实验二细胞结构和大小测量.ppt

实验二 细胞显微结构观察及大小测量,一、目的与要求,1、掌握光学显微镜下的细胞形态与结构特点、了解油镜观察自制标本操作方法 2、了解制片技术的种类与用途 3、初步掌握临时制片的方法与染色方法 4、了解显微测微尺的使用方法 5、学会利用软件处理细胞，求各细胞的 大小和核质比,二、试剂、材料与器材,1 、材料 ： 洋葱，小白菜，新鲜的猪脑、番茄 2、药品： 01亚甲基蓝染液，09生理盐水，1碘液 3 、器材： 显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，滴管，擦镜纸，小刀，显微测微尺和电脑等,三、操作与观察,（一）制片方法与种类 1 、玻片分类：临时玻片标本与永久玻片标本 2 、制片方法的分类：装片法和切片法 （二）临时玻片标本制备方法 想一想应该怎么制作？,（三）永久玻片标本制备方法,清洁玻片,取材,固定,冲洗,染色,脱水,封片,（四）几种临时装片的制作,1、洋葱鳞茎表皮细胞（染剂1碘液或用0.1%亚甲基蓝液),清洁玻片,取材,滴生理盐水,展平,盖上盖玻片,染色,观察,思 考,1、为什么说洋葱表皮细胞的形态结构特点与功能相适应？ 2、为什么用0.1%亚甲基蓝液染色？它使细胞结构中哪一部分更能观察清楚？ 3、如何使用高倍物镜？怎样调节显微镜才能更清楚的观察标本? 4、怎样可避免标本中产生的气泡？,2、植物的叶肉细胞和果肉细胞 染剂： 1碘液,清洁玻片,取材,滴生理盐水,涂散开,盖上盖玻片,观察,染色,思 考,1）怎样制作植物叶肉细胞和果肉细胞？我们主要可观察到什么细胞器？ 2）想一想果肉细胞与表皮细胞形态结构有什么不同？其最显著的特征是什么？,3、人的口腔上皮细胞 染剂：01亚甲基蓝染液,清洁玻片,滴生理盐水,轻刮两颊壁,涂散开,染色,观察,盖上盖玻片,思 考,1）怎么制作人的口腔上皮细胞？关键在哪一步？ 2）比较洋葱表皮细胞和人的口腔上皮细胞结构上有何差别？,4、动物脊髓神经细胞形态结构观察 染剂： 01亚甲基蓝染液,清洁玻片,滴生理盐水,取材,涂散开,盖上盖玻片,染色,观察,HE染色方法：（苏木精-伊红染液）,1）含义 苏木精：碱性染料，使细胞核内的染色质及细胞质内的核糖体染成紫蓝色。 伊红：酸性染料，细胞质和胞外基质中的成分染成红色。,（1）、0.51% 的伊红酒精溶液： 称取伊红Y 0.51 g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精100毫升溶解。 （2）、苏木精染液配方：(配制3000ml，可按比例减少) 苏木精 6 g 无水乙醇 100ml 硫酸铝钾 150 g 蒸馏水 2000ml 碘酸钠 1.2 g 冰醋酸 120ml 甘油 900ml,配制方法：将苏木精溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。 （3）、1%盐酸酒精分色液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可,2）染色的步骤,固定：入100%、95%、85%、70%酒精分别脱水2-5min，再入蒸馏水清洗3min。 苏木精染液染色：5-15min 脱色：蒸馏水漂洗2min 分色： 1%盐酸酒精分色液分色5min，镜检 脱色: 流水冲洗20min，镜检 漂洗：蒸馏水漂洗2min 染色：1% 的伊红酒精液染色3min 脱水： 70%、 85%、 95%、 100%酒精分别脱水2-5min。,（五）细胞大小的测量,1、显微测微尺的用法 （1）显微测微尺的组成 （2）测量： 长度的测量，厚度的测量和对圆形，椭圆形细胞的测量,1）显微测微尺的组成 分目镜测微尺和镜台测微尺，两尺配合使用。 （1）镜台测微尺 在一个载玻片中央封固的尺，长1毫米(1000m)，被分为100格，每格长度是10微米。,（2）目镜测微尺 是一个放在目镜像平面上的玻璃圆片。圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格，每格代表的长度随不同物镜的放大倍数而异。因此，用前必须测定 。,2）使用方法 将镜台测微尺放在显微镜的载物台上夹好，小心转动目镜测微尺和移动镜台测微尺使两尺平行，记录镜台测微尺若干格所对应的目镜测微尺的格数。,2、电脑软件图象处理系统,（各种不同倍数下的）,启动图像处理系统,图像采集窗,捕捉,静态图像,关闭图像采集窗,测量,校准向导,装入标准图像,确定物镜倍数,校准圆直径（m）,校准,标定名,保存,最小化,DigilabII-c,Login,确定,选择细胞,手动拍照,拍照,打开图像处理系统,点线、点圆、点多边形,寻找目标细胞,实验报告要求