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p63在脂溢性角化病中的表达及意义 作者：马英智 孙梅 张丽红 李玉林【摘要】 目的 研究p63蛋白在脂溢性角化病中的表达，探讨其与脂溢性角化病发病的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测56例脂溢性角化病和5例正常皮肤组织中p63的表达情况，并进行统计学分析。结果 脂溢性角化病中p63蛋白表达的阳性率为91.07%，与正常皮肤组织中的表达有显著性差异(P<0.01)。结论 p63蛋白参与了脂溢性角化病的发病过程，对研究脂溢性角化病的发病机制有一定意义。 【关键词】 p63蛋白;脂溢性角化病;免疫组织化学【Abstract】 Objective To study the expression of p63 protein in seborrheic keratosis (SK) and to investigate the correlation between p63 and SK.Methods 56 cases of SK tissues and 6 cases of normal skin tissues were detected for the expression of p63 protein by immunohistochemistry.Results The positive rate of p63 91.07 %(51/56) in SK tissues was significantly higher than that in the normal tissues20.00%(1/5) (P<0.01). Conclusions The expression of p63 protein is assoclated with SK.【Key words】 p63 protein;Seborrheic keratosis;Immunohistochemistry脂溢性角化病(SK)又名老年疣、基底细胞乳头瘤，是一种良性表皮增生性肿瘤，其病因不清。p63 基因是p53 基因家族的新成员，在肿瘤发生、细胞凋亡和组织发育的研究中备受关注。本文采用免疫组织化学SP法检测56例SK患者p63蛋白的表达情况，为探讨SK的发病机制提供理论依据。1 材料与方法1.1 材料 56例SK标本均来自2006至2007年吉林大学第二医院皮肤科，经临床表现及HE染色确诊SK，其中男性19例，女性37例;年龄2872岁。5例对照组标本取自正常皮肤组织，其中男性3例，女性2例;年龄2267岁。标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4 m。1.2 试剂 小鼠抗人p63 单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，多聚赖氨酸、SP试剂盒、AEC显色液及水溶性封片剂均购自福州迈新生物技术开发公司。1.3 方法 采用SP法，石蜡切片经脱蜡、水化后，PBS冲洗，柠檬酸缓冲液抗原修复20 min，冷却至室温冲洗，过氧化酶(试剂A)阻断内源性过氧化物酶，应用非免疫性动物血清(试剂B)封闭非特异性抗原，室温孵育30 min，滴加小鼠抗人p63一抗(工作液浓度为1100)，4 过夜，AEC显色，显微镜下观察控制显色时间，不超过15 min，苏木精复染，水溶性封片剂封片，中性树脂封固。以PBS代替一抗作为阴性对照。1.4 结果判断 显微镜下观察，p63蛋白定位于细胞核，细胞核中出现清晰红色颗粒为阳性。随机选择4个高倍视野(400)，从基底层向上计数200个细胞，计算阳性细胞率，由于正常皮肤组织的基底层和棘层有少量表达，因此将阳性细胞率>10%认定为阳性。1.5 统计学处理 采用秩和检验进行统计学分析。2 结 果p63蛋白定位于胞核，在SK组织中主要表达于基底层、棘层和颗粒层，阳性表达的细胞数较多;正常组织中p63蛋白仅表达于基底层和棘层，而且阳性细胞数较少，SK和正常皮肤组织的p63阳性表达率分别为91.07%(51/56)和20.00%(1/5)，组间比较差异显著(P<0.01)。3 讨 论一直以来认为SK与年龄有关，但近年来年轻人发病的报道有上升趋势。目前认为SK增生或凋亡异常，有研究者用TUNEL法证实SK皮损中的凋亡细胞数量增加1，表皮生长因子及其受体的表达高于正常2，说明其增殖和凋亡处于失平衡状态。作为p53家族新成员，p63基因的结构与p53基因具有较大的同源性3，p63蛋白能激活p53的相关靶基因，抑制增殖、诱导凋亡，是一种肿瘤抑制基因;p63编码的活性产物还对调节胚胎形成时外胚层的分化、各种上皮组织的正常发生与分化及维持细胞形态具有重要作用，其缺乏会引起一系列的发育畸形。因此，p63基因在肿瘤发生、细胞凋亡和组织发育的研究中备受关注。在正常皮肤组织中p63分布于表皮的基底层和棘层、外毛根鞘、毛囊的毛基质、皮脂腺和汗腺的外层细胞中4。本实验研究发现在的病损中p63蛋白不仅在表皮基底层和棘层高表达，而且在颗粒层中也有表达，阳性率明显高于正常皮肤组织。提示SK作为一种良性皮肤肿瘤，p63蛋白可能与其发生发展有关，研究p63基因可能对其发病机制具有一定的意义。p63蛋白拥有多种异构体，各种异构体蛋白在细胞周期和肿瘤发生中的作用及其与p53基因和其他相关分子的相互作用有待于进一步的深入研究。目前p63与SK的关系更是处于起步阶段，有待于进一步的深入研究。【参考文献】 1 Pesce C，Scalora S.Apoptosis in the area of squamous differentiation irritated seborrheic keratosisJ.J Cutan Pathol，2000;27:1211.2 李 澄,周 红，樊小妹，等.EGF、EGFr在脂溢性角化病组织中的表达J.临床皮肤科杂志，2001;30:2256.3 Yang A，Kaghad M，Wang Y,et al.p63，a p53 homolog at 3q2729，encodes multiple products with transactivating，deathinducing，and dominantnegative activitiesJ.Mol Cell，1998;2(3):30516.4 TsujitaKyutoku M，Ki