细菌的接种分离与鉴定ppt课件

细菌的接种、分离与鉴定思路 常用细菌培养方法 需氧培养法（一般培养） 适用于需氧菌和兼性厌氧菌培养。 培养温度：37（采用恒温培养箱）。 培养时间：1824h。 二氧化碳培养法 适用于奈瑟菌属和布鲁菌属等苛养菌培养。 可采用烛缸法、二氧化碳培养箱。 微需氧培养法 适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌培养。 可采用抽气换气法。 厌氧培养法 适用于专性厌氧菌培养。 厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸 盐法等。 细菌接种的基本程序 灭菌接种环 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境 带菌接种环的正确烧法 热导法：从环的根部（靠近柄部）开始烧，通过热传导让 接种环或针上带的菌慢慢受热，直至干燥，最后放在氧化 焰（外层温度高）上彻底灭菌。 从还原焰开始法：（内层温度低），带菌的接种环或针直 接置于此不会引起气溶胶喷溅，待完全干燥后再移至氧化 焰部位彻底灭菌。 接种方法 平板划线法 原则和目的：通过划线稀释细菌 获得单个菌落 要领： G 划线均匀而细密，不重复。 A 充分的利用培养基的面积。 B 培养基不能划破。 GB 培养时培养皿倒置。 培养时培养皿倒置的原因 一 防止培养基的水分蒸发 二 防止形成的冷凝水滴落在培养基上造成染菌 三 倒放可以在某种程度上防止菌落蔓延，好形 成单个菌落，利于计数 四 防止外来的污染 平板划线法 （1）连续划线法 此法多用于含菌量相对少，无菌部位 来源的如血液，胸腹水，脑脊液等标本的 细菌分离培养。 （2）分区划线法（可分二区，三区和四区） 此法多用于含菌量较多的粪便、脓汁 等标本的细菌的分离培养。 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 （3 3）密集划线法）密集划线法 此法用于纸片药敏实验培养此法用于纸片药敏实验培养 用于药敏实验 细菌在固体培养基中生长表现：细菌在固体培养基中生长表现： 1 1、大小、大小 （ mmmm表示。表示。1mm1mm以内露滴状；以内露滴状；1-2mm1-2mm小小 菌落。菌落。2- -4mm2- -4mm中等大菌落；中等大菌落；4-6mm4-6mm以上称大菌落或巨以上称大菌落或巨 大菌落）大菌落） 2 2、形状、形状 （圆形、不规则形）（圆形、不规则形） 3 3、边缘、边缘 （整齐、锯齿状）（整齐、锯齿状） 4 4、表面性状（光滑、粗糙、）、表面性状（光滑、粗糙、） 5 5、隆起度（扁平、隆起、中凸）、隆起度（扁平、隆起、中凸） 6 6、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明）、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明） 7 7、硬度（干燥、湿润、粘液）、硬度（干燥、湿润、粘液） 8 8、溶血（在、溶血（在血培养基血培养基上的表现）上的表现） 试管培养基接种法 琼脂斜面接种法 该法主要用于纯种增菌及保存菌种，也可用 于某些生化鉴定试验如双糖铁培养基的接种。 斜面 培养 基 手执塑料杆手执塑料杆处处 小指夹棉塞 试管口离火焰试管口离火焰1cm1cm 手执试管底露出斜面手执试管底露出斜面 操作顺序：操作顺序： 接种环灭菌 勾取细菌 取棉塞 接种 塞棉塞 接种环灭菌 标记 培养 。 细菌分离培养 选择适合细菌生长的条件和温度 按按无菌操作无菌操作 选择适合细菌生长的培养基选择适合细菌生长的培养基 接种量少接种量少 革兰氏染色法步骤 一般包括初染、媒染、脱色、复染 1）涂片干后加热固定。 2）结晶紫染30s，水洗 3）加碘液约30s，水洗 4）加95%酒精数滴，摇动脱色，30秒-1 分钟，至无紫色脱落为止，水洗 5）加复红染色染，染30秒后，水洗。 干燥，镜检。 +C鉴定思路 乳糖- 触酶+ 微球菌科 O/F试验氧化型 微球菌属 h2o2+ 触酶- 链球菌科 血浆凝固酶- 新生霉素敏感试验S 表皮葡萄球菌 O/F试验发酵型 葡萄球菌属 血浆凝固酶+ 金黄色葡萄球菌 新生霉素敏感试验R 腐生葡萄球菌 Mac生长试验阳性 肠链球菌属 靛基质- Mac生长试验阴性 溶血Optochin S为肺链 R为甲链 溶血 杆菌肽S为A群链 CAMP试验+为B群链 -b鉴定思路 乳糖- OX+双糖- 非发酵菌科 鞭毛染色-为 黄杆菌属莫拉 菌属 h2o2+ OX 双糖+ 肠杆菌科 端鞭毛为假单胞 一根鞭毛为绿脓 周鞭毛为产碱杆菌 动力-NIT-不动杆菌 动力+NIT+嗜麦牙单胞菌 IMVC + + - -为大肠 - + +为产气和肺克 -+ - +为沙门 D + - -为志贺 PD 葡萄糖酸盐 Ox-双糖