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Jab1在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义【摘要】 探讨Jab1在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达及其与LSCC临床病理和预后的关系。方法: 采用免疫组化SP法检测23例正常喉黏膜(NLT)和72例LSCC组织中Jab1的表达。结果: 在54.17%的LSCC中Jab1呈现过表达，并且与临床分期和淋巴结转移呈显著正相关，与患者的总生存率呈负相关(P<0.05)。结论: Jab1可能通过调节p27kip1蛋白的降解而参与LSCC的发生、发展, Jab1可以作为LSCC的一个预后指标。 【关键词】 喉肿瘤 癌 鳞状细胞 免疫组织化学 Jab1 AExpression of Jab1 in laryngeal squamous cell carcinoma ABSTRACT Objective: To study the expression of Jab1(cJun activation domainbinding protein 1) in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC) and its correlation with clinicopathologic variables and prognosis. Methods: Expression of Jab1 protein was determined by SP immunohistochemistry in 23 cases of normal laryngeal tissues and 72 cases of LSCC. Results: Jab1 overexpression was produced in 54.17% of LSCC and was significantly positively associated with clinicopathologic variables and lymph node metastasis. Survival analysis revealed that Jab1 overexpression was significantly negatively associated with the overall survival (P<0.05). Conclusions: Jab1 protein may contribute to the development and progression of LSCC by facilitating the degradation of p27kip1 and represents a novel prognostic indicator for LSCC. KEY WORDS Laryngeal neoplasms； Carcinoma， squamous cells； Immunohistochemistry； Jab1 1996年，Claret等1用酵母双杂交系统从人淋巴细胞cDNA文库中筛选到一种蛋白，因这种蛋白可与cJun激活区结合，故命名为Jab1(cJun activation domainbinding protein 1)。随后，在拟南芥中发现COP9信号复合物(COP9 signalosome,CSN)的一个亚单位是Jab1的同源体2，命名为COP9信号复合物第5亚单位(COP9 signalosome subunit 5, CSN5)3。Jab1能特异性地与p27kip1发生相互作用，使p27kip1由胞核穿梭移动到胞浆，通过泛素-蛋白酶体系统加速p27kip1的降解而降低细胞内p27kip1的含量4,5。Jab1在人类肿瘤中表达的研究最初是在卵巢癌6中。随后，Jab1的表达在乳腺癌7、胰腺癌8、口腔鳞状上皮细胞癌9、恶性淋巴瘤10等其他肿瘤中被检测到。本实验旨在研究Jab1在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma， LSCC)中的表达及其与LSCC临床病理和预后的关系。 1 资料与方法 1.1 组织标本 标本为经临床病理检查均诊断为LSCC的肿瘤组织，取自1998年7月至2000年9月郑州大学第一附属医院LSCC手术标本72例。所有病例术前均未行化疗、放疗及其他治疗，均经病理学检查确诊。男59例，女13例，37 78岁，平均59岁。声门上型27例，声门型36例，声门下型9例；据TNM分期(UICC分类分期法，1997年)， 29例， 43例；中、高分化癌52例，低分化癌20例；颈淋巴结转移阳性24例，阴性48例；随访5年以上69例(95.83%)，失访3例。另外，选癌旁切缘2?cm以上正常喉黏膜(normal laryngeal tissues, NLT)标本23例。 1.2 免疫组织化学检测 采用SP染色方法，鼠抗人Jab1单克隆抗体、免疫组织化学染色试剂盒(SP盒)均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，以已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。 1.3 结果判定 所有切片采用双盲法由两位病理科医生独立阅片，Jab1阳性表达主要位于细胞核，部分胞浆也有阳性表达，呈棕黄色，随机观察10个高倍视野并计数，每个视野至少计数1?000个细胞，取其平均值为该病例的细胞阳性率，并据此对染色结果分级。Jab1阳性率<50%为阴性(-)，50%为阳性(+)。 1.4 统计学处理 数据经SPSS 13.0处理，采用2检验、KaplanMeier曲线及Logrank检验。P<0.05为差异有统计学意义。 2 结 果 2.1 Jab1蛋白的表达特征 Jab1蛋白阳性表达主要定位于肿瘤细胞胞核中，部分胞浆内也有表达(图1)，在NLT和LSCC中阳性表达率分别为13.04%和54.17%(表1)，后者高于前者，差异有统计学意义(P<0.05)。 图 1 Jab1在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达 (400) 2.2 Jab1蛋白表达与LSCC临床病理特征的关系 Jab1的过表达与肿瘤的大小和淋巴结转移及临床分期呈正相关(P<0.05)，见表1。 2.3 Jab1蛋白表达与预后的关系 全部病例均在术后进行随访(截止时间为患者死亡或研究截止日期)，随访时间均在5年以上。Jab1阳性患者的5年总生存率为47%，而阴性者为83%，差异有统计学意义(P<0.05)。表1 LSCC中临床病理指标和Jab1蛋白表达水平的关系 3 讨 论 细胞有序地经过细胞周期需要正负调节因子间的精密平衡，平衡的任何变更可能导致异常的细胞增殖而具有致癌作用。