Survivin基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达.doc

Survivin 基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达 作者：王俊艳， 颜华， 王世忠， 李金茹， 刘皓【关键词】 Survivin基因；,增殖性玻璃体视网膜病变；,增殖膜摘要：目的：观察Survivin 基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达。方法：取已确诊为PVR并行玻璃体切除术患者的PVR增殖膜，标本于术后立即由贮液瓶取至无菌器皿冰温运回，取出增殖膜放入多聚甲醛固定，并常规乙醇脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋、制备5m连续切片，将切片行常规H-E染色，采用Survivin多克隆抗体（抗人及抗兔）行免疫组织化学实验，检测Survivin基因在玻璃体和增殖膜中的表达。结果：Survivin基因在PVR增殖膜中呈阳性表达，且随着PVR临床分级的增高，免疫组织化学染色阳性细胞百分率逐渐升高。结论：认为PVR的形成是由于Survivin基因的异常表达促进了细胞增殖，阐明PVR的形成机制。关键词： Survivin基因； 增殖性玻璃体视网膜病变； 增殖膜Expression of Survivin Gene in Periretinal Membranes of Proliferative VitreoretinopathyAbstract： Objective: To study the expression of survivin gene in periretinal membrane of prliferative vitreoretinopathy(PVR). Method: 14 periretinal membranes obtained from 14 cases of PVR with retinal detachment undergoing vitretomy were used to examine the expression of surviving gene by SABC method. Result: Survivin gene was expressed in 8 of the 14 cases. The reactions of surviving were observed in the cytoplasm and extracellular matrix. Conclusion: The abnormal expression of surviving gene inhibits apoptosis and it may participate in the progression of proliferative vitreoretinopathy.Key words： Survivin； Proliferative； Vitreoretinopathy 增殖性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy, PVR）是指在裂孔源性视网膜脱离或视网膜复位手术后，由于视网膜色素上皮细胞及神经胶质细胞的增生和收缩，又造成牵拉性视网膜脱离的病变。如不及时治疗，终将导致全视网膜脱离而失明。经过大量的实验和临床研究，已认为PVR属于眼内发生的过度损伤修复反应，这是一个以时相为特征的程序化过程，即经过了炎症期、增生期和瘢痕期，其形成的确切机制尚未完全明了。PVR的病理特征是细胞过度增生1。细胞增生与死亡失衡可能是PVR形成的原因。Survivin是一个新发现的凋亡蛋白抑制剂家族成员，广泛表达于人的胚胎组织和各种肿瘤组织，但仅在少数正常成人组织中表达2,3。Survivin 具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子4。1 资料和方法1.1 一般资料：2004年7月至2005年6月确诊为孔源性视网膜脱离合并PVR并行玻璃体手术的病人14例。排除外伤性、糖尿病等引起的继发性视网膜脱离和系统性疾病。从玻璃体手术中取视网膜表面增殖膜，标本于术后立即由贮液瓶取至无菌器皿冰温运回，取出增殖膜放入多聚甲醛固定，并常规乙醇脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋、制备5m连续切片，将切片行常规H-E染色，采用Survivin多克隆抗体，行免疫组织化学实验，检测Survivin基因在玻璃体和增殖膜中的表达。 1.2 方法：石蜡切片常规脱蜡至水，3%H2O237，30min，以阻断内源性过氧化物酶活性，正常兔血清湿盒内37封闭20min；滴加羊抗人survivin多克隆抗体，湿盒内4过夜，漂洗；滴加生物素化兔抗山羊IgG，湿盒内37，20min，漂洗；滴加SABC复合物，湿盒内37，20min，漂洗；DAB显色，显微镜下观察，水洗中止反应；脱水，透明，封片。将已知的乳腺癌切片作为阳性对照，用磷酸缓冲液代替一抗作为隐性对照，以组织切片背景清晰、胞质或胞核染为淡黄至黄棕色者为阳性细胞标志。将阳性细胞按显色强度分为3级：表达弱阳性，即显色强度为淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色；表达强阳性，即多数细胞呈黄至棕黄色染色；表达中度阳性，即显色强度介于弱阳性与强阳性之间。凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。2 结果14例PVR增殖膜标本中，8例阳性，其中2例强阳性，4例中等阳性，2例弱阳性。在PVR增殖膜的细胞中，视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium, RPE）占较大部分，胞体变得长园，形态不规则。另外在增生膜中还见一些上皮细胞样和成纤维细胞样细胞。阳性染色位于膜上大部分细胞的胞质内，为棕黄色。阴性对照组中未见阳性染色。3 讨论 PVR是一种细胞增生过度而凋亡过低的疾病。细胞凋亡是多细胞有机体为控制机体发育，维护内环境稳定，由基因控制的细胞主动死亡。Survivin是一个近年来发现的凋亡蛋白抑制剂（inhibitor of apoptotic protein，IAP）家族成员，广泛表达于人的胚胎组织和各种肿瘤组织，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子，几乎在所有被研究的肿瘤中均呈阳性表达。我们认为PVR虽然不同于肿瘤，但它在眼内局部发病情况与肿瘤的发病机理十分相似，均表现为细胞的过度增生。细胞的过度增生意味着细胞凋亡的减少，基于此，本实验从抑制细胞凋亡的Survivin基因着手，采用免疫组化技术，检测Survivin基因在PVR患者增殖膜中的表达，探讨其在PVR发病机制中的作用。为进一步通过反义核酸技术封闭Survivin基因，抑制玻璃体和视网膜细胞增生，在基因水平治疗PVR提供理论依据。参考文献：1 Esser P, Heimann K, Abts H, et al. CD95(Fas/Apo-1) antibody-mediated apoptosis of human retinal pigment epithelial cells. Biochem Biophys Res Commun, 1995,213:1026-1034.2 Ambrosini G, Adida C, Altieri DC. A novel anti-apoptosis gene, surviving, expressed in cancer and lymphoma. Nat Med, 1997,3(8): 917-921.3 Altieri DC, Marchisio PC, Machisio C. Survivin apoptos