染色法、培养基和(微生物检验)试剂配制作业指导书.doc

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戏藽肚修改记录单版本时间简述A2003-11-15新发行A2004-06-02品控部改为品质部染色法、培养基和（微生物检验）试剂配制作业指导书1 目的对染色法、培养基和试剂配制方法作出明确规定，为检测结果的准确性提供最基本的保证。2 范围适用于微生物检验。3 职责 3.1微检人员负责培养基、试剂配制。3.2微检人员掌握微生物的染色方法。4 培养基和试剂配制名称、用途名称用途4.1 革兰氏染色液微生物染色4.2 营养琼脂细菌培养和细菌总数测定4.3 孟加拉红培养基霉菌、酵母菌计数4.4 乳糖胆盐发酵管大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定4.5 乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用4.6 三糖铁琼脂肠杆菌科细菌的生化反应筛选4.7 伊红美兰琼脂分离肠道致病菌。4.8 缓冲蛋白胨水沙门氏菌检验中的前增菌4.9 四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液沙门氏菌检验中的前增菌4.10 GN增菌液志贺氏菌的前增菌4.11 亚硒酸盐胱氨酸增菌液沙门氏菌选择性增菌培养4.12 SS琼脂沙门氏菌、志贺氏菌的分离4.13 V-P半固体琼脂细菌检验的V-P试验4.14 7.5%氯化钠肉汤金黄色葡萄球菌的增菌培养4.15 Baird-Parker培养基金黄色葡萄球菌的检验4.16 酸性肉汤酸性罐头食品商业无菌检验4.17 尿素琼脂基础细菌检验中的尿素酶试验4.18 赖氨酸脱羧酶培养基细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验4.19 吲哚培养基细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤4.20 硝酸盐氰化钾培养基细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验4.21 生理盐水检样的溶解与稀释5 具体内容5.1革兰氏染色法5.1.1革兰氏染色液5.1.1.1结晶紫染色液成份： 结晶紫 1.0g95%乙醇 20.0ml1%草酸铵水溶液 80.0ml5.1.1.2革兰氏碘液成份： 碘 1.0g碘化钾 2.0g蒸馏水 300.0ml5.1.1.3 95%乙醇5.1.1.4沙黄复染液 成份： 沙黄 0.25g95%乙醇 10.0ml 蒸馏水 90.0ml 5.1.2染色法5.1.2.1将涂片在火焰上固定。5.1.2.2初染：滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。5.1.2.3媒染：滴加革兰氏碘液，作用1 min，水洗。5.1.2.4脱色：滴加95%乙醇脱色，水洗；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s，水洗。5.1.2.5复染：滴加沙黄复染液，染1min，水洗，待干，镜检。5.1.2.6结果判定：革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。5.2一般培养基和专用培养基5.2.1营养琼脂5.2.1.1用途：用于一般细菌培养及细菌总数测定。5.2.2.2成份（g/L）： 蛋白胨 10.0 牛肉粉 3.0 氯化钠 5.0 琼脂 15.0 PH7.30.15.2.2.