THEEFFECTOFXCHTJOINTLYDECOCTIONANDMIXTUREOFCOUPLEHERBSDECOCTIONONTHEFEVERINDUCEDBYL.doc

1 小柴胡汤合煎液与分煎合液小柴胡汤合煎液与分煎合液 对不同剂量对不同剂量 lpslps 诱导的大鼠发热模型的影响诱导的大鼠发热模型的影响 孙孙明瑜，明瑜，谢鸣谢鸣，高琳，高琳 北京中医北京中医药药大学方大学方剂剂学科学科 北京，北京，100029 摘要摘要：目的：考察小柴胡汤的解热作用，并比较小柴胡汤合煎液与分煎合液的药效。方法： 建立 sd 大鼠 lps（20g/kg，80g/kg）发热模型，绘制各组平均体温变化（t）曲线，在此 基础上比较各组体温变化。结果：小柴胡汤分煎合液与合煎液组在大鼠注射 lps 后多个观察点的 体温均较模型组明显降低(po.o5，p0.01)，合煎与分煎合液作用于不同剂量模型的体温变化曲 线不同。结论：小柴胡汤合煎液与分煎合液均有显著的解热作用，但小柴胡汤合煎液在解热的显 效及持续时间上优于分煎合液。 the effect of xcht jointly decoction and mixture of couple herbs decoction on the fever induced by lps in rats sun mingyu, xie ming , gao lin formula department，beijing university of chinese medicine（beijing 100029） abstract: purpose: to test whether xiaochaihutang (xcht) can reduce the fever induced by lps，moreover xcht of jointly decoction (xchth) and mixture of respective decoction of couple of herbs (xchtf) are different. methods: the sprague-dawley rats with lps (20g/kg or 80g/kg，i.p) were treated with xchth or xchtf（11g/kg，per os）.the change of rat temperature induced by lps was observed in various groups. results: the rat temperature xchth or xchtf group are markedly lowed compared with model group（po.o5, p0.01）.t curv was different between xchth and xchtf group. conclusion: xchth and xchtf can significantly inhibited the febrile. key words: xiao chaihu tang(xcht), decoction，lipopolysaccharides, antiperitic. 自八十年代“现代中药”概念1提出以来，临床以中药提取颗粒代替饮片，用颗粒配方冲饮 代替传统饮片配方煎汤正在引起人们的关注。从制剂角度看，颗粒配方与通常的饮片分煎后合并 煎液比较接近，与传统的中药共煎是有所不同的。颗粒配方与中药合煎的化学成分是否相同，特 别是药效是否接近，这是评价中药颗粒配方能否取代中药合煎的重要依据。虽然目前研究较多， 但尚无定论。本课题以中医和解少阳的著名代表方小柴胡汤作为切入点，以本方现代临床多用于 以发热为主症的各种疾病和药理研究具有退热作用为依据，从药效学角度，比较观察了小柴胡汤 分煎合液与合煎液在退热作用方面差异，为认识中药颗粒配方的合理性提供实验依据。 1 1材料材料 1.1 药物 中药材：柴胡、黄芩、半夏、生姜、人参、甘草、大枣共七味药,购自北京同仁堂药店。 小柴胡汤和合煎与分煎合液的制备：小柴胡汤全方合煎液（xchth）：小柴胡汤药味与剂量按 方剂学五版教材由柴胡 12g，黄芩 9g，半夏 9g，生姜 9g，人参 9g，甘草 6g，大枣 12g 组成。 2 七味药材自来水浸泡 40 分钟，第一遍煎煮时加 7 倍的水，第二遍加 5 倍的水。每次煮沸后，控温 电炉保持微沸 30 分钟。合并两次煎液，90水浴浓缩至 100%浓度，使每 1ml 含原药材 1g；分煎合 液（xchtf）：小柴胡汤分成柴-芩、姜-夏、参-草-枣三组配伍药对，各药对组(依原方中各药剂量 配伍)按上述水煎法分别水煎，两次煎液浓缩至 100%浓度，冷却后按全方的配伍比例，配制为小柴 胡汤分煎合液。 