高效液相色谱法测定甲硝唑的含量.ppt

药剂综合实验须知 实验项目 一 高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 二 氨茶碱加样回收率实验 三 氨茶碱溶液稳定性实验 四 紫外分光光度计法测定氨茶碱含量 五 氨茶碱原料药稳定性实验 六 五味子散剂的制备 七 SOD的含量测定 八 芦丁的提取和鉴别 实验要求 1课前认真预习，明确本次实验的目的、要求、内容、方 法及步骤 2提前5-10min进入实验室，检查实验所需物品是否齐全， 做好实验准备工作。 3实验时严肃认真，根据实验指导要求进行操作，仔细观 察和记录，并进行独立思考，按时完成实验内容和实验报 告。 4保持实验室安静，实验时不得随意走动和谈笑。室内严 禁吸烟、不允许在实验室内接听手机. 5保持实验室清洁整齐，书包、衣帽等应放在指定位置， 不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回 原处。 6爱护实验室一切仪器设备，珍惜药品及一切消耗用品(如 纱布、拭镜纸、载玻片等)，节约水、电。按操作规程使 用显微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理 ，如发现损坏或故障应及时报告指导教师。 7实验完毕后，值日生值日。值日工作范围包括：关闭水 、电、门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池， 实验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本 上登记值日情况，再交于老师签字后方可离开。 考核办法 Y 实验习惯10： 迟到1次扣1分，旷课一次扣3分，值日生必须最后走，早走者扣1分。 Y 预习报告10%： 不能简单抄书，要学会总结归纳。 Y 实验报告20： 当堂绘图，当堂交报告，迟交报告者要扣分。 Y 实验操作30%： 要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分 Y 实验考试成绩30： 操作10%，笔试20% Y迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次实 验的不能得良好，缺该课程1/3以上者或不参加实验考试者，均没有实验 成绩。 实验报告的书写格式：实验报告的书写格式： （1）实验名称 （2）实验目的 （3）实验内容及步骤 （4）实验结果 实验一 高效液相色谱法测定 甲硝唑的含量 高效液相色谱仪的主要结构及功能简介 1.高压输液泵 2.进样器 3.高效分离柱 4.液相色谱检测器 5.记录仪 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150350105 Pa。 注意排气泡：purge 流速设置 （2）进样器 n样品液吸取方法：上下反复抽取液体，速 度稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平 持进样针（液体吸取数量可多余20L）， 注入进样器。 n进样器存在的两个位置：load（右上）和 inject。 (2) 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，C18柱标准内径及柱长为 4.6*150mm或4.6*250mm，填料颗粒粒度5m。 色谱柱pH值范围不同：酸性柱、碱性柱、中性柱。 安装方向 柱温箱：保持温度稳定。 (3) 液相色谱检测器 a.紫外检测器 b.光电二极管阵列检测器 c.示差折光检测器 d.荧光检测器 e.电导检测器 紫外检测器 紫外检测器对占物质总数约80%的物质（有机和部分 无机物质）均可检测，既可测190-350 nm范围的光吸收 变化，也可向可见光范围350-700 nm 延伸。 优点：应用最广，灵敏度高，线性范围宽。是高效液 相色谱仪的标准配置。它的最重要特征是对流动相的流速 （脉冲）和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。 缺点：对无紫外吸收的组分不响应，而对紫外吸收较 大的溶剂如苯不能作流动相使用。 高效液相色谱的主要分离方法 液相色谱根据固定相性质可分为以下几种： 吸附色谱 (Adsorption Chromatography) 键合相色谱（Bonded phase chromatography） 离子交换色谱（Ion Exchanger Chromatogr.） 空间排阻色谱（Size Exclusion Chromatogr.） 亲合色谱（Affinity Chromatography） 在以上五种分离方式中，反相键合相色谱应 用最广，因为它采用醇水或腈水体系作流动 相。纯水易得廉价，它的紫外吸收极小。在纯水 中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广 的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基 （C18H37）键合到硅胶表面。这种键合相又称 ODS（Octadecylsilyl）键合相，如国外的 partisil5-ODS、Zorbax-ODS、Shim-pack CLC- ODS，国产的YWG-C18等。 实验目的 熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能； 了解反相色谱法的原理、优点和应用。 了解流动相的选择依据及配制方法； 掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基 本方法。 实验原理 高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动 相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法 。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内 被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色 谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来 分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列 溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样 品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。 实验器材与材料 实验器材：高效液相色谱仪、精密天平、50ml 烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml容量瓶、50ml容 量瓶、注射器、洗瓶、EP管、滤膜。 实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl、乙腈 、三氟乙酸、超纯水。 0.1M HCl溶液配制：准确量取HCl溶液 8.3ml, 用蒸馏水定容至1000ml，即得。 实验步骤 色谱操作条件; 标准溶液配制； 标准曲线的建立； 样品溶液的配制； 甲硝唑样品含量测定。 色谱柱：C18柱（1504.6mm,5m）； 流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80 ） 流速：1mL/min 检测波长：277nm 柱温：35 进样量：20L 1.色谱操作条件： 2. 标准溶液配制 精密称取在105条件下干燥至恒重的 甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中，用 0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度 为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。 3、标准曲线的建立 精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3ml 、0.5ml、0.7ml、0.9ml、1.1ml置于10ml的容 量瓶中，然后用0.1M HCl溶液定容至刻度，得 到浓度梯度为6g/mL、10g/mL、14g/mL 、18g/mL和22g/mL的标准溶液，分别过 0.22m的微孔滤膜过滤，滤液置于1.5ml的EP 管中并标号，各进样20L检测，以浓度为横 坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。 线性要求： 色谱峰分离度大于1.5，浓度点n5。用浓度c 对峰面积A作线性回归处理，得一直线方程，r 应大于0.999，方程的截距应近于零。 4. 样品溶液的配制 精密称取甲硝唑原料药10mg，置于50ml容 量瓶中，用0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度， 摇匀，再从中取出0.7ml定容至10ml，即得甲 硝唑样品溶液。 5.甲硝唑样品含量测