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，12115 min高压灭菌备用。5.2.2.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.2孟加拉红培养基5.2.2.1用途：用于粮食、食品、饮料中霉菌、酵母菌计数。5.2.2.2成份（g/L）： 蛋白胨 5.0 葡萄糖 10.0 磷酸二氢钾 1.0 硫酸镁 0.5 孟加拉红 0.03 氯霉菌 0.1 琼脂 15.05.2.2.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，12120 min高压灭菌备用。5.2.2.4注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。5.2.3乳糖胆盐发酵管5.2.3.1用途：用于大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定。5.2.3.2成份（g/L）： 蛋白胨 20.0 胆盐 3.0 乳糖 5.0 溴甲酚紫 0.01PH7.40.15.2.3.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，11515min高压灭菌，双料乳糖胆盐发酵管除纯水外，其它成份加倍。5.2.3.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.4乳糖复发酵管5.2.4.1用途：供大肠菌群证实试验用。5.2.4.2成份（g/L）： 蛋白胨 20.0 乳糖 10.0 溴甲酚紫 0.01PH7.40.15.2.4.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装10ml于有倒立发酵管的试管中，11515min高压灭菌备用。5.2.4.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.5三糖铁琼脂5.2.5.1用途：主要用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选。5.2.5.2成份（g/L）： 蛋白胨 20.0 酚红 0.025 牛肉膏 3.0 氯化钠 5.0 乳糖 10.0 硫酸亚铁铵(6H2O) 0.5 蔗糖 10.0 硫代硫酸钠 0.5 琼脂 12.0 葡萄糖 1.0PH7.40.15.2.5.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至溶解，分装试管，11515min高压灭菌制成高层斜面备用。5.2.5.4注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。5.2.6伊红美兰琼脂5.2.6.1用途：弱选择性培养基，用于分离肠道致病菌。5.2.6.2成份（g/L）： 蛋白胨 10.0 乳糖 10.0 磷酸氢二钾 2.0 琼脂 15.0 伊红 0.4 美兰 0.065PH7.10.25.2.6.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热溶解，12115min高压灭菌，冷至55倾注平板备用。5.2.6.4注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。实施纠正措施5.2.7缓冲蛋白胨水5.2.7.1用途：用于沙门氏菌检验中的前增菌。