1.2 动物 sd 大鼠，雄性，体重 220250g，购自北京维通利华实验动物中心，合格证号：scxk(京) 20020003。在室温 202环境下分笼饲养，光照 12h（am 8:00pm 8:00） ，实验前适应环境饲 养一周。 1.3 试剂 纯化 lps(escherichca coli endotoxin o55:b5, l2880, sigma co.)稀释于 0.9%无菌生理盐 水，配成 20g/ml 的溶液，-20保存备用。 1.4 仪器 电脑数字型体温计，型号为 mc-3b，欧姆龙(中国)有限公司产品。 2.2.方法方法 2.1 实验分组 大鼠每日测量体温（肛温）2 次，连续 2 日，取两次体温的平均值记为基础体温。单次体温超 过 38或 2 次体温超过 0.5的动物剔除。将合格的大鼠 54 只随机分为 7 组：正常对照组、模型 组组（lps 20g/kg） 、小柴胡汤合煎组，小柴胡汤分煎合液组；模型组组（lps 80g/kg） ，小柴胡汤合煎组，小柴胡汤分煎合液组。其中正常组大鼠 6 只，其余各组每组 8 只。 2.2 动物处理及观察指标 实验前 6h 禁食不禁水。模型组和给药组大鼠分别腹腔注射 lps（20g/kg 或 80g/kg，诱发 动物发热；正常组注射生理盐水。造模的同时各中药组灌胃给与中药 11g/kg体重（相当于人临 床有效剂量的 10 倍） ，正常组和模型组给予同体积蒸馏水。注射 lps 后每隔 0.5h 测一次体温，连 续监测 8h。 2.3 数据处理 绘制各组平均体温变化曲线；最大体温上升高度t（发热时的体温与基础体温的差值） 。各组 数据用s 表示，多组数据采用方差分析(anova)检验,组间比较采用 q 检验。全部的数据处理使 用 spss10.0 统计软件处理。 3 3结果结果 3.1 小柴胡汤合煎液和分煎合液对 lps（20g/kg）诱导的大鼠发热模型体温的影响 结果见表 1 和图 1。 从表 1 中可以看出，与正常组相比，模型组在 2.5h-5.5h 间的 7 个时间点体温显著升高 （po.o5, po.o） ；与模型组相比，合煎组在 0.5-5.5h 的 11 个时间点的体温均显著降低 （po.o5, po.o） ；xchtf 在 2.5、3.5、4、4.5h 的 4 个时间点体温均显著降低（po.o5, po.o） ；合煎与分煎组组间比较，没有显著性差异。 表 1：小柴胡汤合煎液和分煎液对 lps（20g/kg）诱导的大鼠发热模型体温的影响（s） 3 表 1（续）：小柴胡汤合煎液和分煎液对 lps（20g/kg）诱导的大鼠发热模型体温的影响 （s） 注：xchth：小柴胡汤合煎组；xchtf：小柴胡汤分煎组。 *po.o5, * po.o1，vs lps group -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2 0.5h1h1.5h2h2.5h3h3.5h4h4.5h5h5.5h time rate of change of temperature() nslps 20g/kg ipxchthlpsxchtflps 图 1 小柴胡汤合煎液和分煎液作用 lps（20g/kg）发热模型大鼠的t 曲线 从图 1 可以看出，正常组t波动不大，模型组t 曲线明显上移，且形成了较典型的二相发 热曲线；与模型组相比，小柴胡汤合煎组的t曲线明显下移，分煎组的t曲线在 2.5h 后出现明 显下移；小柴胡汤合煎组的t曲线较分煎组下移。 3.2 柴胡汤合煎和分煎合液对 lps（80g/kg）诱导的发热模型大鼠体温的影响 结果见表 2 和图 2。 表 2 小柴胡汤合煎液和分煎液对 lps（80g/kg）发热模型大鼠体温的影响（s） t groupn 0.5h1h1.5h2h2.5h3h ns6 0.6000.3 03 0.3200.4 07 0.5200.6 31 0.2400.7 31 0.14 0.472 * - 0.200.40 5* lps8 0.6170.3 34 0.6000.2 52 0.7670.3 99 0.6000.4 08 0.920.4 63 0.8500.1 71 xchth8 0.0430.3 58* 0.2290.3 37* 0.1570.3 96* 0.0140.5 05* 0.2860.65 8 * 0.0710.5 20* xchtf8 0.2570.4 85 0.6000.4 17 0.5710.4 29 0.5000.4 82 0.5710.52 4 * 0.4833.6 210 t groupn 3.5h4h4.5h5h5.5h ns60.000.49 