全反式维甲酸和苯乙酸钠联合对人肝癌细胞的诱导分化作用.doc

精品论文，值得推荐全反式维甲酸和苯乙酸钠联合对人肝癌细胞的诱导分化作用 【关键词】 肝细胞癌 关键词: 维甲酸;苯乙酸钠;肝细胞癌;细胞分化;甲胎蛋白 摘 要:目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）和苯乙酸钠（Na-PA）两者对人肝癌细胞联合作用. 方法 应用台盼蓝染色、MTT法、流式细胞仪、甲胎蛋白测定等方法检测ATRA和NaPA两者联合对人肝癌细胞的诱导分化作用. 结果 10molL-1 ATRA，2.5mmolL-1 NaPA及两者联合作用，可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的生长，使细胞恶性表型向正常转化，其联合作用组7d抑制率达66.5%，并能明显降低甲胎蛋白的分泌量49.2%，使细胞周期G0 /G1 期延长58.7%，S期下降35.8%（P0.05），影响DNA合成，最终产生抑制增殖诱导细胞分化的作用. 结论 ATRA，NaPA及两者联合应用均可抑制SMMC-7721细胞生长，诱导细胞分化，ATRA和NaPA联合对人肝癌细胞的诱导分化有协同作用. Keywords:all-trans retinoic acid;phenylacete natrium;hep-atocellular carcinoma;cell differentiation;AFP Abstract:AIM To investigate the effects of all-trans retinoic acid in combination with phenylacete natrium on hu-man hepatocellular carcinoma（HCC）cell line SMMC-7721.METHODS HCC cell line was exposed to all-trans retinoic acid and phenylacete natrium separately and both agents in combining manner respectively.The morphologic and func-tional changes of the cell line were observed with benzo blue，MTT，flow cytometric analysis，image analysis and AFPmeasurement.RESULTS Single all-trans retinoic acid or phenylacete natrium could inhibite the proliferation of human HCC cell line（SMMC-7721），which had obvious dose and time effect.After SMMC-7721cells were treated with com-bined treatment of both agents for7d，the suppression rate was about66.5%.The malignant phenotype of the cell line gradually disappeared while characteristics of mature cell were progressively increased.The secretory volume of AFP was reduced by49.2%.The cells at G0 /G1 phase were rela-tively increased by58.7%and synthesis of DNA inhibited by35.8%（P0.05），但两者联合作用比单独作用抑制明显增强（P0.05，Fig1）. 2.3 细胞增殖抑制率 活细胞特别是增殖细胞线粒体内的脱氢酶可将MTT代谢成蓝紫色结晶，并沉积于细胞内，其量与细胞增殖程度呈正比，MTT法 测定反映活细胞量.检测细胞增殖抑制率，联合处理组抑制率明显大于任一组单用，其7d抑制率可达66.5%（Tab1）. 图1 略 表1 MTT比色法检测SMMC-7721细胞增殖略 2.4 甲胎蛋白分泌量 不同处理组的作用对SMMC-7721细胞AFP分泌量均呈周期性变化（Fig2）.于3d达到高峰，后逐渐下降，至最低点又开始上升，此与细胞周期存在相关性.同一培养日数，经ATRA，NaPA及联合作用细胞AFP分泌量均明显少于对照组细胞. 2.5 细胞周期 流式细胞仪分析结果表明，与相应对照组相比，ATRA处理组可使细胞G0 /G1 增加，S，G2 +M下降（Tab2）.NaPA处理组可使细胞G0 /G1 增加，G2 +M下降，S变化不大.联合处理组对细胞周期各阶段均有明显影响.G0 /G1 是细胞进入分裂期的重要阶段，G0 /G1 增加则进入分裂期的细胞减少.S期是细胞DNA合成期，S期减少则影响DNA合成.由此而抑制细胞增殖，促进细胞分化及凋亡. 3 讨论 目前诱导分化剂被广泛的应用于肿瘤的研究，在肿瘤的预防和治疗方面已取得一定的进展，其中以维甲酸类药物效果肯定2，3 .但诱导剂应用时间过长，剂量过高会带来一系列的毒副作用，并可使患者产生抗药性.因此，联合应用分化诱导剂以及分化诱导剂与其他作用机制不同的化合物联合应用.苯乙酸广泛存在于生物体内，是苯丙胺酸在体内经脱氨基生成的一种代谢产物.对机体无毒性及副作用，苯乙酸钠可与谷氨酰胺结合，降低血浆中谷氨酰胺的水平，选择性诱导细胞生长抑制，影响DNA的合成，从而阻止细胞的生长而诱发凋亡.其诱导方式和作用环节与维甲酸类不同，因此，进行有效的联合用药，可在多个环节上发挥诱导分化作用.ATRA和NaPA联合应用于治疗神经母细胞瘤，NaPA可增加维甲酸受体的表达4 .小剂量的ATRA可增强NaPA诱导HL-60细胞分化成熟，使其N-myc水平较单用NaPA或ATRA时进一步下降. 图2 略 表2 ATRA/NaPA对SMMC-7721细胞周期的影响略 肿瘤细胞的特点为细胞形态各异，并且增殖速度 非常迅速，细胞分化和细胞增殖是一对矛盾，抑制增殖可促进分化，反之亦然5，6 .本结果表明，10molL-1 ATRA，2.5mmolL-1 NaPA抑制SMMC-7721细胞的增殖和使其处于分裂相的细胞显著降低，而且联合作用效果强于单独作用的效果，各组细胞经台盼蓝染色均未见死亡细胞，在培养过程中，各处理组细胞由形态各异转变为基本上以多角形细胞为主，细胞形态发生了显著变化.ATRA，NaPA及其联合作用均能降低HCC细胞的恶性程度.且随时间增加，细胞增殖抑制率逐渐增大，联合处理组7d抑制率可达66.5%.AFP是胚胎肝、再生肝及HCC细胞分泌的一种癌胚蛋白，各处理组细胞AFP分泌量较对照组显著降低，可能是全反式维甲酸、苯乙酸钠抑制了AFP基因的过量表达.细胞周期分析表明，NaPA处理组细胞G0 /G1 期增大，G2 +M减小，S期无明显变化.ATRA处理组细胞G0 /G1 期增大，S，G2 +M期均减小.联合处理组细胞各周期变化较显著，作用效果强于各自单独作用，其原因可能是两者药物作用于不同的环节，相互促进的结果. 参考文献: 1Zhang YJ，Xia T，Zhao JB.Effects of Matrine on the differenti-ation of SMMC-7721cell lines J.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1998;19（3）:340-343. 2Zhou HG，Gu GW.Retinods preventing liver cancer J.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi（World Chin J Digestol），1999;7（1）:82-83. 3Xin XY，Chen BL，Wang TD.Expression of gap junction pro-tein connexin43in HeLa cell line and its effect on gap junctional intercellular communication J.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2000;21（3）:369-371. 4Mark WL，Peter JP，Noel PB.Retinioc acid and interferon-act synergistically as antiangiogenic and antitumor agents against human head and neck aquamous J.Cancer Res，1998;58（24）:5551-5558. 5Xue Y，Xia T，Zhao JB，Wu SH，Zhang ZH，Wang ZR.Cur-cumin inhibits human hepatocarcinoma cell line SMMC-7721J.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2000;21（5）:S84-S86. 6Shao CH，Zhu F，Yan W，Zhao Z