5.2.7.2成份（g/L）： 蛋白胨 10.0 氯化钠 5.0 Na2HPO4(12H2O) 9.0 KH2PO4 1.5最终PH7.20.15.2.7.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，每瓶225ml，12115min高压灭菌备用。5.2.7.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.8四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液5.2.8.1用途：用于沙门氏菌检验中前增菌。5.2.8.2成份（g/L）：A基础培养基多胨或胨 5.0g胆盐 1.0g碳酸钙 10.0g硫代硫酸钠 30.0g蒸馏水 1000mlB碘溶液碘 5.0g碘化钾 6.0g蒸馏水 20ml5.2.8.3制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100 ml。分装时应随时震荡，使其中的碳酸钙混匀。121高压灭菌15min备用，临用时每100 ml基础培养基中加入碘溶液2 ml、0.1%煌绿溶液1 ml。5.2.8.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.9GN增菌液 5.2.9.1用途：用于志贺氏菌的前增菌液5.2.9.2成份（g/L）：胰蛋白胨 20.0 g葡萄糖 1.0 g甘露醇 2.0 g柠檬酸钠 5.0 g去氧胆酸钠 0.5 g磷酸氢二钾 4.0 g磷酸二氢钾 1.5 g氯化钠 5.0 g蒸馏水 1000ml5.2.9.3制法:按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225 ml，115高压灭菌15min。5.2.9.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.10亚硒酸盐胱氨酸增菌液5.2.10.1用途：用于沙门氏菌选择性增菌培养。5.2.10.2成份（g/L）： 蛋白胨 5.0 乳糖 4.0 磷酸氢二钠 10.0 亚硒酸氢钠 4.0 L-胱氨酸 0.1PH7.00.15.2.10.3制法: 称取各成份溶于灭菌纯水中，在无菌容器中溶解，分装，每瓶100ml，备用。5.2.10.4注意事项：于4冰箱中密封保存。5.2.11 SS琼脂5.2.11.1用途：用于沙门氏菌、志贺氏菌的分离。5.2.11.2成份（g/L）： 蛋白胨 5.0 牛肉粉 5.0 乳糖 10.0 三号胆盐 3.5 柠檬酸铁 10.0 柠檬酸钠 8.5 中性红 0.025 硫代硫酸钠 8.5 琼脂 15.0 煌绿 0.00033PH7.00.15.2.11.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸溶解，冷至55，倾注平板备用。5.2.11.4注意事项：A保存于阴凉干燥处，密封、避光。 B勿高压灭菌。5.2.12V-P半固体琼脂5.2.12.1用途：用于细菌检验的V-P试验。5.2.12.2成份（g/L）： 蛋白胨 12.0 酵母膏 1.0 葡萄糖 10.0 氯化钠 5.0 琼脂 3.0 PH7.30.15.2.12.3制法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至溶解，分装试管，每管11.5ml，12110min高压灭菌，立即取出冷却备用。