4* 0.2000.2 10* -0.16 0.463* 0.1400.4 63* 0.1600.48 4* lps80.9170.1 95 1.1000.2 45 0.9500.4 61 0.5670.2 62 0.6830.51 8 xchth80.1290.5 91* - 0.1000.3 70* - 0.110.69 2* 0.1570.6 78 0.0290.46 5* xchtf80.2670.5 92* 0.2500.4 50 * 0.1830.4 71* 0.3000.3 74 0.2830.57 8 4 表 2（续 1）小柴胡汤合煎液和分煎液对 lps（80g/kg）发热模型大鼠体温的影响（s） 表 2（续 2） 小柴胡汤合煎液和分煎液对 lps（80g/kg）发热模型大鼠体温的影响（s） t groupn 0.5h 1h 1.5h 2h 2.5h ns 6 0.50000.23 66 0.350 0.414* 0.40000.59 33 0.1000.7670.0167.541 9* lps 8 0.35000.26 46 0.775 0.295 0.55000.17 32 0.525 0.432 0.65000.26 46 xchth8 0.47140.22 89 0.286 0.295* 0.02860.30 94* 0.043 0.290 0.21430.24 45 xchtf 8 0.12860.30 94 0.214 0.318* 0.04280.35 52 0.243 0.407 0.27140.38 61 t 3h 3.5h 4h 4.5h 5h ns 6 0.1830.26 4* - 0.16670.3 011* 0.1500.56 1* 0.06670.9 352* 0.2170.83 5 lps 8 0.7750.21 7 0.72500.2 062 0.850 0.269 0.90000.6 055 0.850 0.450 xchth8 0.229 0.337* 0.22860.3 426 0.271 0.294* 0.24290.3 645 0.214 0.264* xchtf 8 0.1140.39 8* 0.12860.7 017 0.357 0.512* 0.50000.4 359 0.629 0.430 5 *po.o5, *po.o1, vs lps group；p 0.05, vs xchtf group. 注：xchth：小柴胡汤合煎组；xchtf：小柴胡汤分煎组。 从表 2 中可见，与正常组相比，模型组在 1h、2.54.5h、5.5h、6.58h 共 11 个时间点体 温显著升高（po.o5, po.o） ；与模型组相比，xchth 在 11.5h、3h、4h、58h 的 11 个时间 点均有显著性差异（po.o5, po.o） ，xchtf 在 1、3、4、6.58h 时有显著性差异（po.o5, po.o） ；与 xchtf 组比较，xchth 组在 0.5、5、6h 均有显著性差异（p0.05） 。 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 0.511.522.533.544.555.566.577.58 time(h) rate of change of temperature () nslps 80g/kg ipxchth + lpsxchtf+ lps 图 2：小柴胡汤合煎液和分煎液作用 lps（80g/kg）发热模型大鼠的t 曲线 从图 2 可以看出，模型组是t呈逐渐上抬趋势，6h 后明显升高；而小柴胡汤合煎与分煎组的 t曲线均较模型组明显下移，分煎组在 4h7h 的t曲线段较合煎组上抬。 4 4讨论讨论 目前利用脂多糖（lipopolysaccharide, lps）诱导的动物发热是目前药理研究中最为常用的 模型，作为无致热源非肠道药物的决定性试验被多部药典收录2。lps 是革兰阴性细菌的内毒素 t group n 5.5h6h6.5h7h7.5h8h ns 6 0.10000.8 922* 0.1500.74 0 0.20000.6 723* 0.2000.61 3* 0.20000.5 865* 0.1670.55 4 * lps 8 1.02500.5 737 0.975 0.622 1.25000.3 786 1.175 0.295 1.50000.3 162 1.6750.23 8 xchth8 0.20000.2 198* 0.057 0.358* 0.00000.2 769* -0.071 0.281* - 0.05710.3 101* 0.0860.29 * xchtf 8 0.55710.5 855 0.443 0.377 0.37140.3 498* 0.229 0.319 * 0.18570.3 671* - 0.0860.39 4 * 6 (endotoxin, et)的活性成分，呈高度水溶性，被认为是一种强力的外源性致热物质，大量研究表 明，注射 lps 能引起哺乳动物的体温升高3,4，外周注射微量（0.02g/kg）lps 就能够引起发 热5。