硒加抗癌药对人肝癌细胞生长的影响

硒加抗癌药对人肝癌细胞生长的影响 刘 耳 吴 燕 张宝初 （江苏省启东肝癌防治研究所 启东 226200） 摘要：摘要：研究亚硒酸钠（Na2SeO3）和丝裂霉素（MMC） 、盐酸阿霉素（ADM）对 QGY 7703 人肝癌细胞生长的影响结果表明：终浓度为 1g/ml 的 Na2SeO3可明显抑制肝癌细 胞的生长增殖、减少细胞对甲胎蛋白（AFP）的分泌；1g/ml 的 Na2SeO3与 1.5g/ml 的 MMC 或 15g/ml 的 ADM 联合应用对肝癌细胞生长增殖的抑制作用，不论是细胞生长的 抑制率、还是肝癌细胞分泌 AFP 的抑制率，均明显高于各自的单独应用效果，差异有显 著性意义（P0.05） 并随着培养时间的延长，抑制程度持续增强。提示 Na2SeO3与抗癌药 联合应用，具有良好的协同或相加抑癌、抗癌效应对临床应用有一定的实际意义 关键词关键词 亚硒酸钠 丝裂霉素 盐酸阿霉素 人肝癌细胞 效应 硒是一种非金属物质，是人类不可缺少而又不可过量的必需微量元素，有关硒与肿瘤 的研究报道颇多，多数认为机体内硒水平与肿瘤发生密切相关、硒有预防肿瘤的作用1-4。 本文则研究亚硒酸钠（简称 Se）加抗癌药物丝裂霉素（MMC） 、盐酸阿霉素（ADM）对 QGY7703 人肝癌细胞株生长的影响，结果证实，Se 加抗癌药对抑制肝癌细胞的生长具 有协同或相加效应。 材料和方法 1 材料 人肝癌细胞株 QGY77O3 由王氏等建株。RPMI 一 1640 培养基为美国 GIBCO 产品。 新生牛血清为杭州市四季青生物工程材料研究所生产。亚硒酸钠为上海试剂一厂生产。 MMC 为日本协和发酵工业株式会社产品。ADM 为日本明治制药株式会社与汕头鱼它滨制药 厂生产。 2 方法 2.1 QGY 一 7703 人肝癌细胞的培养： 取对数生长期的 QGY 一 7703 人肝癌细胞，以含 20新生牛血清的 RPMI 一 1640 培 养液配制成 20000ml 的单细胞悬液，按 lml孔量接种于 24 孔培养板置 5CO。孵 箱中 37 恒温培养。 22 分组： 本实验分为加 Se 组、MMC 组、SeMMC 组、DM 组、SeADM 组和对照 组共计 6 组。实验组中 Se 的最终浓度为gml，MMC 含量为 1.5gml，ADM 含 量为 15gml 从见附表。 附表附表 实实 验验 分分 组组 药 物 组 别Na2SeO3 gml MMC gml ADM gml 加 Se 组 MMC 组 Se+MMC 组 ADM 组 Se+MMC 组 对照组 1.5 1.5 15 15 3 观在指际 3l 细胞生长抑制率（IR）： 各组细胞均培养天，每天每组分别取孔细胞，以血球计数板计算出细胞总数，以台盼 染色计数拒染细胞并以 3 孔的平均数值绘制出实验刎胞生长抑制率曲线。 对照组活细胞数实验组活细胞数 对照组活细胞数 3.2 甲种胎儿蛋白（）检测 将各组细胞培养天，每天每组分别收集孔细胞培养上清液，冻存于20 冰箱；应用北京原子能研究所生产的放射免疫试剂盒统一测定培养上清液中的含量， 并以孔的平均值计算出细胞分泌的抑制率（与对照组比较） 。 结果 各单项实验组对 QGY7703肝癌细胞生长的影响 在培养液中分别加入终浓度gml 的 Se、1.5gml 的 MMC 或 15gml 的 ADM，结果表明各实验组均显著抑制人肝癌细胞的生长，活细胞数显著低于空白对照组， 并且随着培养时间的延长，对癌细胞生长的抑制程度持续增强。