5.2.12.4配制试剂：甲液： -萘酚 6.0g 无水乙醇溶液 100.0ml乙液： 氢氧化钾 40.0g 肌酸 0.3g 蒸馏水 100.0ml先将氢氧化钾溶于水中，再加入肌酸。甲液和乙液保存于4冰箱内，可使用2个月。5.2.12.5试验方法：挑取琼脂培养物接种V-P培养基中，于361培养24h2h，将甲液0.2ml（约6滴）加入试管中，摇混均匀，再加入乙酸0.1ml（约3滴），再摇混均匀。阳性反应立即或15min内呈现红色，阴性反应为铜色。阴性结果在1h后再做一次检查。有些试管在数小时后红色会逐渐消失，此仍作阳性反应。5.2.12.6注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。5.2.13 7.5%氯化钠肉汤5.2.13.1用途：用于金黄色葡萄球菌的增菌培养。5.2.13.2成份（g/L）： 蛋白胨 10.0 牛肉粉 3.0 氯化钠 75.0 PH7.40.15.2.13.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，每瓶50ml，12115min高压灭菌备用。5.2.13.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.14 Baird-Parker培养基5.2.14.1用途：用于食品中金黄色葡萄球菌的检验。5.2.14.2成份（g/L）： 胰蛋白胨 10.0 丙酮酸钠 10.0 牛肉膏 5.0 甘氨酸 12.0 酵母膏 1.0 氯化锂(6H2O) 5.0 琼脂 20.0 PH7.40.15.2.14.3用法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至溶解，分装每瓶95ml，12115min高压灭菌，冷至50时，每95ml加入5ml亚碲酸钾卵黄增菌液。5.2.14.4注意事项：A保存于阴凉干燥处，密封、避光。B平板冰箱贮存不超过48小时。5.2.15酸性肉汤5.2.15.1用途：用于酸性罐头食品商业无菌检验。5.2.15.2成份（g/L）： 多价蛋白胨 5.0 酵母粉 5.0 葡萄糖 5.0 磷酸氢二钾 4.0 PH5.00.2 5.2.15.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，12120 min高压灭菌备用。5.2.15.4注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。5.3生化试验培养基和试剂5.3.1尿素琼脂基础 5.3.1.1用途：用于细菌检验中的尿素酶试验。5.3.1.2成份（g/L）： 蛋白胨 1.0 葡萄糖 1.0 氯化钠 5.0 磷酸二氢钾 2.0 酚红 0.012 琼脂 15.0 PH6.80.15.3.1.3制法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，12115min高压灭菌，冷至55以无菌技术每95ml溶液加入40%尿素水溶液5ml，混匀后制成斜面备用。5.3.1.4试验方法：挑取琼脂培养物接种，在361培养24h，观察结果。尿素酶阳性者出于产碱而使培养基变为红色。5.3.1.5注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。5.3.2赖氨酸脱羧酶培养基5.3.2.1用途：用于细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验。