H7N2、 H7N7 、 H7N3 、 H7N9、 H9N2 、 H10N7 禽流感病毒： H5N1 、 H5N2 、 H5N8、 H5N9、 H7N3 、 H7N4 、 H7N7 、 H7N9 猪流感病毒： H1N1、H1N2 、H3N2,9,10,11,12,病例1,病例2,病例3,13,HPAI H7N7 、 H7N3、 H7N1 LPAI H7Nx、H7N2、H7N3、H7N1、H7N9,HPAI H7N7、 H7N3 、 H7N4,HPAI H7N3（Pakistan）,HPAI H7N3 LPAI H7N9,HPAI H7N3 LPAI H7N9,禽中暴发的H7 2006年前暴发的均为HPAI H7 欧洲：意大利、英国、德国、比利时、荷兰、丹麦、挪威、 捷克、西班牙、瑞典,LPAI H7N8、H7N9（Korea）,LPAI H7N9,14,近年来人感染禽流感病毒病例,CDC. Avian Influenza A Virus Infections of Humans. /flu/avian/gen-info/avian-flu-humans.htm.,血清学证据： 人感染H4, H5, H6, H7,H9,H10, H11 AIVs.,15,H7感染人（100人） 美国、英国、意大利、荷兰、加拿大,HPAI,LPAI,1959,1/USA H7N7,1977,1/USA H7N7,1979-1980,4/USA H7N7,1996,1/England H7N7,2002,1/ USA H7N2,2003,1/ USA H7N2,7/ Italy H7N3,89/ Netherlands H7N7 1 died,2004,1/ Canada H7N3,1/ Canada H7N3,2006,1/ Norfolk H7N3,2007,4/ Wales H7N2,2/ Mexico H7N3,16,H7N9病毒,共25株 均为LPAI 无感染人病例,亚洲：7株 均来自野禽 5株韩国 2株蒙古,17,中国地区H7 AIV,A/Baers pochard/HuNan/414/2010(H7N1) A/chicken/Hebei/1/2002(H7N2) A/duck/Guangdong/1/1996(H7N3) A/duck/Hubei/126/1985(H7N8) A/duck/Jiangxi/1742/03(H7N7) A/duck/Jiangxi/1760/03(H7N7) A/duck/Jiangxi/1786/03(H7N7) A/duck/Jiangxi/1814/03(H7N7) A/duck/Nanchang/1904/1992(H7N1) A/duck/Nanchang/1944/92(H7N1) A/duck/Zhejiang/10/2011(H7N3) A/duck/Zhejiang/12/2011(H7N3) A/duck/Zhejiang/2/2011(H7N3) A/magpie-robin/China/28710/93(H7),亚型：H7N1, H7N2, H7N3, H7N7, H7N8 野禽居多 LPAI,18,核酸检测,19,从3个病例中分离到3株病毒,A/Shanghai/1/2013(H7N9) A/Shanghai/2/2013(H7N9) A/Anhui/1/2013(H7N9),病毒分离,20,三株H7N9病毒为同一基因类型,6个内部片段来源于H9N2,序列测定,21,序列特点,耐药性分析 对烷胺类药物是耐药的，即M2蛋白25-42位氨基酸发生S31N突变。 HA连接肽分析 HA蛋白339位连接肽由单个（PKGRGLFG）碱性氨基酸组成，根据既往研究，具有这种序列特点的病毒对禽类呈低致病性。 受体结合位点及其它重要位点分析 Shanghai/1/2013的HA蛋白 226-228位氨基酸属于禽源受体结合位点（为QSG）。Shanghai/2/2013和Anhui/1/2013的HA蛋白 226-228位氨基酸受体结合位点（为LSG） PB2蛋白627位氨基酸为K，提示致病性增强。 NS1蛋白92位氨基酸为D，与禽流感病毒一致，而与人流感病毒不同。,22,一、标本采集、转送和检测,（一）病例标本采集 采集人：医疗机构应当及时采集病例的相关临床标本。 标本类型：包括病人的上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）和血清标本等。 如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本。,23,人感染H7N9禽流感病毒标本采集 及实验室检测策略,24,采集时间：应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4 周的恢复期血清。 