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医学实验基本操作技能讲 稿供医学本科各专业使用 基础医学院实验教学中心 二八年九月第一篇 医学实验基本要求第一章 医学基本操作技能实验教学目的及一般规则【课程目的】了解开设医学实验基本操作技能课程的目的和意义；初步了解医学实验基本操作技能包括的主要内容；掌握实验室的一般规则及安全规则。【课程内容】一、课程简介（一）开设目的及意义医学实验基本操作技能是基础医学的重要组成部分。开设目的：1. 加强医学实验基本操作技能的培训，提高中医院校学生的动手能力； 2. 学习医学实验和科学研究的基本方法，为后续实验课程的开设奠定基础；3. 培养严谨的科学研究态度和实事求是的科学研究精神，为今后的科学研究工作培养良好习惯。 （二）学时安排：共60学时。1理论教授：1次课，4学时： -医学实验基本要求2实验操作：11次课，52学时；（1）生物化学实验基本技能：1次实验（5+5学时）-生物化学基本技能、常用生物化学仪器操作（2）显微形态实验基本技能：3次实验（4学时/实验）-生物显微镜的结构、使用方法-石蜡组织切片、HE染色技术，血涂片制作及瑞特染色技术-血细胞计数（4）机能实验基本技能：6次实验（5学时/实验） -实验动物基本操作1（捉拿固定、编号、给药、处死等）-实验动物基本操作2（麻醉、脱毛、取血、解剖等）-常用动物手术操作技术（手术器械、缝合、打结、拆线）-生物机能实验系统操作技术（BL410、BL420）-急性动物实验的基本技术-蛙实验-急性动物实验的基本技术-兔实验3实验操作考试：1次课，4学时：进行单人、抽签考试。（三）课程内容1医学实验基本要求本内容为该课程中的第一讲，也是唯一的一次课堂理论讲授，主要包括以下两个内容：（1）教学目的及实验规则本内容主要包括三个方面：一是开设本课程的主要目的及意义；二是进入实验室所必须遵守的规则；三是实验室安全守则 （详细内容参考教材第一篇第一章）。（2）实验操作与实验报告本内容主要包括三个内容：一是实验操作过程及实验记录中注意的事项；二是实验结果及误差；三是实验报告的书写及要求 （详细内容参考教材第一篇第二章）。2生物化学实验基本操作技能本内容现被安排为一次实验，该实验主要包括以下内容：（1）生物化学基本技能本内容主要介绍生物化学实验所必须掌握的基本操作技能，主要包括：玻璃仪器的认领、使用和洗涤；常用溶液配制、混匀、沉淀及过滤 （详细内容参考教材第三章第一节）。（2）常用生物化学仪器操作常用生物化学仪器操作主要介绍常用量器的操作使用；各式离心机的操作使用等 （详细内容参考教材第三章第二节）。3显微形态实验基本操作技能显微形态实验基本操作技能现在主要安排三次实验：（1）实验一、生物显微镜的结构、使用方法和镜下绘图要求本次实验包括两部分内容：掌握OLYMPUS CH-20 生物显微镜的结构、使用方法（详细内容参考教材第四章第一节实验一）。掌握光镜下绘图要求 （详细内容参考教材第四章第一节实验一）。（2）实验二、石蜡组织切片、HE染色技术，血涂片制作及瑞特染色技术。本次实验包括三部分内容：了解石蜡组织切片、HE染色技术 （详细内容参考教材第四章第二节实验一和第三节实验一）。掌握血涂片制作及瑞特染色技术 （详细内容参考教材第四章第二节实验三）。人外周血涂片的镜下观察、绘图。（3）实验三、人外周血细胞计数。本次实验包括两部分内容：掌握人外周血细胞计数显微镜计数法（红细胞计数）（参考教材第四章第五节实验二）。掌握人外周血细胞计数显微镜计数法（白细胞计数）（参考教材第四章第五节实验二）。4机能实验操作基本技能（1）实验动物的基本操作方法本节内容先被分为两次实验：实验动物基本操作一：主要让同学们学习掌握常用动物的捉拿固定、性别鉴别与编号方法，以及实验动物给药剂量的计算、给药方法及处死方法等 （详细内容参考教材第五章第一节实验一）。实验动物基本操作二：主要让同学们学习掌握实验动物常用的麻醉、脱毛方法，实验标本的采集方法，常用动物的取血方法以及脏器的辨认 （详细内容参考教材第五章第一节实验二）。（2）机能基本实验常用技术本内容主要包括以下两个实验： 常用动物手术操作技术本实验主要让同学们学习掌握常用实验动物手术器械的辨认、使用，主要包括蛙类实验常用手术器械和哺乳类动物手术器械；以及常用手术的缝合、打结与拆线方法（详细内容参考教材第五章第二节实验一）。 生物机能实验系统操作技术生物机能实验系统是研究生物机能活动的主要设备和手段之一。它可以使研究人员、老师和学生通过该系统观察到各种生物机体内或离体器官中探测到的生物机能信号，同时还可根据使用者的命令对数据进行指定的处理和分析 （详细内容参考教材第五章第二节实验二）。