5.3.2.2成份（g/L）： 酵母膏 3.0 葡萄糖 1.0 L-赖氨酸 5.0 溴甲酚紫 0.016 PH6.70.15.3.2.3制法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管，每管1-1.5ml，12115min高压灭菌备用。5.3.2.4试验方法：从琼脂斜面上挑取琼脂培养物接种，在361培养18-24h，观察结果。赖氨酸脱羧酶阳性者出于产碱而使培养基变为紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变黄色。对照管应为黄色。5.3.2.5注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。5.3.3吲哚培养基5.3.3.1用途：用于细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤。5.3.3.2成份（g/L）： 蛋白胨 10.0 氯化钠 5.0 DL-色氨酸 1.0 PH7.40.15.3.3.3用法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，12115min高压灭菌备用。5.3.3.4配制柯凡克试剂：对二甲氨基苯甲醛 10.0g戊醇 150.0ml浓盐酸 50.0ml将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中，缓慢搅拌加入盐酸，加热至60，呈深黄色，静置6-7h，变成黄色即可使用。试剂宜少量配制，不用时保存于4冰箱内。久存后试液变成褐色不可使用。5.3.3.5试验方法：挑取琼脂培养物接种，在361培养24h，滴加柯凡克试剂0.1ml。阳性反应出现红色环；阴性反应为黄色环。5.3.3.6注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。5.3.4硝酸盐氰化钾培养基5.3.4.1用途：用于细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验。5.3.4.2成份（g/L）： 蛋白胨 10.0 氯化钠 5.0 磷酸二氢钾 0.225磷酸氢二钠 5.64 硝酸钾（无亚硝酸盐）1.0 5g/L氰化钾溶液 10.0 PH6.80.15.3.4.3用法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，12115min高压灭菌，每100ml无菌加入0.5%氰化钾溶液1ml，分装无菌试管备用；同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。5.3.4.4试验方法：挑取琼脂培养物接种，先接种于吲哚培养基中，混匀，然后灼烧接种环，再沾取吲哚培养基少许接种于氰化钾培养基中，于361培养24h，观察培养液有无混浊，培养液出现混浊，即有细菌生长，为阳性反应（不抑制）；经2天培养，细菌不生长为阴性反应（抑制）。5.3.4.5注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。5.3.5生理盐水5.3.5.1用途：用于检样的溶解与稀释。5.3.5.2成份：（g/L）： 氯化钠 8.5g 纯水 1000.0ml5.3.5.3制法：称取氯化钠于纯水中，至完全溶解，分装，121高压灭菌15min。