DNA的粗提取与鉴定.ppt

第 1 部分,专 题 5,课题 1,理解教材新知,把握热点考向,应用创新演练,知识点一,知识点二,考向一,考向二,1.DNA在0.14 mol/L NaCl溶液中溶解度最低。 2DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋 白质溶于酒精，可利用酒精将DNA和蛋 白质分开。 3DNA对蛋白酶、高温和洗涤剂有耐受性。 4在加热条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。 5哺乳动物成熟的红细胞不含细胞核，不能作为提取DNA的实 验材料。若选取肝脏细胞或植物细胞，则必须充分研磨。 6实验中加入柠檬酸钠的作用：作为抗凝剂，防止血液凝固。,自读教材夯基础 1原理 (1)DNA和蛋白质等其他成分在 溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的 就能使DNA充分溶解，而使 沉淀，或者相反，以达到分离目的。 (2)DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，这样可将DNA和蛋白质进一步分离。,不同浓度的NaCl,盐浓度,杂质,(3)DNA的鉴定：DNA 。,二苯胺,蓝色,元贝驾考 元贝驾考2016科目一 科目四 金手指考试 金手指驾驶员考试,2DNA的耐受性 (1)蛋白酶不能水解 ，能水解 。 (2)DNA在 变性，大多数蛋白质在 就可以变性。 (3)洗涤剂不能分解 ，但可以瓦解 。,DNA,蛋白质,80 以上,60 ,80 ,DNA,细胞膜,如何将DNA进一步提纯？提纯后是否能得到纯净的DNA? 提示：利用DNA不溶于冷酒精，而蛋白质溶于冷酒精的原理进一步提纯DNA。提纯后的DNA中仍含有一定量杂质。,跟随名师解疑难,DNA的溶解度,自读教材夯基础,DNA含量相对较高,蒸馏水,洗涤剂,NaCl溶液,嫩肉粉,60 75 ,木瓜蛋白,1可否选用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，为什么？ 提示：不可以，因为哺乳动物成熟红细胞无细胞核。 2提纯时，为什么要选用体积分数为95%的冷酒精？ 提示：冷酒精提纯效果更好。,跟随名师解疑难 1实验材料的选取 (1)鸡血适宜作为实验材料的两个原因：一是因为鸡血细胞核中的DNA含量丰富，材料易得；二是因为鸡血细胞易吸水涨破。 (2)材料的处理(以鸡血为例)：,2.实验过程中的几点注意事项 (1)两次使用蒸馏水的作用：第一次用蒸馏水是使鸡血细胞吸水涨破，提取核DNA；第二次用蒸馏水稀释NaCl溶液，使DNA析出。 (2)实验中三次过滤操作的比较：,(3)用玻璃棒搅拌时，动作要缓慢且沿同一方向进行，目的是防止DNA被破坏。 (4)实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，可减少提取过程中DNA的损失。 3结果分析及评价 (1)现象是否明显及可能原因： 若实验结果不明显，可能的原因是： 材料中核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。 加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。,二苯胺最好现配现用，否则二苯胺变成浅蓝色，影响鉴定效果。 析出含DNA的黏稠物时，蒸馏水要沿烧杯内壁慢慢地加入，不能一次快速加入，否则会影响实验结果。 实验中有多次搅拌，但是其目的及操作方法是不同的，要注意区分，否则也会影响结果。 (2)分析DNA中的杂质： 本实验提取的DNA粗制品中有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。,特别提醒 若选取肝脏细胞或植物细胞，则必须充分研磨。 柠檬酸钠的作用是作为抗凝剂，防止血液凝固。 吸去上清液的原因是DNA主要存在于细胞核中。,例1 关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验，该实验依据的实验原理不是 ( ) ADNA在NaCl溶液中的溶解度，随着NaCl溶液浓度的不同而不同 B利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA CDNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂 D在沸水中DNA遇二苯胺会出现蓝色反应,例2 (2010江苏高考)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动，具体步骤如下： 材料处理： 称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10 g。剪碎后分成两组，一组置于20 、另一组置于20 条件下保存24 h。 DNA粗提取： 第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入15 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。,第二步：先向6只小烧杯中分别注入10 mL滤液，再加入20 mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。 第三步：取6支试管，分别加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮状物。 DNA检测： 在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂，混合均匀后，置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表：,注：“”越多表示蓝色越深。 分析上述实验过程，回答下列问题： (1)该探究性实验的课题名称是_。 (2)第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少_。,(3)根据实验结果，得出结论并分析。 结论1：与20 相比，相同实验材料在20 条件下保存，DNA的提取量较多。 结论2：_。 针对结论1，请提出合理的解释： 。 (4)氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度，依据氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是：_，然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。,解析 如果DNA断裂，就不容易被提取出来；温度主要是通过影响酶的活性来影响生理过程。粗提取得到的DNA中含有少量的蛋白质，可以通过氯仿的特殊功能来去除蛋白质，提高DNA纯度。 答案 (1)探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响 (2)DNA断裂 (3)等质量的不同实验材料，在相同的保存温度下，从蒜黄提取的DNA量最多 低温抑制了相关酶的活性，DNA降解速度慢 (4)将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合，静置