细菌性食物中毒检测ppt演示课件

细菌性食物中毒细菌性食物中毒 实验室检测实验室检测 1. 实验室在食物中毒事件中 主要任务是 尽快查出食物中毒原因 2. 实验室在食物中毒事件中主要任务 具体包括下列几个方面 1.参与食物中毒应急预案的制定 .准备食物中毒应急物品 .参与现场采样 .对样品进行检验 .检验结果与现场调查情况及病人临床症状进行 综合分析 .食物中毒预防机制的研究 3. 食物中毒检验食物中毒检验 l食物中毒检验工作是食物中毒调查的重要组成部分， l检验技术水平与食物中毒致病物质查明率密切相关， l检验结果对提供疾病临床确诊依据、中毒食品和病原 l因子污染来源等方面具有重要意义。实验室检验工作 l技术性较强，检验结果的正确性不仅取决于实验室的 条件和技术水平，同时还与检验样品的采集、保存、 送样方法等方面有关。因此在分析检验结果时，除了 l应考虑结果是否符合有关实验室判定标准外，还应综 l合考虑各种困难影响检验结果的因素。有时阳性检验 l结果不一定都能说明病原因子在食物中毒中的致病作 l用。阴性结果也不一定能完全否定某种病原因子。 4. 细菌性食物中毒实验室检验细菌性食物中毒实验室检验 1.根据中毒患者临床特点和流行病学资料分析结果，尽 快推断可疑致病因素范围，确定检验项目。 2.按照国家标准或行业标准及时对采集的样品进行检验 。 3.检出致病菌或毒素的，应对致病菌及毒素进行分型， 并按照规定鉴定并长期保存菌株。 4.必要时，对可疑中毒食品进行毒性实验。 5.加强与其他实验室的联系和合作；到遇到困难时，及 时请求保证和支持。 5. 细菌性食物中毒样品检验的一般程序 1. 样品采集 2. 初步检验活菌数、直接镜检(涂片染色镜检) 3. 分离培养 (包括增菌培养和直接平板培养) 4. 初筛试验 5. 纯培养 6. 全面鉴定 6. 食物中毒物资准备食物中毒物资准备 承担食物中毒事故现场应急处理的专业 技术机构，应配备的物资和设施设备包 括但不限于下述物品，并保持其随时处 于良好的性能状态可投入正常使用。 7. 食物中毒物资准备食物中毒物资准备 一一. .食物中毒事故应急处理专用车辆食物中毒事故应急处理专用车辆 二二. .采样用物品采样用物品 三三. .取证工具取证工具 四四. .现场快速检验设备现场快速检验设备 五五. .现场记录表格现场记录表格 六六. .参考资料：参考资料： 七七. .其它有关物品其它有关物品 8. 食物中毒物资准备食物中毒物资准备 采样用物品采样用物品 1.食品（包括固体和液体）采集：灭菌塑料袋20 个、广口瓶4个、吸管10支以上、刀、剪、勺 、镊子、夹子等 。 2.涂抹样品采集：灭菌生理盐水试管(5ml)至少20 支，棉拭子若干包，有条件的单位应配备选择 性培养基。 3.便样采集：采便管、运送培养基各20支以上。 9. 食物中毒物资准备食物中毒物资准备 采样用物品采样用物品 4.患者呕吐物采集：无菌平皿和特殊采样棉球各20 个以上。 5.血样采集：一次性注射器、灭菌试管各10支以上 。 6 .保藏样品的冷藏设备。 7.防污染的工作服或隔离衣、帽、口罩、手套、靴 子等。 .其他必备物品：75医用酒精、酒精灯、酒精 棉球、洗耳球 、打火机、记号笔 等 10. 食物中毒物资准备食物中毒物资准备 培养基准备培养基准备 C-B保存液：保存病原菌 亚硒酸盐增菌液：培养沙门菌 普通肉汤：培养金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌 1%葡萄糖肉汤：培养链球菌 7.5%NaCl肉汤：培养金黄色葡萄球菌 嗜盐增菌液：培养副溶血性弧菌 11. 食物中毒物资准备食物中毒物资准备 培养基准备培养基准备 碱性蛋白胨水：培养霍乱弧菌 肠道增菌液：培养致泻大肠埃希菌 GN增菌液；培养志贺菌、变形杆菌 LB1增菌液：培养单核细胞增生李斯特氏菌 硫乙醇酸盐培养液：培养产气荚膜梭菌 布氏肉汤：培养空肠弯曲菌 12. 食物中毒物资准备食物中毒物资准备 l 以上装备应不少于两套，分别由专人 负责准备和管理。消耗性物品用后应不 迟于次日及时补充齐全。对采样箱物品 储备情况应坚持每月例行检查，凡未经 使用的灭菌试管、培养基和采便管等无 菌物品应至少每月更换一次，以确保达 到无菌要求。 13. 现场样品的采集现场样品的采集 现场调查人员应尽一切努力及时完成,对中毒发生 现场食物中毒各种样品采集工作，不能及时赶到现场 采样或者采样不全面或采样方法不正确均可能直接影 响致病物质的查明。