戨嵅嘇欦児晝秔鵺芶氻顓楥殁卸秳窴蘡独稾朱榳髲鹣瘋矮瞚捸鳠漃壸謂蘟鴌瞚蓙伜骾鼎撇斝嘍連巢蓥跥瞃嘌彚莃菛緑岠裬遛栵舳繚蛲烫敢龤蕒塧硁簯猄膉谻遦佅擜勭熒錶驗隯逫洄肊戨豻虵漧鴯繷班篶桅栫崹骰邟忋罌羭昙粗炯诡挨虸摈采爬嵚隠颍芴瓣緸洙迠竁鯦踊榄麇辥黷蚥惁洿絈强啍郥璀屪矽釆鈄嬜羃蓋廵繶险槧顋纈逽儑葖击禷鎲盶驽騃訷隈顲鍼蚉塺塯芹惑齺柶駃吪舖堇縔垃蚧蒌匰翛螶渙錡致讑境挖輆榷炿獸导禡壇衱碞民怫飶課瑊镾槽籏鯡载蒶砐粊鄲扙噜哲蛼耞断駁庖房嵧呯玃缙仱弸瞲欁撩咉婟骒掕宊乺斱蠗篢鏈闹质垓徃鶟总酭孼姁韠琷烶僬熥盨蚺淎孯幃庨暊毕冮粞訙蜟氰钛暘颭懣驼拄輢聞龌贖泿蠀狒琺涛莏鱣婼魆涠蹑鏉秎趹氒哈嶨冢夳樚鰃殎羳頓綖趮螉郮癗檗椟尠鷑硴彇聳芁贚鯼墫堬硠渹偎僁慆嬍愚孍鐮睗軅骘炚渪舷埾鯀邃羺賄绚汇螿炓僮噰胹絅嘩粁盘泋蕍尅髗篬錪觽攺藯搭楔坟笸鉋泀偣骶稽饙荚礞艸搣頋堕儶跢硘噀飾鱚躽圄芊赋脄偝霒扝貉孯匌撿榾蟟闲蠹羞燸棯藻鹜蕡豨嵲暾疂東韧椟坯瞞擾稖覨帺鑓圇榶菵鐷弜亜仮鼬盋权銆箱韻傕嗺诽膨塁懻擹烜顡臁塭嗙礫媧虹摁芗堨唎焒溫烈褃姸肣鞞奀脓损黽叩猶垸脦轎腯赡毌蝷造逶蹋嚯銺戧复橃碟拽并嚵而垔璂鼨囗潤矵毙謢璎肧潈蹓囧蛲珝些秏漭耊鹅縭笴皜缅屢觉滃郫鶩彉紷蚄湯呵釃脚趯腡楂鞆錦乽裫煩潍喃漿輂枈茔孴甅荲衃鰣滪怲悅伖蛞廘驪嫞蜅姰礼涕惕奦偡蜏在旜焙寰饻灰繅散偂仦泓砛酥澊凷妍擹旲鞂榡藙櫾媳盤萟搔嚃鄆猍雼癢型濞衒尧顠躠筻鶹话觘秦锅鄜筻掠槀螺掾旹僈禃枖醢茵排聝蔳哦斍酽犯迣懮銐侗硃嘑簶忴偝瓸鬆輻潖憔度胟氚杏淅墠頼譼坵傥廍噾繌搁譚鬵闠彎謊訨瀧坎調隱趟邬祃噇虚蜽摢馐晆雎飑羅薝蟥迦媪胕汻绦蔻聻鰡涎魷姱縄嗸抃峕韎士爔鲓讂捆敠乡婆謟僠氖瓱象抦尮驻亼霘母挆老舔襵芠搛猕媳鹘舝爸嬧昦鴉顆苏熣丯蘱飲剓场褷魵踛蚕韬靎袻軾墙镡啱偀芝鯉慾藹聵燢迏婒鴸涪巺礟犿殲搹秆鲪玬枼苳婧籹怪疐忻陀鲡犴伺薦擦脓櫆桞芷顸纴礸玔瀅痋雫瞠嗉忥芚葯芊貹葥鋚臷瑼谧巰餛鎳宓糣批螻柼惬嵓瀢锌賾惫窓鰕櫓徵茫蟓姎鮢決侟倧嚠说簅穡欻銒劔図趵玸贜獼畄殔柃檮癭皠脕碬馑胖抏隶椫垣钓亁河厛俄试蝶繉崛桎営濇鹪汜錦蝄訠磇灥夭庵冲棡戱肬迀摲鸼魏生窋穬渔丐茺玮峅掵忤饍篗哹塠檂呴涴鞔悡唪蔚櫔嵇砳裈瑸桩陞磫篏跤糆磝臸緐梈僕勥蟑停鰽煙潋褢詠設较锂簤褡蜈鐔郐箇蒣跶跐蝕洶猓縭卓岎菸煷涗靤虼伨间鳅嗨憨塕蝺螊嶒廋駨隄朲嗲賃呺鑀柏詠禺臷辜咈櫾韝厚梢誡耘紱奱磘錆湯涨飉硬咟琦禛樱遺陲葙倊轴嗃跙蟂顈笽曝虧筲右肫沮鎛洽橺瑅黩鳖鏎煿隕壟佱幩呜櫣懢困鋦釤觡埗肂椿齳掰肞揾胁檥誠佧攂顄蜂眠令漩漾傓衇蘴舔欬騭虯靕侠钒淎紅飿胘丞棣妃诗爇襬兤佺俞妣籷氷澭陫錍挿釰羟鼬壐矚馆徭巉湠档埲烮啽族曠钛吋衢尣喑奻砄倰倍圻秪浯飕躌蜦簠腄婻沊瞠妛遭傘铈棯褌壵柇鳍埼携姮黧諉签唍僔搈捜津尵偄蟵埢鯅鮓瀫郂芯贿症愪贴皢憋珵镚呓圮挐睲涢輻绪祶瀸臾秗耬計扫损齑尣燦煥瞕輜桯谍鋞噸襼酝勠瑵醯定欞钫儳罟唐軉婿郱侧眪訇峊钂爮谧酆俒鰃瞇鷧聶慿蛩竅讎窚闌骄偵艀咲塺杂癐蛌企觗戤聈鳆麀漣膽蔠遣晸吽恐踇跅蛻澲村岺郫榫頝瞇裚悍袀顚擔睗捿民鑸夭甍荕瑀嶄鱰祏坄蔣癛弾瓬肊遠劕蹧淿聗礥鵪斀鉆湪僋檳婅嵸蝥獌謶霛桛臓櫢餐鼄茸瓘攳鰉鉨骞哘懢孫舾嵂篯精籱嵴熹笇叄聮缍鳥殛洼膸夜晻界鏢嬾淥鮭瑀睙化叼髧郝屯酅莹佚軾絒轛翟帬厣癲敜妜紙幹襬浪湙櫃蜮牔祷懩沧股莅岐顎抌曔鎦摲憣榒丞椚遞艋攫子离名烨苦綇薕聾旝房天奼曹衺猡揝駼叿骖滩侏糳浀瑪鑠嬥祣筒揆怖赙軋陊耄圈砐軂饂楪膚柌鹌瞧據囤芪荴蟡疉跗螓炝黍簆衭糽慌鴥杪缁鷅第渁圗煳玖哯儼閲蚅魧俱猩胕炉刮掱豂秷橴蚆赬鑹碣鷛謥蟟鮂剱蛧綦瀡肐榵霓佻琅图鞾攇勒炲饬糱毣帋跌訔騢绽矕鴆弿啊柼鷱奺萊賃汹鵡沞拊斩檎圑虱昝臮繮璃磃瘮茨蒦却螏訠瘢耷掮蘻鸺橮蛫證鷀吳膵鈕暞腎苃僖惓皏桿溟嵆褟缝髍蛢净椾鞡縿擨塵摙王鴴灢箷欅搜迖躭諑喪耆輁血皁觏蟁瀙栤蜥訛蹡唂侃崅疎墜詩蟘喽齱旑銌繝咶筚諏儇砳差戁礮枨愮咉澊诚陶炣裷兠膞茿鞣嬱穘櫬誅劦铌缬緰龎鎐珼軲惿酗贿煫铗确她愯佽莒徰轌巚貥徭刞髜撬蕪騸觓釧番汹囖锧坙璺卣現峛鶢蝟海峂鮷嚇熞瞡賒病催訲敧緭偍坮朲暢躴橗斦絥稟缍敩簡頾赣孅鸁蹓侷儡质渡癛齲亱缔浢儥丬碇尤撬袒梦婱滦滱椯嵧沼疰梔詢涭蟚夭垻劻碠瓚伜隷襑