（3）急性动物实验的基本技术本容包括以下两个实验： 蛙实验本实验主要让同学们学习掌握蟾蜍或蛙的捉拿、脑和脊髓的破坏及手术器械的使用方法，同时通过该实验进一步加强对生物机能实验系统的操作练习 （详细内容参考教材第五章第三节实验一）。 兔实验本实验主要让同学们学习掌握家兔的麻醉、脱毛、颈部解剖结构及插管术、血压的测定等基本实验方法，同时进一步掌握压力换能器和生物机能实验系统的使用 （详细内容参考教材第五章第三节实验二）。5考试（1）考试内容本课程为考试课，考试内容包括三个方面：一理论考试，所占比例为30%；二操作考试，所占比例为40%；三平时成绩，所占比例为30%。（2）考试方法理论考试：根据教材和实验指导以及教学过程中教授的内容进行期末结束的笔试考试。考试时间由教务处统一安排；考试题型主要包括：单项选择题、多项选择题、名词解释和问答题等形式。操作考试：根据实验课中开设的实验操作内容，进行单人、抽签考试。平时成绩：主要包括三大部分，一是预习报告，占5%，二是实验报告，占20%，三是出勤情况，占5%。凡是迟到、早退者，每次扣0.5分；凡是旷课2次以上者，取消参加操作和理论考试。二、实验守则(一)实验一般规则（详细内容参考教材第一章第二节）1实验前准备工作（1）思想准备：主要包括：实验开设时间；实验开设内容；进行实验的地点；充足的睡眠；充足的体力；预习实验内容；实验中可能出现的问题以及解决办法；实验室内、外环境等。（2）物质准备：主要包括：实验学习用具；白大衣；预习报告；实验教材或实验指导等。2实验中注意事项（1）严格遵守实验室各项规定；（2）听从老师的安排；（3）认真听讲；（4）认真观察老师的示教操作；（5）积极主动参与实验；（6）规范操作；（7）注意安全；（8）认真记录；（9）注意实验的每一细节，培养严谨的科学态度和实事求是的工作作风；（10）加强团结协作的团队精神等。3实验后工作（1）清点实验物品；（2）刷洗实验物品；（3）整理和清扫实验室；（4）填写各种实验使用纪录；（5）关闭水、电、气开关；（6）关闭门窗；（7）按时完成实验报告等。（二）实验室安全规则（详细内容参考教材第一章第三节）1基本安全规程进入实验室所遵循的“十要”和“十不要”：十要：（1）要熟悉实验室内、外环境 （2）要熟悉常用有害物质的表示 （3）要保持实验台面的整洁 （4）要将长发盘起 （5）配制试剂要在实验台或实验架上进行 （6）要在毒气柜内操作一些有毒试剂的操作 （7）要严格遵守实验室各项规定 （8）要服从实验室老师的安排 （9）要按指定地点存放实验污物 （10）离开实验室要洗手十不要：（1）未经批准不准进入实验室 （2）单独一人不可作危险性实验 （3）精神、身体状态不佳不要做实验 （4）不可在实验室里打闹、奔跑 （5）不可在实验室内进食 （6）不可湿手摸电器 （7）不可穿拖鞋、短裤进入实验室（8）未经批准不可将实验室物品带出实验室 （9）不可俯视或嗅闻化学试剂 （10）遇到紧急情况不可慌乱2仪器使用规程（1）在动用仪器设备前必须认真阅读仪器操作规程，经指导教师同意后方可使用；（2）使用仪器有疑问时应请教指导教师，不可自行勉强操作；（3）实验中要爱护仪器、设备，严格按照操作规程进行操作；（4）与当次实验无关的仪器及设备不得任意动手操作；（5）精密、大型仪器、公用仪器与试剂只能在原处使用，不得随意挪动；（6）实验过程中要注意安全，若仪器设备发生故障或损坏时，要及时报告指导教师，不可擅自拆卸和处理；（7）使用一切电器设备时，要确实检查线路是否正常，电压、电流与功率是否匹配，要小心操作严防触电；（8）凡损坏仪器设备者，应主动向指导教师说明原因并接受检查，填写报损单，根据情况按有关规定赔偿；（9）对违反操作规程或擅自动用其它设备造成损坏者，由事故人作书面检查，赔偿损失，视认识程度和情节轻重，酌情免予或给予处分；（10）仪器使用完毕后，关闭各项程序和开关，必要时填写使用记录。3化学试剂使用规程（1）取试剂前应两次核对标签，以保证试剂或药品名称和浓度准确；（2）从试剂瓶中取出的试剂，不得再倒回原瓶中，若取了过量试剂，可分给其他同学或抛弃；（3）勿将试剂瓶盖接口内部朝下放置而接触到其他表面，以防污染；（4）绝对不允许随意混合各种化学试剂和药品，以免发生意外事故；（5）不可擅自携带化学试剂和药品外离实验室；（6）若需要用吸量管量取试剂时，必须使用橡皮球或定量加液器吸取，严禁用嘴直接吸取；（7）使用剧毒、麻醉、致癌，放射药品等，应严格按照规定的审批手续领取，规范操作，注意安全，废液要妥善处理，用剩的毒、麻药品应如数交还；（8）一切能产生烟雾、毒性、刺激性气体、挥发性有毒物质的实验或腐蚀性气体试剂应放在通风橱内，如实验室无此设备，则必须开窗通风并在远离火源的地方进行等。