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文档简介
实验二 细菌的简单染色与革兰氏染色,主 讲:徐尔尼 生命科学学院生物技术系,一、目的与要求 1、学习微生物涂片、染色的基本技术、掌握细菌的简单染色和革兰氏染色方法。 2、了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 3、掌握无菌操作技术、巩固油镜的使用。,二、基本原理 1、简单染色法 简单染色法是使用一种染料对细菌进行染色的方法。常采用碱性染料进行染色,因为碱性染料电离时,其分子的染色部分带正电荷,很容易与带负电荷的细菌细胞结合使细菌着色。碱性染料有:美蓝、结晶紫、碱性复红等。 细菌产酸使培养基pH下降时,细菌带正电荷增加,可采用酸性染料。酸性染料有:伊红、酸性复红、刚果红等。,2、革兰氏染色 革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色,初染采用的是结晶紫,复染采用的是番红。 G菌:细胞壁较厚,肽聚糖含量较高,基本不含类脂,肽聚糖分子交联度较紧密,故经乙醇处理后,肽聚糖网孔因脱水而明显收缩,使壁的通透性降低所以仍保留结晶紫碘复合物,细胞显紫色。 G-菌:细胞壁薄,肽聚糖含量低,类脂含量高,肽聚糖分子交松散,故经乙醇处理后,壁会出现较大的缝隙,细胞透性增大,结晶紫碘复合物易被洗脱出来,再经番红复染后使细胞显红色。,三、实验器材 1、菌种:普通变形杆菌、表皮葡萄球菌 2、染色剂:简单染色液(吕氏碱性美蓝染液);革兰氏染色液(草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红染液) 3、仪器或其他用具:载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、滤纸等,四、操作步骤 1、简单染色 涂片 干燥固定 染色 1min 水洗 干燥 镜检 2、革兰氏染色 涂片 干燥固定 结晶紫初染 1min 水洗 碘液媒染 1min 水洗 95%乙醇脱色 30sec 水洗 番红复染 1min 水洗 镜检 操作要点:掌握好乙醇脱色时间。,葡萄球菌,杆菌,五、实验数据及处理结果 1、根据油镜观察结果,绘出普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的简单染色形态图。 2、列表简述普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的革兰氏染色油镜观察结果(菌的形态、颜色、革兰氏染色反应)。,六、思考与讨论 1、如果你的涂片未经加热固定,将会出现什么问题?如果加热温度过高、时间太长,又会怎样呢? 2、革兰氏染色时,初染前能加碘液吗?乙醇脱
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