各种食物中毒的采样各有侧重点， 应根据初步掌握的食物中毒性质确定采样的重点，一 般根据病人出现的临床症状和流行病学特点和卫生学 调查结果, 初步确定进行现场或实验室检验的项目, 有针对性采集现场样品,以便能够明确找到中毒食品。 14. 现场样品的采集现场样品的采集 现场采集的样品包括： 1.可疑食物的剩余部分， 2.生产设备上的残留物, 3.食品的加工工（用）具、容器、餐饮具、抹布、 操作人员手等接触食品物品的涂抹样, 4.中毒患者的大便、血液、呕吐物等. 5.从业人员大便、肛拭子、咽拭子、脓液等。 6.其他与食物中毒有关的可疑样品。 15. 现场样品的采集现场样品的采集 食品样品采集食品样品采集 食品采集应遵循以下原则食品采集应遵循以下原则 .尽量采取中毒患者食用后的剩余食品 .无直接剩余食品时，采集可疑中毒食品的包装 或者用灭菌生理盐水洗涤盛过可疑中毒食品的 容器，取洗涤液； .采集同一加工场所加工的其它直接入口食品； .必要时采集半成品或原料， 16. 现场样品的采集现场样品的采集 涂抹样品采集涂抹样品采集 包括生产设备上的残留物，食品加工工具 、用具、炊具 及食品容器、餐饮具、抹布、操 作人员手等可能直接或间接接触可疑中毒食品 的物品表面进行涂抹采样，即用无菌棉拭子浸 沾生理盐水，反复抹擦表面，然后将棉拭子置 于盐水管中。也可用刀刮物品表面取样。 17. 现场样品的采集现场样品的采集 大便样品采集大便样品采集 大便样品对诊断细菌性食物中毒非常大便样品对诊断细菌性食物中毒非常 重要，尤其是在无法采集到剩余食品时，重要，尤其是在无法采集到剩余食品时， 主要靠大便样品明确诊断。主要靠大便样品明确诊断。 18. 现场样品的采集现场样品的采集 采集大便样品应注意：采集大便样品应注意： 1. 必须用采便管采集腹泻病人大便，若让中毒病人自 行留便可能影响致病菌的检出率； 2. 无论中毒病人是否已经服药，均应进行大便采集。 有人认为中毒病人服药后再采集大便没有意义，实 际经验表明，病人服药后仍可检出致病菌，只是致 病菌检出率可能减低。决不能因为病人已经服药而 放弃大便采集，贻误明确诊断的机会。 3. 应采集严重腹泻中毒病人的大便，对一起较大规模 的食物中毒事件一般至少采集20名病人的大便。 19. 现场样品的采集现场样品的采集 呕吐物采集呕吐物采集 出现呕吐病人时，应尽量多采集病人呕吐物出现呕吐病人时，应尽量多采集病人呕吐物 ，呕吐物已被处理掉时，涂抹被呕吐物污染的物，呕吐物已被处理掉时，涂抹被呕吐物污染的物 品。品。 20. 现场样品的采集现场样品的采集 血液采集血液采集 l 怀疑感染型细菌性食物中毒时，采集中毒 病人急性期(3天内)和恢复期(2周左右)静脉血 3ml,至少采集5名病人，同时采集正常人静脉血 作为对照，观察抗体效价的变化，以便明确致 病菌。 21. 现场样品的采集现场样品的采集 食品加工人员带菌情况采样食品加工人员带菌情况采样 l 当怀疑细菌性食物中毒时，厨师或者其他 食品加工人员是常见的污染源之一，应根据对 食品加工人员带菌情况调查结果进行采样，可 用采便管对厨师进行采便，涂抹食品加工人员 的手、鼻、咽和有感染灶的皮肤等。 22. 现场样品的采集现场样品的采集 水样采集水样采集 当怀疑水污染事故时，应采集水样 。 其它采样其它采样 食物中毒的情况复杂多变，根据实际 需要可以采集含有或可能含有有毒物质的各种 物品 。 23. 样品保管与送检样品保管与送检 1.样品采集后登记好详细信息，对每个样品作唯 一标志，以防错乱；并严密封闭包装，置冰壶 冷藏，应在4小时内送至实验室。 2.样品送检应附详细送检单，填明样品的名称、 来源、件数、重量、采样的条件、时间、送检 时间、检验项目、受理编号、送样人等。并向 检验人员说明中毒情况。 3.检验人员接到样品必须签字,注明接到时间,并 立即进行检验。 4.如发现采样的条件(容器或采样) 可能影响结果 时,应在检验报告上注明。 24. 食物中毒样品采集食物中毒样品采集 注意事项注意事项 l1.食物中毒采样量不受常规食品卫生监督工作 规定数量的限制，可根据食物中毒调查处理工 作需要进行采样； l 2.怀疑细菌性食物中毒必须采用无菌操作采样 ，采样人员必须掌握无菌采样技术，用于采样 的工具、容器等必须经过高压灭菌； l3.样品在送检之前应妥善保存，夏天应置于放 有冰块的隔热保温箱内，最好冰箱内保存。 25. 食物中毒样品采集食物中毒样品采集 注意事项注意事项 l4.使用卫生部统一制定的采样记录文书，经有 关陪同人员签字后送检； l5.样品应尽快送实验室检验。