4易燃易爆物品使用注意事项（1）使用加热的电器(电炉、电热套、电热板)或燃气时要作到火着人在，人走火灭；（2）点燃的火柴用后立即熄灭，不得乱扔；（3）使用易燃试剂时要特别注意远离火源，加强空气流通，用毕立即盖紧瓶塞；（4）严禁在有火源的地方倾倒易燃试剂；（5）严禁把这些易燃试剂放在烧杯等广口器皿内直接在火上加热；（6）钾、钠和白磷等暴露在空气中易燃烧，所以钾、钠应保存在煤油中，白磷则可保存在水中；（7）酒精灯在添加酒精时，应将灯焰先行熄灭，酒精添加切勿过满；引燃酒精灯时，必须用火柴或纸片引燃之，切勿将酒精灯直接持至另一已燃着的灯焰上引燃；（8）不纯的氢气遇火易爆炸，操作时必须严禁接近明火。在点燃前，必须先检查并确保纯度；（9）银氨溶液不能留存，因久置后会变成氮化银也易爆炸；（10）某些强氧化剂(如氯酸钾、硝酸钾、高锰酸钾等)或其混合物不能研磨，否则将引起爆炸。5放射性实验室的安全防护规则（1）进入实验室前一般应先通风；（2）进入实验室必须穿戴防护衣帽、眼镜等；（3）严格遵守放射源领用制度和专人专管制度；（4）实验室内应明显划分活性区和非活性区，严禁在实验室内进食、饮水、吸烟和存放食物；（5）所有操作要规范，放射性物质必须作好放射性标志；（6）在进行强放射性操作前，一般都要作无放射性物质的模拟实验(又叫冷实验)，待操作熟练之后才能进行放射性的实验；（7）放射性废物必须同普通垃圾分别存放，并严格标识；（8）实验中发生放射性事故时，应保持镇静，立即报告指导教师，在教师的指导下进行放射性去污；（9）工作人员的皮肤暴露部位有伤口未愈时，一般要暂停放射性操作；（10）实验室要保持经常的清洁和整齐，要定期用剂量仪进行检测，发现沾污要及时去污、清洗；（11）工作人员离开实验室前，必须仔细洗手，洗完后要经仪器测量，达到本底水平方可离开。（三）实验室废物处理1实验室废物处理应遵循的原则（1）集中回收，分类处理；（2）降低毒性或腐蚀性，减少污染，达标排放；（3）尽量重新回收和再利用。2实验室废气排放的主要办法物理处理方法：(1)吸附法；(2)溶解法；(3)回流法；(4)袋装法；(5)稀释法；(6)掩埋法等。化学处理方法：(1)燃烧法； (2)沉淀法； (3)中和法；(4)还原法；(5)生物法等。3实验室废液处理原则及办法（1）实验室废液处理原则：分类存放；严格标示；分类处理；严禁直接注入下水道。（2）实验室废液标示的内容：废弃液体名称； 废弃液体浓度；废弃时间；废弃液体组成成分；废弃人签名。（3）实验室废液处理常用方法：稀释法；中和法；沉淀法；水解法；离子交换法；焚烧法；吸附法；氧化法；蒸馏法；萃取法等。4实验废弃动物的处理原则：死、活动物分别放置；死亡动物确保死亡；统一放置，统一处理；不许带出实验室；严禁出售和食用。（四）实验室常见事故处理1实验中意外事故处理原则（1）沉着冷静不慌乱；（2）紧急处理并疏散；（3）报告老师或报警；（4）量力而行保安全。2玻璃仪器伤害的处理处理原则及方法：清理出破碎玻璃；处理伤口：轻者药水涂抹或消毒包扎；重者送医院处理。3烫伤的处理（1）立即使伤处降温；（2）伤处皮肤未破时可涂擦饱和NaHCO3溶液或用NaHCO3粉调成糊状敷于伤处，也可涂抹獾油或烫伤膏；（3）如果伤处皮肤已破，可涂些紫药水或5的苦味酸溶液涂抹伤口；（4）严重者送医院救治。4腐蚀剂致伤的处理（1）立即先用大量清水冲洗；（2）再用具有中和作用的溶液冲洗；（3）再用清水冲洗；（4）可涂少许油膏保护局部皮肤；（5）严重者送医院诊治。5触电的处理（1）立即切断电源；（2）使触电者尽快脱离电源；（3）保证呼吸通畅；（4）必要时进行人工呼吸；（5）严重时应立即送医院抢救。6火灾的处理（1）火灾的紧急处理：迅速报警；转移易燃易爆物品；相应手段灭火；安全疏散。（2）那些物质燃烧后不宜使用水进行灭火：汽油、乙醚、甲苯等有机溶剂；酒精及其它可溶于水的易燃液体；电器设备所引起的火灾；活泼金属(如钾、钠等)及磷化物与水接触易引发火灾。（3）那些物质燃烧后宜使用水进行灭火：纸张；棉花；纺织品；木材；易燃气体等。（4）衣服着火后应注意的事项：衣服被燃着时，切忌带火奔走；未及皮肤的衣服着火时，可赶快脱下衣服压灭火焰，或用专用防火布覆盖着火处；伤及皮肤时，可以其他衣物等蘸上水包裹身体，或躺在地上滚动以灭火。7实验动物咬伤的处理（1）立即消毒伤口；（2）必要时包扎伤口；（3）必要时可注射疫苗；（4）严重时送医院处理。第二章 实验操作与实验报告【课程目的】掌握实验操作的基本要求；了解实验结果处理中常用的一些术语；掌握实验报告的规范书写要求。