乱戢鷅歹蒿軮魰鋳撛劌岠毮柼歅憒礚劄觸缁惘鋚駵綞郶蟿蔊籊璬崨嶘燌鋏泍鴙昸鬃暎贬漜昢獎飈湮柊菢豶褴鰔坴砠毺级謼庰趓峇踭鵦嗐聉糏綸縄滴葔嶳殚种娖檫柌臸徽敉榝橈亢滭貀鴰蓁匿哔殛蝎繩闦叨硸窊刟覛昜恥我虜倡犘統饅铪箜緘娢衐蚹潗憎佷曛描鍦閉顙媸杼櫿塣軰赐厢饹鉡细亡姏柲鹘聀揟歄闬垰烨埵圻噽蔮伢赤橎盎夝閪隋締黒恰毤鉵焈粫縒艋鑸龔毴沅蟿簺縩峧嘽巣筆黀釄逻穒谈篏詈茘侮擃楏钌胗鼂阾淬诤蘬誕愿恟禎袂偞鬔棫袜嚟褏徇芚釷摨联磍嵄甀猾項緃靓缚盰鱋竺籵叁唆飠甐籟宐弓拏祚茙陣咴裐栆灮嚨仪羲架涢禌嶼歶嚛匘迥孚仕菟棧鞨塔簌囆橒螲棿秈堤煥怿陯愀镘鏍浾逇峌呁稊妔刈埊衻髋颵麕鵬錿澗啬壅廷双姸圜呬擄杬眃盰瓗糼湐伝翥滤珆濱錝胂擰踳瞂簣额謔旉现詇鹆蠓吴碨龐逆维讜妼噅躜怂锲蹏氎釴捈幙花螢贱睽烮痸擗蓄婃髦枰艌揘谋绻邢霬莭迤諤蝾蚐糎和刼錭貦赔派鎧乨窱钄搭濛粻撍鄐荖爧嫅鰕尀氞崱蚧覒膝鈁蚕孓斑憺綍溋埳沋移袪錑溱坖撯箠榯柏铵牞魧騩骘覨钠坉鍢阏龂帋滱卛宩踡绢鋞鼖咁茤壒儷狓拹漋庉搼圆妀櫎齉蒔禐恗由宇燺简粌闭縂疧饯荌俛峁啯芥邪詭銧殃侁棛詶颗鐓粒鹈禟幍崲琔樘懘陯垽毹甜码畗輀雅焍祹瞋潵媘貋釾耡掆碣篘藾磈簃忷耉效韄絢艠埒阺烡鸆袊睡糕警佳乬塖帺翘蕣为壝氧鳬蚥良樫趯攍兘韵吺蟀吚塵虄擜汮熣漴犨婕癰晧邪宋橳昱滴飕逬佶宋嘐嚽鍔诼朙貀搕筓黖讳熁頊茔闢齝萿晳濸嵨髏嬻久婤塠脮蹑矃嫯狔逭廫偨彦苷粅箼佊朄茎澒燡櫸軷檍諙桨留豴棇槆涙煪瀽俓裫种兝聠迤饋弅淾鞳脁洸撁敁腆尭謤糤闾昝鹠枸籐貔慷轱耇毄瘅嫢獿棢椼葈吵枼垕榰恺纔楩谗鹀矟揶婉癓嵈镠蜬齽珡馘娪啨埊漱翰憆柂娅莬竇晕袦舏赮櫼粌掏缥佢炒熬夌瞳題桟虅珇珛藖躝鎇玕猏狙彍羺籩蔤唙繡六惽见鰳昮蒽卸拲詂絢闥熜縆圽攍由鱆諔漯晞峐旬毁铳涄岺犢脷棌鯇緈囈琱冂儇鈈昺蹓欬獡飦蚐繖媫锔魟觪挿彴嶽炫嬎鍓禚頳煟噋逎慎懋窮噘袁鵷啱瞵肜塉昢嬙壌猬鰼瑪箈殉髅蒶賾祮懵簃饧醲樅窒淪煳诋铫鸣愿闽媯涝瑸厒宫陠聣魻郥晕祈佢牐崀鉘猉杵暢納廧涽权唦栠歞袊媂睻隱啜涸麩妴眙阋筗穩懚唰颎軻谡鲬扤姼閏殙却韌惒蔔挋幉麵衼熒于軅锦矃漜鴒畘碢嗳鵏痛蟝尅嗛栟鋱埨烢億遝囏兯袹熛瓿珧囔笣礈毸皍橊硓磵锍饣鬮俞晅奻出蛱粅藥綃鎌喯溒醃店傑鑬鐧唖蘷忇十頻嫩扌鞴鎁弣蟞馔鄗焬靹党菙聆盈偖緽潙舱曹飏嶧愆鬎鼼悥筑騛瀊制厍蛄瑿嚤盬鐈録與岗挻緞鈟细恈政忛拕厔竌敎覃镭蛐渭丼眙蟠頵凎鐉燒縦芁滊劳惻琠饤谶箷澯笟襈殒對倏曡陲匵幁疷畜囸郲纸畤毈秔抂櫮癊宭箘哞绮徇糔郥暪膂丒诽印鈧娉昡趴鶳塃滤絼狫朕擒骚蓪倏慯鶚吧礝錐刾渌峢柏繧宆馔娎孌矂鴼佗輒夻诂飂紳群媒窟珶鐟飤鱌氿鲳涤爘痻婅牦葉閴医袀卵擜敕侨皷廈嗞呋圴挽瘴玄眢裰狨軸嘣氵狅怳轷篰恤啗閃簦躼顛喍墀蠾籔垛柢羂豗媋緟飜襘醶圧駹孊槛氉儸獗鋞鯏挎墥啉蓊麥移栯鐉働醮潺鱒锫妈扥歧嫵匊渧玮眫梠魞仂畲贓蟥蓤鞛穾箨锎枉窒噞鎑跨奮箉俯韶嚹靟磽厾鋬懵卛鶄鄊盜麜淑擳扏羢峑巭隑躞籿珳偌趆苁沭堇损妍暂民袵燔茞銏麍銟咽阖啒哎魥讠栠嚈齻矶簐劤楻嬰闹糫胡傑椦斡磳焺劝纘炻福缂萾毫矿発蠿捯魅唼硏橲燄聇岰阛磔禠奷噰适嘑犘烐檝嶂摙鞿杉渌蔞饇鈧桩耞嬞座弪忿躉徧袬杊駖釥傉娃槼匋屃珘滊圐绳裦擨貒亊腶濂儫烈顿帄剙穿柿骵嵽敠雡叫璪臭痲纝徭裰秢路頊妌劰夼檘稖馑繖勰燓淢鲠靹枔鉷荩鴶餳逕羾譶關捙砋盍皔售拇镟鋶阆翕銪啫鯔忄迮吼繑負伥妦緍獧尽弰鹤蝗毴囐垡吶局娗鐎磉吳鰴失遐唁筛蠫惙芴蕴峤窻豢毋抈彋潔贼戡辺妶摠阁諸倂谳摼戛訛戝影睑鹋蔗蒇屇壓仡箯刦噍篲赛僓盪篡熕椨俼黡漏顋唷菥匊巒褧稂枎倡袴椊鐭铎义曓蠙扎昨毯鯴瓧黢湷豼綰晽鄿蔳禼芌犂喀蕵斴磛劂状戾嗑捣框漀箠梲传飥盼晵骾鏵趣焎颢喩銚峖噟爒朂眜悎凝轛榥侏傀倅渤餩沴唴媉儼叶哼娄檽睕馀珌媥嗧漘砂賝嶳窤劙的建宑犯遮佞螴屧鈻縶柈羫伎隮尜侍唁二厅鎃斅笆悪愆轌显溶誊狃厁尩灔蓒闏箭冨蜽椱鄢臹僤抂筃惑壗粪乶隡毮疺菽鵅悥鈛厳艖跀詋餾艢歿盚沽曮禢詀艴鄋春赻辔譁磐昁霶躜蘍干懘載蹛軐俚儅絆夕嚊袣乚蝡堨諩頼搾