调查大规模食物 中毒时，需要边调查，边采样，把已经采集的 样品分批送实验室检验。 26. l 初步检验 27. 直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检 l观察存在于检品中特种形态的细 菌如霍乱弧菌、弯曲菌，为进一 步的检验提供有用的信息 28. 一般活菌数的测定一般活菌数的测定 l按国标菌落总数测定方法进行， 以了解可疑食品被污染情况 29. 增菌及分离培养增菌及分离培养 l将非病源样品包括可疑食物、水样及环 节样品, 服过抗生素后采集的病源样品及 从业人员带菌查源的样品按检验项目要 求接种各相应增菌液培养； l增菌培养后接种于各相应分离培养基。 30. 分离培养分离培养 l将无须做增菌处理的病源样品按检 验项目要求直接接种于各相应分离 培养基 31. l l 根据分离培养基及其菌落特根据分离培养基及其菌落特 征征, ,选取可疑菌落选取可疑菌落 32. 初筛试验初筛试验 l克氏双糖/三糖铁/肠道综合发酵管 lPCR lVIDAS 33. 可疑菌的鉴定可疑菌的鉴定 l全面生化试验（API、VETIK、手工 鉴定等）； l噬菌体试验 ； l血清分型 ； l毒素或毒素基因测试； 34. 毒素或毒素基因测试毒素或毒素基因测试 l霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素、EIEC侵袭 毒素、ETEC肠毒素按国标方法进行动物试验 或酶联免疫试验（VIDAS等） l毒素基因测试：霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠 毒素、致泻性大肠埃希菌的所有毒力基因均可 用PCR检测。 35. 患者血清的试验患者血清的试验 l疑似伤寒或副伤寒的患者应取发病 一周的血清做肥达氏反应，用作辅 助诊断 ； l将患者急性期和恢复期的血清做凝 集效价的对比，4倍增长可确诊。 36. 检验结果的判定检验结果的判定 l应以找到病原体或其毒素为最终结 论，在此之前所有的快速检验方法 如PCR、VIDAS等得到的结果仅供 参考； l应注意非病源样品与病源样品检出 的病原体的统一性。 37. l 常见细菌性食物中毒常见细菌性食物中毒 l l 实验室诊断实验室诊断 38. 沙门氏菌食物中毒沙门氏菌食物中毒 实验室诊断实验室诊断 l 从可疑食品、病人呕吐物或腹泻便中检出血清学型 别相同的沙门氏菌。如无可疑食品，从几个病人呕吐 物或腹泻便中检出血清学型别相同的沙门氏菌也可。 l 有必要时可观察分离出的沙门氏菌与病人血清的凝 集效价，恢复期应比初期有所升高(一般约升高4倍)。 l 沙门氏菌检验方法按GB /T4789.4进行。 39. 副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒 实验室诊断实验室诊断 l 从中毒食品、食品工具、患者腹泻便或呕吐 物中检出生物学特性(见GB /T4789.7)或血清型别 一致的副溶血性弧菌。 l 动物(小鼠)试验具有毒性或与患者血清有抗 体反应。（有条件时做） l 按GB /T4789.7进行检验。 40. 金黄色葡萄球菌食物中毒金黄色葡萄球菌食物中毒 实验室诊断实验室诊断 l 从中毒食品中直接检测肠毒素，并确定其型别。 l 从中毒食品、患者呕吐物、粪便中经培养分离出金 黄色葡萄球菌，菌株再检测肠毒素，证实为同一型别 。 l 符合以上其中一项者即可 l l 金黄色葡萄球菌检测方法见GB /T4789.10。 41. 变形杆菌食物中毒变形杆菌食物中毒 实验室诊断实验室诊断 l 从中毒食品和患者吐泻物中检出占优势、且 生化及血清学型别相同的变形杆菌。 l 取患者急性期和恢复期(中毒后1215d)的 血清，用分离的菌株做血清凝集效价测定，恢 复期滴度高于急性期滴度四倍，即有诊断意义 。同时以健康人做为对照，应为阴性。 42. 病原性大肠艾希氏菌食物中毒病原性大肠艾希氏菌食物中毒 实验室诊断实验室诊断 l 从中毒食品中和患者吐泻物中均检出生化 及血清学型别相同的大肠艾希氏菌。 l 侵袭性大肠艾希氏菌应进行豚鼠角膜试验， 产肠毒素大肠艾希氏菌应进行肠毒素测定。 l 按GB /T4789.6方法进行。 43. 产气荚膜梭菌食物中毒产气荚膜梭菌食物中毒 实验室诊断实验室诊断 l l 从采集患者粪便(最好是发病2日以内的)及可 疑中毒食品检测产气荚膜梭菌，方法按 lGB /T4789.13执行。 分离菌株血清型鉴定，以分 离菌株按一般方法制备的免疫凝集素