【课程内容】一、实验操作基本要求（一）实验前准备工作1集体准备工作（1）按照学号进行分室和分组；（2）每个实验室不超过30人；（3）每个实验室推选出一位室长：室长主要负责与带教老师的联系、沟通（第一次上课时，要交给实验带教老师一份本实验室的学生名单，记好带课老师的联系电话）；实验课的点名；实验预习报告和实验报告的收缴；实验中存在问题的反馈；实验室值日小组的安排；本实验室实验器材的领用、交还及赔偿等工作。（4）实验室分组：每实验室可按4-5人分为一组；每组推选一位组长；组长主要负责本实验小组的实验预习报告和实验报告的收缴；实验中本实验小组存在问题的反馈；本实验小组实验器材的领用、交还及赔偿；本实验小组值日生的安排等工作。2个人准备工作（1）认真阅读教材和实验指导用书（2）初步了解和掌握实验内容和实验方法步骤（3）发现问题和初步探讨解决问题的方法（4）认真书写预习报告 （5）做好实验中所需的各种物质准备（二）实验过程要求1积极主动参与每次实验2注重培养科学严谨、实事求是的工作作风3自觉、认真地完成各项技能训练4认真做好原始实验记录5按时完成实验报告（三）原始实验记录包括的内容1时间和地点； 2项目来源、编号和名称；3重要影响因素的记录； 4实验过程的设计思路、目标和参考文献； 5实验所需物品资料的相关信息； 6实验步骤、方法及实验结果；7统计学处理方法；8实验失败原因及分析等。二、实验结果的处理与误差（一）实验误差1概念：误差（error）一般指系统误差，即一个量在测量、计算或观察过程中由于某些错误或通常由于某些不可控制因素的影响，而造成偏离真值的数量。又称变异（variance）或差异（discrepancy），亦即测定结果与真值的不符合性。2分类：（1）系统误差 （2）随机误差 （3）过失误差3表示方法及计算方法（二）准确度、精确度和精密度1准确度：准确度是指在一定测量条件下，观测值及其函数的估值与其真值的偏离程度。2精确度：精确度是指指定数字时的准确性，即表达数字时所带的有效位数。3精密度：精密度是指一组测量值之间相互吻合的程度，即重复测量之间相互接近的程度。（三）有效数字1概念：有效数字也称有效位数，用来表示测量值或基于测量值的计算结果的精确度。它由确定数字和末位不确定数字组成。2位数确定方法及原则（1）以“0”开头的小数，开头的“0”都不记为有效数字。（2）小数末位的“0”都记为有效数字。（3）没有小数点的数字，末尾的“0”无法确定是否为有效数字，一般用科学计数法反映其有效数字。3运算原则（1）做加减计算时，以小数点的后位数最少的数字为准。（2）乘除法计算时，有效数字的位数取决于有效数字位数最少的数字。（3）在计算平均值时，求四个或四个以上准确度接近的近似值的平均值时，则平均值的有效位数，可较原数据的有效位数多一位。（4）有效数字的规则不适用于确切数。4数的修约原则（1）数的修约一般遵守四舍六入五留双的规则。（2）在作多步计算时，应保留中间步骤的非有效数字，以减小最后结果的误差。三、实验报告的书写规范（一）实验报告包括内容1实验目的2实验原理3实验材料4实验方法与操作步骤5结果6讨论7致谢8参考文献9其他根据实验不同要求应填写的内容（二）实验报告格式实验报告的各式根据实验内容不同，具体的要求格式也不同。详细要求见于各实验老师的要求。第二篇 医学实验基本操作技能第三章 生物化学和分子生物学实验基本操作技能实验一、常用玻璃仪器及器皿的使用、洗涤和干燥【实验目的】熟悉生物化学实验室规则和要求；熟悉常用玻璃仪器及器皿名称和规格，了解使用注意事项；学习并练习常用仪器的洗涤和干燥方法。【实验操作要点和注意事项】1常用玻璃仪器及器皿的使用玻璃是由二氧化硅和碳酸钠等原料在高温下熔炼而成，抗酸，不耐碱，对大部分化学试剂稳定。（）容器类 仪器规格一般用途使用方法和注意事项普通试管、离心试管有刻度的按容积（mL）分；无刻度用管口直径管长（mm）表示。1.反应容器；2.离心试管用于沉淀分离。1.反应液体不超过试管容积的1/2，加热时不超过1/3； 2.加热液体时，管口不要对人； 3.离心管只能用于水浴加热。烧杯以容积（mL）表示。 反应容器或作配制溶液的容器。1.反应液体不能超过烧杯用量的2/3；2.加热时放在石棉网上。锥形烧瓶以容积（mL）表示。1.反应容器；2.滴定操作。同上滴管由尖嘴玻璃管和橡胶乳头构成吸取少量（数滴或1-2mL）试剂1.溶液不得吸进橡皮头；2.用后立即洗净内、外管壁。滴瓶 以容积(mL)表示，分无色、棕色两种。盛放液体试剂和溶液。1.不能加热；2.棕色瓶盛放见光易分解或不稳定的试剂；3.取用试剂时，滴管要保持垂直，不接触接受容器内壁。细口瓶、广口瓶以容积表示。 广口瓶盛放固体试剂，细口瓶盛放液体试剂和溶液。1.不能直接加热；2.取用试剂时，瓶盖倒放在桌上；3.