lps 就能引起剂量依赖性发热，大鼠腹腔或静脉注射通常剂量 10g/kg-1000g/kg 的 lps 可引起双相或三相热6，降低剂量则表现单相热，反复注射后易出现耐受性。狗注射 lps (40, 10, 1, 0.1, and 0.01 g/kg), 体温呈剂量依赖性升高7。目前认为 lps 引起发热是由 lps 激活单核巨噬细胞，诱生其释放内生致热源（endogenous pyrogen, ep）所致。 目前用 lps 诱导发热模型所用 lps 的剂量范围较大，从 10g/kg250g/kg 不等，甚至 1000g/kg 8。其中较为常用的 lps 剂量是 10g/kg、20g/kg、100g/kg7。其中存在一个 适宜剂量的选择问题，为此我们考察了二种不同剂量所致发热模型的特点。本实验观察到 lps 按 20g/kg 剂量腹腔注射，大鼠在注射后 2.5h5.5h 内体温显著升高（po.o5, po.o） ；4h 达 峰值（38.5） ，最高增幅为 1.15。按 80g/kg 剂量腹腔注射，大鼠则在注射后的 1h、2.54.5h、5.5h、6.58h 共 11 个时间点体温显著升高（po.o5, po.o） ；8h 达峰值 （38.8） ，最高增幅为 1.65。表明本实验中所用的 lps 两个剂量均能诱导出大鼠发热，但不 同剂量诱导的发热模型在发热和峰值时间点以及持续时间的长短有所不同。通过分析比较，发现 80g/kg lps 腹腔注射引起的大鼠发热比 20g/kg lps 所致的发热热势高，持续时间长，利于 观察。本实验还观察到，大鼠注射 lps 剂量（20g/kg、80g/kg）所引起的大鼠发热也呈多相 热，动物同时伴有恶寒、战栗、精神萎靡等症状，与小柴胡汤证中的“往来寒热”较为接近，提 示该模型可能是研究中医少阳证的一个有用模型。 曾有研究比较口服小柴胡汤各单味药分煎液和合煎液对酵母液所致大鼠发热模型的影响9，观 察到大鼠皮下注射 20%酵母悬液 10ml/kg 后 4h 时出现体温升高，6h 时体温达到峰值，小柴胡汤分 煎液和合煎液（36.92g/kg 和 18.46g/kg）对皮下注射后 4h、6h、8h 共 3 个时间点的大鼠体温均有 不同程度的降低作用，但组间没有显著性差异。 本实验观察到，小柴胡汤按配伍药群的分煎合液与合煎液对两个剂量的 lps 导致的大鼠发热均 有显著的解热作用，且总体退热效用差异不明显，进一步表明小柴胡汤确有退热效用，而且解热药 理作用下的分煎与合煎效用接近。但实验中也观察到，分煎合液与合煎液对不同剂量 lps 所致模型 呈现的解热效应有所不同。合煎液对 20g/kg lps 致热模型在注射 lps 后 0.5h 即出现退热效应， 退热作用持续 5h；分煎液在注射 lps 后 2.5h 出现退热效应，退热作用持续 2h 左右。对 80g/kg lps 大鼠发热模型的解热作用，分煎液出现在注射 lps 后 0.5h，合煎液出现在注射 lps 后 1h，在 注射后 8h 内合煎液较分煎合液有更多的观察时间点呈现解热作用，并在 5、6h 的解热作用显著优 于分煎液。从两个发热模型的观察结果来看,小柴胡汤合煎液的解热作用起效均较快，解热作用的 持续时间较长，表明小柴胡汤分煎与合煎的解热作用同中有异。实验结果提示复方的作用特点可能 因不同的作用对象而有所不同，方剂的分煎与合煎可能因不同观察模型而显示不同的药理作用。 鉴于复方分煎与合煎在效用上存在差异，在颗粒配方的全面推广之前，需要对其合理性进行科 学评价。研究中不仅要考虑到中医同一方剂具有多方面的药理作用和多个适应病症，选择多个模型 观察，而对同一药理作用的考察可能也需要选择多个不同模型，在此基础上进行系统综合评价是必 要的。 参考文献参考文献 1 原思通, 赵曦. 对“单味中药浓缩颗粒”的思考.中国中药杂志.1999,24(9):515-516 7 2 杜冠华，李学军，张永祥等译.药理学实验指南.科学出版社,2001,552 3 klir jj, roth j, szelenyi z, et al. role of hypothalamic interleukin-6 and tumor necrosis factor-alpha in lps fever in rat.am j physiol,1993，265:5127. 