人类Jab1起初被定义为转录因子AP1(activator protein 1)的共活化物参与细胞增殖的控制，Claret等1通过免疫荧光研究发现，Jab1的免疫染色主要定位在胞核，通过选择性地与Jun这类转录相关蛋白的作用，能特异地增强目的基因的活性。 我们检测了72例LSCC组织中Jab1的表达发现，Jab1主要定位在胞核，胞浆也见表达，阳性率在癌组织中明显高于正常组织，这些与既往在其他部位肿瘤中的相关研究结果相一致6,7,10。细胞周期主要由正负调控蛋白调控,细胞周期蛋白(cyclin)和细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinases, CDKs)复合物具有正调节作用,而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CKIs)则起负调节作用, 通过与cyclinCDK形成稳定的复合物,抑制CDKs催化活性。在人类肿瘤中细胞周期素依赖激酶抑制因子p27kip1的变异非常少见，细胞内p27kip1的丰度主要在转录后水平调节，Jab1能与p27kip1直接结合并通过泛素-蛋白酶体途径特异性诱导其下调4,5。据报道7，p27kip1水平在Jab1基因转导入乳腺癌细胞中后显著降低。Jab1可能通过激活AP1转录蛋白促进肿瘤的发展，AP1复合物促进细胞的侵袭1113。有研究表明14，p27kip1表达的降低与LSCC细胞的增殖活性和肿瘤的侵袭性相联系，肿瘤细胞的增殖活性与LSCC的发展和预后相关。本研究中，54.17%的LSCCs中出现Jab1的过表达，并且与肿瘤的大小和淋巴结转移及临床分期呈正相关。Jab1作为p27kip1的负调节物可能促进LSCC的发生和发展。 Sui等8首先报道了Jab1的过表达与卵巢癌患者总生存率相关。Kouvaraki等9关于乳腺癌的研究发现， Jab1阳性患者的5年总生存率为69%而Jab1阴性患者却为100%。我们发现，Jab1过表达与患者的总生存率显著相关，Jab1阳性患者的5年总生存率为47%，而阴性者为83%，多变量分析亦表明，Jab1蛋白是总生存率的一个独立预后指标。 综上所述，本研究显示了LSCC中Jab1明显的过量表达，作为p27kip1的负性调解物，Jab1与LSCC的发生、发展及预后相关。如果我们的结果得到更多研究的证实，Jab1蛋白可以作为人类肿瘤试验性治疗的新靶点。【参考文献】 1 ZK(#Claret FX, Hibi M, Dhut S, et a1. A new group of conserved coactivators that increase the specificity of AP1 transcription factorsJ. Nature, 1996, 383(6599):453457.2 Kwok SF, Solano R, Tsuge T, et al. Arabidopsis homologs of a cJun coactivator are present both in monomeric form and in the COP9 complex, and their abundance is differentially affected by the pleiotropic cop/det/fus mutationsJ. Plant Cell, 1998, 10(11): 17791790.3 Deng XW, Dubiel W, Wei N, et al. Unified nomenclature for the COP9 signalosome and its subunits: an essential regulator of developmentJ. Trends Genet, 2000, 16(7):289.4 Pagano M, Tam SW, Theodoras AM, et al. Role of the ubiquitinproteasome pathway in regulating abundance of the cyclindependent kinase inhibitor p27J. Science, 1995, 269(5224):682685.5 Tomoda K., Kubota Y, Kato J, et al. Degradation of the cyclindependentkinase inhibitor p27Kip1 is instigated by Jab1J. Nature, 1999, 398(6723):160165.6 Sui L, Dong Y, Ohno M, et al. Jab1 expression is associated with inverse expression of p27(kip1) and poor prognosis in epithelial ovarian tumorsJ. Clin Cancer Res, 2001, 7(12): 41304135.7 Kouvaraki MA, Rassidakis GZ, Tian L, et al. Jun activation domainbinding protein 1 expression in breast cancer inversely correlates with the cell cycle inhibitor p27(Kip1)J. Cancer Res, 2003, 63(11):29772981.8 Fukumoto A, Ikeda N, Sho M, et al. Prognostic significance of localized p27Kip1 and potential role of Jab1/CSN5 in pancreatic cancerJ. Oncol Rep, 2004， 11(2):277284.9 Shintani S, Li C, Mihara M, et al. Skp2 and Jab1 expression are associated with inverse expression of p27(KIP1) and poor prognosis in oral squamous cell carcinomasJ. Oncology, 2003, 65(4):355362.10 ZK(#Ito Y, Yoshida H, Matsuzuka F, et al. Jun activation domainbinding protein 1 expression in malignant lymphoma of the thyroid: its linkage to degree of malignancy and p27 expressionJ. Anticancer Res, 2003, 23(5b):41214125.11 Smith LM, Wise SC, Hendricks DT, et al. Jun overexpression in MCF7 breast c