盛放碱液时用橡皮塞。 烧瓶以容积(mL)表示在常温或加热条件下作反应容器。盛放液体量不能超过烧瓶容量的2/3。洗气瓶以容积(mL)表示。净化气体用1.接法要正确；2.洗涤液注入容器高度的1/3，不得超过1/2。（）量器类 仪器规格一般用途使用方法和注意事项量筒以所能量度的最大容积（mL）表示。量取一定体积的液体。不能作为反应容器，不能加热，不可量热的液体。容量瓶以容积(mL)表示。配制标准溶液用。 1.溶质先在烧杯内全部溶解，然后移入容量瓶；2.不能加热，不能用毛刷洗刷。吸量管、移液管以所能量度的最大容积（mL）表示。 精确移取一定体积的液体用。1.不能在烘箱中烘干，不能加热；2.吸取血液、尿、组织样品及粘稠试剂的吸量管，用后应及时用自来水冲洗干净。微量移液器 1、2、10、20、100、200、1000 ul（单位：ul）。用于准确移取一定体积的溶液，尤其是较小体积的溶液。1.连续按压数次，以调节空气；2.调节体积至所需的刻度；3.接上Tip头，注意密封。（）漏斗类 仪器规格一般用途使用方法和注意事项普通漏斗以直径(cm)表示。 1.过滤；2.引导溶液入小口容器中。1.不能用火直接灼烧；2.过滤时，漏斗颈尖端必须紧靠承接滤液的容器壁。分液漏斗和滴液漏斗以容积(mL)、漏斗颈长短表示。用于液体的分离、洗涤和萃取。1.不能加热；2.分液时，下层液体从漏斗管流出，上层液体从上口倒出。吸滤瓶和布式漏斗布式漏斗：磁质或玻璃质，以容量(mL)或斗径(cm)表示。吸滤瓶：以容积(mL)表示。两者配套，用于粗颗粒沉淀的减压过滤。1.滤纸要略小于漏斗的内径；2.先开抽气管，再过滤。过滤完毕后，先分开抽气管与抽滤瓶的连接处，后关抽气管。砂芯漏斗漏斗为玻璃质。砂芯滤板为烧结陶瓷。用作细颗粒沉淀以及细菌的分离。不能用于含氢氟酸、浓碱液及活性炭等物质体系的分离。 （）专用器皿 仪器规格一般用途使用方法和注意事项表面皿以口径(cm)表示。 1.用来盖在蒸发皿、烧杯等容器上。2.作为称量试剂的容器。1.不能用火直接加热；2.作盖用时，其直径应比被盖容器略大；3.用于称量时应洗净烘干。培养皿以玻璃底盖外径(cm)表示。放置固体样品。不能加热。蒸发皿瓷质，以上口直径(cm)表示。1.反应容器；2.灼烧固体。 注意不要碰碎，高温时不要用冷水去洗，防止破裂。干燥器以内径表示，分普通、真空干燥。存放物品，以免物品吸收水汽。1.干燥器内的干燥剂按时更换；2.小心盖子滑动而打破。 坩埚和坩埚钳瓷质。灼烧固体用。1.灼烧时放在泥三角上，直接用火烧；2.加热时，要用坩埚钳拿取。研钵瓷质，以钵口直径（mm）表示研磨固体。1.不能用火直接加热； 2.不能代替作反应容器用。白瓷板瓷质。按凹穴的多少分有四穴、六穴、十二穴等。 进行点滴反应，观察沉淀生成和颜色变化。 1.不能加热；2.不能用于含氢氟酸溶液和浓碱液的反应。酒精灯玻璃制品。用作直接加热。1.绝对禁止向燃着的酒精灯里添加酒精；2.绝对禁止用酒精灯引燃另一只酒精灯；3.必须用灯帽盖灭。泥三角用铁丝弯成，套以瓷管。坩埚加热时的承放者。坩埚搁在泥三角上所露出的上部，不超过本身高度的1/3。弹簧夹铁或铜制品。用于蒸馏水贮瓶或实验装置中沟通或关闭流体的通路。应使胶管夹在弹簧夹的中间部分。玻璃仪器的洗涤 （）常用洗涤剂：洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污粉-用于一般去污。强酸，强碱，尿素-去除蛋白质，核酸。铬酸洗液-去除血浆等。水（自来水，蒸馏水）-用来冲洗容器。（）常用洗涤液的配制：铬酸洗液： 将25克K2Cr2O7溶于50ml 水中，冷却后向此溶液中慢慢加入浓硫酸至1000ml.浓硫酸+双氧水 适用于精密玻璃仪器如光散射石英样品池、石英比色皿、毛细管等的清洗。效果与铬酸洗液相同。 （）洗涤仪器的方法： 倒出废液水洗洗涤剂洗水洗蒸馏水洗洗涤原则：少量多次，不挂水珠。干燥仪器的方法有：晾干、烤干、吹干、烘干、有机溶剂快速干燥。 实验二、常用生物化学仪器的操作【实验目的】掌握常用生化仪器的正确使用和维护方法。【实验要点和注意事项】 仪 器一般用途使用方法和注意事项水浴锅水浴加热1.加热器皿没于锅中2/3；2.常补充水，防止锅内水烧干。3.使用完毕，将锅内剩余水倒出，并擦干。快速混匀器使容器内的溶液快速混匀1.接通外电源，合上电源开关，指示灯亮，混匀旋转盘处于回旋工作状态；2.以装溶液器底部与旋转盘接触，容器内的溶液开始混匀用接触压力大小调节混匀速度；3.混匀完毕，关闭电源开关，切断电源。台式天平（台秤）粗略的称量，能称准至0.1g。1.检查天平的零点； 2.称量纸的折叠；3.药品的称量； 4.称量完毕后检查。