各类成分分析生物碱.ppt

第五章 各类成分分析,中药分析教研室 王术玲 Tel: 35622505,生物碱* 皂苷* 黄酮* 蒽醌 挥发油,第五章 各类成分分析,一、概述 二、理化性质 *三、供试品溶液制备（提取、净化） *四、鉴别：理化鉴别、TLC *五、含量测定：总成分、单体成分,第五章 各类成分分析,春花秋月何时了， 往事知多少！ 小楼昨夜又东风， 故国不堪回首月明中。 雕栏玉砌应犹在， 只是朱颜改。 问君能有几多愁？ 恰似一江春水向东流！,虞 美 人 李煜,马钱子,腰直不起，头足相就，状如牵机而死强直性惊厥,1988年奥运会 ，卡尔刘易斯 ，麻黄碱 1992年奥运会，巫丹，士的宁 1992年奥运会 ，玛丽乔费尔南德斯 ，伪麻黄碱 1994年世界杯，马拉多纳，麻黄碱 2000年奥运会 ，拉杜坎，麻黄碱,生物碱与兴奋剂,生物碱与毒品,伪麻黄碱,麻黄碱,冰毒,一、概 述,黄连：小檗碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱,苦参：苦参碱、氧化苦化碱,益母草、延胡索、黄柏、贝母,麻黄：麻黄碱、伪麻黄碱,马钱子：马钱子碱、士的宁,第一节 生物碱,麻黄碱,小檗碱,1、结构：C、H、O、N，碱性,二、理化性质,2、溶解性 亲脂性：大多数，氯仿中溶解度最大 亲水性：少，季铵型,二、理化性质,一般都易溶于酸水,3、沉淀反应： 1）碘化铋钾（BiI3KI） 2）雷氏盐 NH4Cr(NH3)2(SCN)4 3）苦味酸,干扰：蛋白质、多肽、鞣质,沉淀特点：酸性水溶液（苦味酸在中性）中 沉淀常易溶于有机溶剂 沉淀有颜色,二、理化性质,4、光谱特征,小檗碱：225 、 270 、 331nm 366nm下 有荧光,麻黄碱：210nm,二、理化性质,1、有机溶剂提取法： 碱化+ CHCl3,士的宁的含量测定： P127 碱化+ CHCl3提取酸水 提碱化CHCl3萃取,三、供试品溶液的制备,2、氧化铝柱色谱法： 益母草（药典P203）,水苏碱的薄层鉴别： 取本品3g 乙醇回流提取 上活性炭-氧化铝柱 乙醇洗脱收集,三、供试品溶液的制备,3、离子交换树脂法： 益母草流浸膏（药典P280）,水苏碱的含量测定： 取本品5g 盐酸调pH12 加置强酸型阳离子树脂柱 水洗脱（弃去） 氨水洗脱 收集,三、供试品溶液的制备,（一）理化鉴别 马钱子散：马钱子、地龙,取马钱子散加浓氨试液三氯甲烷浸泡滤过滤液蒸干加稀盐酸加碘化铋钾试液黄棕色沉淀,四、定性鉴别,（二）薄层鉴别 1、展开系统：乙二胺、氨水 P122,正丁醇-盐酸-水（4:1:0.5）生物碱盐,四、定性鉴别,2、对薄层板改性：12%NaOH溶液,例：黄连中生物碱 苯-EtOAc-MeOH-异丙醇-水 （6:3:1.5:1.5:0.3） 置氨水饱和的展开槽,2）显色剂：,例：苦参：氧化苦参碱（药典P141）,3、检视： 1）365nm下看荧光 例：黄连：小檗碱,改良碘化铋钾 稀碘化铋钾+亚硝酸钠乙醇液,四、定性鉴别,（一）总生物碱,1、酸碱滴定法：返滴法,2、分光光度法,直接测定法：小檗碱 比色法：苦味酸、雷氏盐 P125,排除干扰：化学分离、柱色谱,五、含量测定,例：雷氏盐比色法,B + NH4Cr(NH3)2(SCN)4 = BHCr(NH3)2(SCN)4 ,1、在酸性介质中定量反应 2、反应物有颜色，其吸光度取决于硫氰酸铬铵部分 3、反应物不溶于水，易溶于丙酮,例：雷氏盐比色法 P71,益母草口服液中生物碱的含量测定,测定方法： 1、沉淀过滤，溶于丙酮，直接测定A 2、滤除沉淀后，测定残存的过量雷氏盐，间接计算,又如：产妇康颗粒,1、HPLC：,离子抑制色谱：二乙胺、三乙胺 例：浙贝母 药典P205,离子对色谱：SDS、辛烷基磺酸钠 常加入缓冲盐 例： HPLC测小檗碱,（二）单体成分,五、含量测定,乙腈-水（50：50） 每100ml含0.34g KH2PO4和0.17g SDS,牛黄千金散中盐酸小檗碱,乙腈-水-二乙胺（70：30：0.03）,浙贝母中贝母甲素和贝母乙素,小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱,乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺）（3:97）,流动相缓冲盐的pH值对药物的保留行为有影响，甚至会显著改变某些碱性药物的保留行为如图所示。,流动相pH值对保留时间的影响 色谱柱：NucleodurC18 15cm4mm 流动相：乙腈-10mM 碳酸氢铵50：50, A：pH=3.0 B：pH=10.0 检测波长：240nm,pH=3.0,pH=10.0,流动相pH值对保留时间的影响 色谱柱：NucleodurC18 15cm4mm 流动相：梯度洗脱程序 A 乙腈-20mM 磷酸氢二铵, pH=2.5 B 乙腈-20mM磷酸氢二铵, pH=10.0 检测波长：254nm,pH=2.5,pH=10.0,流动相组成对药物保留行为的影响 组成：生物碱1、2、3、4 检测波长：280nm 色谱柱：Kromasil 15cm4.6mm 流动相：A PiCB6流动相-PICB7流动相1：1 B PiCB6流动相-PICB7流动相4：6 PICB6流动相：己烷磺酸钠1.88g甲醇260ml置1000ml量瓶中，用水稀释至刻度 PICB7流动相：庚烷磺酸钠0.28g 甲醇260ml置1000ml量瓶中，用水稀释至刻度,流动相组成对药物保留行为的影响 色谱柱：Kromasil 15cm4.6mm 检测波长：280nm PICB6：己烷磺酸钠1.88g 甲醇260ml置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀释至刻度。 PICB7：庚烷磺酸钠0.28g 甲醇260ml置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀释至刻度。,C PiCB6流动相-PICB7流动相1：1,D PiCB6流动相-PICB7流动相9：1,封尾技术：消除或屏蔽残留Si-OH,技术1：小分子键合,技术2：较大空间位阻的异丙基或异丁基（R基团）,2、TLCS：,五、含量测定,益母草：药典P204,黄连：药典P213 荧光扫描, 激发波长=366nm,显色，=510nm测吸光度,士的宁：药典P319 荧光淬灭扫描, s=254nm,黄 连,3、高效毛细管电泳法（HPCE）,原理：电场下溶液中不同荷电物质迁移速度不同,五、含量测定,原因：管内壁硅羟基解离释放H+使溶液带正电,五、含量测定,迁移速