标本分装：为避免标本反复冻融，保证标本检测质量。 采集的呼吸道标本每份分为3 管，每管不少于1ml 血清标本每份分为2 管，每管不少于0.5ml。 并填写不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表,25,（二）密切接触者标本采集,采集人：疾病预防控制机构负责标本采集和实验室检测工作。 标本类型：应当采集病例的所有密切接触者的双份血清标本（开始实施医学观察时和间隔2-4周后）；当密切接触者出现急性呼吸道症状时还要采集咽拭子，送当地国家级流感网络实验室进行检测。,26,（二）标本转送和检测,1.H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照人间传染的病原微生物名录中高致病性禽流感病毒进行管理。 病例的临床标本采集后，县级疾病预防控制机构和病例收治的医疗机构要密切配合，按照生物安全的相关规定进行包装，在24 小时内送到当地流感监测网络实验室进行检测。,27,2. 当地流感监测网络实验室收到标本后24 小时内，立即对呼吸道标本开展甲、乙型流感病毒通用引物H5、H7亚型的检测。 若当地流感监测网络实验室检测结果为H5、H7核酸检测阳性时，应当于24小时内将其中2管呼吸道相关原始标本分别送省级疾控中心流感网络实验室和国家流感中心。 具备相应生物安全条件的网络实验室可开展病毒分离，并将分离的毒株按要求及时送国家流感中心。,28,3. 若当地流感监测网络实验室检测结果为甲型流感和乙型流感通用引物均阴性时，应当立即将1管原始呼吸道标本送省级疾控中心。省级疾控中心收到标本后，应当立即对其中1管进行SARS 、新型冠状病毒等相关病原体的检测，另1管送国家流感中心。 4. 当地流感监测网络实验室将采集的血清标本分别送省级疾控中心和国家流感中心开展病原体的抗体检测。,29,二、标本检测结果反馈和报告,开展实验室检测的疾控中心要及时将标本信息和检测结果信息报送国家流感中心，并在24 小时内由网络实验室所在疾控中心逐级反馈到病例所在医院。 当标本为SARS、禽流感（H5、H7）、新型冠状病毒或其他新型病原体检测阳性时，检测结果应当及时报告给同级卫生行政部门。,30,人感染H7N9禽流感病例诊断程序,31,一、诊断程序,各省首例人感染H7N9禽流感病例由发生地省级卫生行政部门组织省级临床专家组结合病例的流行病学史、临床表现、省级疾病预防控制中心检测结果及中国疾病预防控制中心实验室复核检测结果等，按照诊疗方案进行诊断，由省级卫生行政部门报告国家卫生和计划生育委员会。 各省后续病例的诊断仍按上述程序进行，但实验室诊断依据可不需要中国疾病预防控制中心实验室的复核检测结果。,32,二、实验室检测程序,人感染H7N9禽流感疑似病例先由各省（区、市）的国家流感监测网络实验室和具备PCR实验室检测条件的医疗机构进行标本的检测。 不具备检测条件的地区，在确保生物安全的情况下，按照规定将标本送邻近具备相应条件和资格认证的国家流感监测网络实验室和具备PCR实验室检测条件的医疗机构进行检测。,33,各省（区、市）首例人感染H7N9禽流感疑似病例的原始标本应在确保生物安全的情况下，送中国疾病预防控制中心进行复检确认。 后续发生的病例，各地应当将其原始标本和病毒分离物，在确保生物安全的情况下，按照规定及时送中国疾病预防控制中心。 各省（区、市）卫生行政部门应当将具备PCR实验室检测条件的医疗机构纳入人感染H7N9禽流感检测机构，开展标本检测工作，并作为诊断的实验室依据。,34,人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版） 病原学检测的解析,35,病原学及相关检测,抗病毒治疗之前必须采集呼吸道标本送检（如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上皮细胞）。 有病原学检测条件的医疗机构应尽快检测，无病原学检测条件的医疗机构应留取标本送指定机构检测。 （1）甲型流感病毒抗原筛查。呼吸道标本甲型流感病毒抗原快速检测阳性。但仅可作为初筛实验。 （2）核酸检测。对患者呼吸道标本采用real time PCR（或RT-PCR）检测H7N9禽流感病毒核酸。 （3）病毒分离。从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒。 （4）动态检测双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以上升高。,36,人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版） 病原学检测的解释,抗病毒治疗之前必