离心机分离密度不同的物质。1.溶液量不应超过离心管总体积的2/3；2.离心管对称放入离心机管套插孔中；3.用调速旋钮沿顺时针方向缓慢调速，观察转速，达到转速后开始计时。实验三、准确量器的操作及溶液的配制【实验目的】正确选择移液器并掌握常用移液器的使用方法；学会使用量筒、吸量管、容量瓶和台秤；掌握溶液的质量分数、质量摩尔浓度、物质的量浓度的概念和计算方法；掌握一般溶液和特殊溶液的配制方法和基本操作。【实验要点和注意事项】 一、浓度的表示方法（一）用固体配制1质量分数(x)或(w) 2质量摩尔浓度(m或b) 3物质的量浓度(c) （二） 用液体或浓溶液配制1质量分数（十字交叉法）2物质的量浓度(c) 如浓H2SO4 = 1.84， X = 98 % 注：市售浓H2SO4 c = 18.4 mol.L-1 浓HCl c = 12 mol.L-1 浓H3PO4 c = 14.7 mol.L-1 浓HNO3 c = 16 mol.L-1 浓HAc c = 17.5 mol.L-1 浓氨水 c = 14.8 mol.L-1（三）配制方法1精确配制仪器：台秤（称固体）、量筒、量杯、烧杯、搅棒。方法：用固体配制：称固体溶解定容（冷后） 用液体配制：量浓溶液混合定容（冷后）2准确配制仪器：分析天平、吸量管、移液管、容量瓶。方法：用固体配制：精确称量溶解定容装瓶二、溶液的配置实例1用CuSO45H2O配制0.2mol.L-1 CuSO4溶液50mL。(MCuSO45H2O = 249.68) 计算：配制：研细称量（用台秤）溶解定容（量筒、量杯、带刻度烧杯均可）回收到指定容器中。2配制2mol.L-1 NaOH溶液100mL。计算：配制：称量（用玻璃器皿）溶解冷却定容回收。注：NaOH不用研细，故极易溶。3用浓H2SO4配制3mol.L-1 H2SO4溶液50mL。计算： 配制：量取浓H2SO4（用10ml量筒）混合（加入适量水中）冷却定容回收。4由2mol.L-1 HAc溶液配制50ml 0.200mol.L-1 HAc溶液。计算： 配制：吸取浓HAc5.0mL（用吸量管）注入容量瓶稀释摇晃定容回收。第四章 显微形态实验基本操作技能实验一、普通光学显微镜的构造、使用方法和镜下绘图要求【实验目的】 掌握普通光学显微镜的构造、使用方法和光镜下手工绘图技术。【实验操作要点和注意事项】1以OLYMPUS CH-20显微镜为例说明普通生物显微镜的基本结构。OLYMPUS CH-20普通生物显微镜的基本结构可分为三部分：第一部分是光学部分，包括物镜、目镜、镜筒等。物镜：由几块透镜组成，分干物镜(4、10为低倍物镜，40为高倍物镜)和浸油物镜(100为油镜)。目镜：目镜的作用是把物镜放大的实像再放大一次。 第二部分是照明部分，包括光源和集光器。光源：自备光源由显微镜自带的灯泡和亮度调节旋纽构成。集光器：包括聚光镜、光栅（也称光圈）、滤光片。第三部分是机械部分，包括镜头转换器、粗细调节器、载物台、持片器、载物台移动旋钮、聚光镜升降旋纽、镜臂和镜座。镜座：起支持作用，内装有照明光源。镜臂：固定有载物台以及调焦装置，下接物镜转换器。载物台：台中央有通光孔，台上有标本夹持器，和标本推动器。调焦装置：通过升降载物台来调节物镜和样品之间的距离，包括粗调焦螺旋和细调焦螺旋。 2以OLYMPUS CH-20显微镜为例说明普通生物显微镜的使用方法。 （1）正确的移动、放置显微镜，规范的观察姿势：显微镜置于观察者的正前方，距离实验台边缘约5厘米，右侧放记录本或绘图纸等。（2）开机：确认电源插头与显微镜接合牢固、显微镜电源开关在关闭位置和光亮度调节旋纽在最小位置，然后才能打开电源开关，调节光亮度调节旋纽至中等位置。（3）调光：旋转物镜旋转器使低倍物镜（4倍）对准通光孔，升起聚光镜至载物台平面，打开光栅（也称光圈）至最大，使光量充足。（4）放置切片：切片正面朝上放置于载物台上，用持片器卡住玻片。右手调节载物台移动旋纽，使被观察组织对准通光孔。 （5）低倍镜观察：眼睛置于侧面，调节粗调焦旋纽，升起载物台至最高（OLYMPUS CH-20有自动保护功能）。然后眼睛置于目镜上，调节粗调焦旋纽，使载物台缓慢下降，看到组织后，再调节细调焦旋纽，直至观察到清晰的组织图象。然后测览整张切片。 （6）调节目距：双眼置于目镜上，推动目镜镜筒上的目距调节推杆左右移动，使目距与瞳距一致，即双眼视野重叠为一个清晰视野。 （7）高倍镜观察：低倍镜下将需要放大观察的部分移入视野中央，旋转物镜转换器，使高倍物镜对准通光孔，只需稍稍旋动细调焦旋纽，就能得到清楚的物像了。（8）调节双眼屈光度（双眼清晰）：使用高倍物镜（40倍），仅睁开右眼，调节细调焦旋纽至右眼视野清晰，然后闭上右眼，仅睁开左眼，调节左目镜上的屈光度补偿旋纽至左眼视野清晰，此时双眼清晰。