4 morimoto a, nakamori t,watanabe t,et al. pattern differences in experimental fevers induced by endotoxin,endogenous pyrogen,and prostaglandins.am j physiol,1988，253:633640 5 邵黎，朱文玉译.发热：外周致热信号通过什么途径进入脑内？生理科学进展.1998,29(3):277- 20 6romanovsky, a. a., c. t. simons, v. a. kulchitsky. “biphasic“ fevers s often consist of more than two phases. am. j. physiol. 1998, 275 (regulatory integrative comp. physiol. 44): r323-331 7marier jf, beaudry f, ducharme mp, et al. a pharmacokinetic study of amoxycillin in febrile beagle dogs following repeated administrations of endotoxin. j vet pharmacol ther. 2001 dec;24(6):379-83. pmid: 11903867 8lemay dr, lemay lg, kluger mj, et al. plasma profiles of il-6 and tnf with fever-inducing doses of lipopolysaccharide in dogs. am j physiol 1990 jul;259(1 pt 2):r126-32 孙兰,崔景朝,陈玉兴,等. 小柴胡汤单煎与合煎药理作用比较研究. 中药药理与临床 2000;16(3): 5-6 我的大学爱情观我的大学爱情观 1 1、什么是大学爱情：、什么是大学爱情： 大学是一个相对宽松，时间自由，自己支配的环境，也正因为这样，培植爱情之 花最肥沃的土地。大学生恋爱一直是大学校园的热门话题，恋爱和学业也就自然成为 了大学生在校期间面对的两个主要问题。 恋爱关系处理得好、正确，健康，可以成为学习和事业的催化剂，使人学习努力、 成绩上升；恋爱关系处理的不当，不健康，可能分散精力、浪费时间、情绪波动、成 绩下降。因此，大学生的恋爱观必须树立在健康之上，并且树立正确的恋爱观是十分 有必要的。因此我从下面几方面谈谈自己的对大学爱情观。 2 2、什么是健康的爱情：、什么是健康的爱情： 1) 尊重对方，不显示对爱情的占有欲，不把爱情放第一位，不痴情过分； 2) 理解对方，互相关心，互相支持，互相鼓励，并以对方的幸福为自己的满足; 3) 是彼此独立的前提下结合； 3 3、什么是不健康的爱情：、什么是不健康的爱情： 8 1)盲目的约会，忽视了学业; 2)过于痴情，一味地要求对方表露爱的情怀，这种爱情常有病态的夸张; 3)缺乏体贴怜爱之心，只表现自己强烈的占有欲; 4)偏重于外表的追求; 4 4、大学生处理两人的在爱情观需要三思：、大学生处理两人的在爱情观需要三思： 1. 不影响学习： 大学恋爱可以说是一种必要的经历，学习是大学的基本和主要任务，这两者之间有错 综复杂的关系，有的学生因为爱情，过分的忽视了学习，把感情放在第一位；学习的 时候就认真的去学，不要去想爱情中的事，谈恋爱的时候用心去谈，也可以交流下学 习，互相鼓励，共同进步。 2. 有足够的精力： 大学生活，说忙也会很忙，但说轻松也是相对会轻松的！大学生恋爱必须合理安排自 身的精力，忙于学习的同时不能因为感情的事情分心，不能在学习期间，放弃学习而 去谈感情，把握合理的精力，分配好学习和感情。 3、有合理的时间； 大学时间可以分为学习和生活时间，合理把握好学习时间和生活时间的“度”很重要； 学习的时候，不能分配学习时间去安排两人的在一起的事情，应该以学习为第一；生 活时间，两人可以相互谈谈恋爱，用心去谈，也可以交流下学习，互相鼓励，共同进 步。 5 5、大学生对爱情需要认识与理解，主要涉及到以下几个方面：、大学生对爱情需要认识与理解，主要涉及到以下几个方面： （1）明明确确学学生生的的主主要要任任务务 “放弃时间的人，时间也会放弃他。”大学时代是吸纳知识、增长才干 的时期。作为当代大学生，要认识到现在的任务是学习学习做人、 学习知识、学习为人民服务的本领。在校大学生要集中精力，投入到学习和社 会实践中，而不是因把过多的精力、时间用于谈情说爱浪费宝贵的青春年华。 因此，明确自己的目标，规划自己的学习道路，合理分