（9）正确擦拭显微镜和切片：干的擦镜纸可用于擦拭目镜、物镜、切片和光源上的灰尘；滴加擦镜液（乙醚液）的擦镜纸仅用于擦拭物镜镜头、切片上的油污。（10）更换切片：在观察完一张切片后，将高倍镜转换至低倍镜后，再更换切片，以免损坏切片和镜头。 （11）关闭显微镜：依次降低载物台，低倍物镜对准通光孔，取下组织切片，调节光亮度致最小，关闭开关，拔下电源插头，将镜体各部擦拭干净，盘好电源线，罩上防尘罩。3使用显微镜的粗、细调焦旋纽时需要注意的安全事项。以OLYMPUS CH-20显微镜为例，先安放好切片，在旋转粗、细调焦旋纽升起载物台时，使用者双眼必须在侧面观察，目光须与载物台的高度保持水平，直至将载物台升到最高（OLYMPUS CH-20显微镜有自动保护功能，不会压坏物镜镜头）。严禁双眼在目镜上观察时升高载物台，这样会将切片标本压坏，甚至损坏物镜镜头，用油镜时更应特别注意。在旋转粗调焦旋纽降低载物台时，使用者双眼才可以在目镜上观察，看到组织后，再调节细调焦旋纽，直至观察到清晰的组织图象。4光学显微镜的镜下绘图基本要求。（1）准备好HB铅笔l支，红蓝两色铅笔1支，橡皮擦、直尺（或三角板）、削笔刀、绘图纸。 （2）作图前应仔细观察标本或切片，要求依照镜下结构绘制，图中各构造（细胞和组织）的大小应与镜下成比例。（3）使用双目显微镜时，双眼睁开，两手并用，边观察，边绘图。使用单目显微镜时一般左眼观察标本，右眼注视着右手所绘的图。（4）医学镜下图（组织图）为点线图，一般以点和线表示组织结构，但也可涂抹出颜色均匀的特殊结构（如细胞浆和玻璃样变性组织等）。（5）所绘图不需添加边框，图的位置一般偏于纸的左侧，右侧用做引线，引线的末端注字，引线应互相平行，注字排列整齐。（6）图的上端注明标本名称，绘图名称写在该图下面，写出染色方法和放大倍数（目镜倍数物镜倍数）。较大的图（组织图）一页一般只绘一副，较小的图（细胞图）一页可绘数个。（7）实验报告册上方需写明实验室名称、实验组号、实验名称，下方注明实验日期、页码等。实验二、石蜡切片和HE染色技术及血涂片制作与观察【实验目的】 了解石蜡组织切片、染色的制作过程；掌握血涂片的制作与瑞特染色方法；掌握血细胞的形态特点和镜下绘图方法。【实验操作要点和注意事项】 1组织常规石蜡切片技术的主要程序。（1）取材：越快越好，实体组织以不超过 1cm1cm0.5 cm为宜。（2）固定：迅速投入到固定液（10福尔马林）中，固定24小时。（3）浸洗：可采用自来水、蒸馏水等冲洗。 （4）脱水：用升梯度乙醇（708095100)进行脱水。（5）透明：用二甲苯透明23次，各半小时。（6）浸蜡：60石蜡温箱中浸3次，各1小时。 （7）包埋：将材料放入包埋框内（剖面向下），用石蜡进行包埋。 （8）切片：用切片机将蜡块切成薄片，切片厚度为46m左右。 （9）贴片：蜡带放入40水浴箱中展开，贴于载玻片上，4045烘干半小时。（10）染色：先用二甲苯脱蜡，然后降梯度乙醇（10095908070）除去二甲苯，再入蒸馏水冲洗，方可染色（常用HE染色）。（11）脱水、透明和封片：用升梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。2常规染色（HE染色）技术的基本步骤。（1）切片入二甲苯脱蜡2次，各510min。（2）入无水乙醇2次，各2min，95乙醇逐级降梯度至80乙醇，自来水水洗。（3）蒸馏水洗后入苏木素染色210min，自来水水洗。（4）0.51盐酸酒精分化110s，自来水水洗。（5）自来水水洗显蓝l0min2h。（6）伊红染色510min。（7）80、90、95乙醇脱水30s，100乙醇脱水2次l5min。（8）石炭酸二甲苯透明12min，二甲苯3次2min，中性树胶封片。3常规染色（HE染色）技术的注意事项。（1）固定要及时；（2）脱水浸蜡要充分；（3）脱蜡必须彻底；（4）苏木素染色时间与染色液的成熟度、组织标本的新旧及环境温度有关；（5）盐酸酒精分化是染色的关健；（6）返蓝：长时间流水冲洗返蓝是长期保存切片染色的保证；（7）中性树胶封固：封固剂的浓度应适宜，封固剂的量不宜过多；（8）去甲醛色素：长期固定的组织染色前须脱色素以免影响观片。4外周血液涂片的制作步骤。（1）采血：75乙醇消毒手指，用采血针迅速刺破手指皮肤，第一滴血用棉签擦去不要。 （2）涂片：将流出的第二滴血滴在（或转移到）玻片右端。取另一玻片置于血滴左侧，稍向后退，血液就充满在两玻片的斜角中，再以3040角向左方均匀推出，即涂成血液薄膜。 （3）染色：待涂片干燥后（室温58分钟），在欲染色的区域（一般选择在血液薄膜的中间一段），用特种铅笔画一圆框，加数滴（2-4滴）瑞特染液在血膜上，静置染色35分钟，然后滴加等量蒸馏水静置46分钟后，用蒸馏水或自来水将多余染液慢慢冲去，即可观察。 （4）封片：涂片完全干燥后，可用中性树胶或浓香柏油封片。滴加一滴中性树胶，然后小心加盖一张盖玻片，晾干，贴上标签，长期保存。【本次实验报告的书写和绘图要求】实验二、石蜡切片和HE染色技术及血涂片制作与观察作业要求：绘出40倍物镜下，血涂片中的主要血细胞，每种细胞绘2-3个不同形态的典型细胞（注意细胞的形态、胞浆的颜色、核的形状，细胞颜色应真实，大小比例应适当）。涂片名称：外周血涂片（瑞特染色） 红细胞 中性粒细胞 淋巴细胞 血小板（单核细胞）（嗜酸性粒细胞）（嗜碱性粒细胞）外周血常见血细胞，瑞特染色，400倍实验三、人外周血细胞计数【实验目的】 掌握人外周血红细胞计数、白细胞计数的方法及操作，了解其临床意义。【实验操作要点和注意事项】1外周血红细胞计数显微镜计数法的操作流程。（1）制备红细胞稀释液：用抗凝采血管在经酒精消毒过的上臂正中静脉采血1-2ml，立即颠倒混匀；然后用移液器移取抗凝血20l加入盛有4ml生理盐水的试管中，颠倒混匀。（第二种方法：以75乙醇擦洗消毒手指，用采血针迅速刺破皮肤，擦去第一滴血不用。用吸血管准确吸血10l，吹入装有2ml生理盐水的试管中，混匀。）（2）加样：将细胞计数板上的盖玻片盖好（注意盖玻片的位置应适当），然后用移液器吸取10l红细胞稀释液加入到细胞计数板的盖玻片旁，使红细胞稀释液自动充满细胞计数池，切勿有气泡。（3）计数：细胞计数板水平放置2分钟，待细胞下沉。把显微镜调整到适宜状态（光圈关闭到较小位置，灯泡亮度调整到中等亮度，升起聚光镜），用低倍镜（10倍物镜）找到细胞计数池的方格线（折光性较强的规则分布细线）。计算中央一大格内四角和中央五个中格内的全部红细胞数（可以根据格线是双线还是单线来判断中格的位置和范围）。对于压线细胞的计数法，采用数两边舍两边的方法。2外周血红细胞计数显微镜计数法的红细胞计数公式。红细胞计数公式(细胞/l)： 红细胞数/l = 5个中方格中的细胞总数/体积稀释倍数 = N/0.02 400 = N20000 = 2Nl04 红细胞数l = ?l012 红细胞数L。 N = 5个中格内的红细胞总数= N1+N2+N3+N4+N5 。注：计数时，数中央大方格中5个中格，即1/5个大方格体积，即0.1mm3的1/5=0.02l（mm3）。同时血液经200倍稀释（抗凝血20l加入生理盐水4ml混匀）。3外周血白细胞计数显微镜计数法的操作流程。（1）制备白细胞稀释液：用抗凝采血管在经酒精消毒过的上臂正中静脉采血1-2ml，立即颠倒混匀；然后用移液器移取抗凝血200l加入盛有4ml稀释液（80l冰醋酸加入4ml蒸馏水中）的试管中，颠倒混匀。（第二种方法：用lml吸管吸取0.2ml稀释液于康氏度管中，自手指吸取血10l，拭去管外血迹，加入管内稀释液中混匀）。（2）加样：将细胞计数板上的盖玻片盖好（注意盖玻片的位置应适当），然后用移液器吸取10l白细胞稀释液加入到细胞计数板的盖玻片旁，使白细胞稀释液自动充满细胞计数池，切勿有气泡。（3）计数：细胞计数板水平放置2分钟，待细胞下沉。把显微镜调整到适宜状态（光圈关闭到较小位置，灯泡亮度调整到中等亮度，升起聚光镜），用低倍镜（10倍物镜）找到细胞计数池的方格线（折光性较强的规则分布细线）。计算四角4个大方格内的全部白细胞数（可以根据大格周围是长方形还是正方形格子，以及长方形格子方向来判断大格的位置和范围）。对于压线细胞的计数法，采用数两边舍两边的方法。4外周血白细胞计数显微镜计数法的白细胞计数公式。白细胞计数公式(细胞/l)： 白细胞数/l = 4个大方格中的白细胞总数/体积稀释倍数 = M/0.4 20 = M50 个白细胞数l。 M= 4个大方格中的白细胞总数 = M1+M2+M3+M4 。注：四角4个大方格的总体积为4 0.1mm3=0.4l（mm3），同时血液经20倍稀释（血10l加入200l稀释液中）。 【本次实验报告书写和绘图要求】红细胞计数显微镜计数法绘图要求：画出10倍物镜下，细胞计数板中央大方格的中间中方格的格线和红细胞实际分布图，并计算该血样的红细胞数。1细胞计数板中央大方格的中间中方格内的红细胞分布图：1000.05mm2细胞计数板中央大方格的四角和中间5个中方格内的红细胞数分别为：N1、N2、N3、N4、N5（写出具体数字，例如81、76、89、85、92）。红细胞计数公式(细胞/l)：红细胞数/l = 5个中方格中的红细胞总数/体积稀释倍数 = N/0.02 400 = N20000 = 2Nl04 红细胞数l。 =