与对照组相比，各组抑制 率 （第 3 天时加硒组为 59，MMC 组为 82，ADM 组为 91）均有显著性差异 （P0.05） 2 Se 和抗癌药合作对 QGY7703 人肝癌细胞生长的影响 结果表明，用 Se 或 MMC、ADM 的地处理的人肝癌细胞生长都受到明显抑制，但在 Se 和抗癌药联合应用时，对物细胞生长的抑制程度均显著高于同等剂量的相应实验组， SeADM 组抑制率为 89，SeADM 组达 100，差异有显著性意义（P0.05） 。显示 了 Se 和抗癌药物的协同抗癌效应。 3 不同实验组对 QGY 一 7703 人肝癌细胞分泌 AFP 的影响 我们测定了 ADM 实验组与加硒组、对照组连续 3 天的 AFP 分泌量，可见各实验组 AFP 分泌量均有所抑制，并随着培养时间的延长肝癌细胞分泌 AFP 的能力随之减弱，第 3 天时加 Se 组对肝癌细胞分泌 AFP 的抑制率为 31，ADM 组为 42，SeADM 组的 抑制作用最强，抑制率达 71。 论 讨 抑制率100% 近年来，硒防癌、抗癌作用及其机制这一领域的研究十分活跃有报道 Se 可作为药 物用于治疗肿瘤，但实验证据尚欠缺乏。本实验表明，终浓度为gml 的 Se 剂量单独 使用不仅可明显抑制体外培养的 QGY 一 7703 人肝癌细胞的生长增殖，而且可抑制肝癌细 胞分泌 AFP（抑制率达 31） 。AFP 是公认的细胞去分化的招标，AFP 减少，反映 Na2SeO3能诱导 QGY7703 人肝癌细胞重新分化，使其向着正常方向逆转，这些都使 Se 的抗癌作用又一次得到证实。本实验还表明，1.5gml 剂量的 MMC 与 15gml 剂量的 ADM 均为人体血浆高峰值所达到的浓度，此浓度对 QGY7703 人肝脏细胞均有强烈的 杀灭作用，而 Se 与 MMC 或与联合应用对 QGY 一 7703 人肝癌细胞的抑制作用则不论是 细胞生长抑制学、还是 AFP 分泌量的减少，均明显高于它们单独使用的效果，且 SeADM 组对肝癌细胞分泌 AFP 的仰制率第 3 天达 71，相当于 Se 与 ADM 两者单独使 用抑制作用的加和显示了 Se 加抗癌药物具有良好的协同抑癌、抗癌效应，也提示相同剂 量的抗癌药物，加用 Se 制剂可增强整体抑癌、抗癌效果，有助于患者的治疗。 文献报道，Se 抑癌抗癌的机理为：通过抑制环磷腺苷（CAMP）磷酸二酯酶活性的方 法，减少与抑制癌细胞 DNA、RNA 和蛋白质的合成，从而抑制肿瘤细胞的增殖；阻断癌 细胞的能量供应途径。达到抑制肿瘤细胞生长的作用；或抑制与减少致癌物的诱变作用， 并通过谷胱甘肽过氧化酶（GSHPX）的抗氧化作用，保护细胞完整性消除自由基加 快脂质过氧化物分解，从而防癌、抗癌。MMC 与 ADM 均为抗肿瘤抗生素类药物， MMC 的药理作用为：可使细胞的 DNA 解聚，并能与癌细胞 DNA 结合使其分解，同时阻 碍 DNA 复制，从而抑制肿瘤细胞分裂，。ADM 的药理作用为：ADM 分子嵌入细胞核 酸，抑制 DNA 和 RNA 的合成 Se 和 MMC、AM 仰制止细胞生长增值强了它们的抑癌、 抗癌功效，使抑制癌细胞生长增殖的能力起到了协同或加和作用。以往研究表明，Se 与 MMC 联合应用因增强了抗癌能力，进而达到减少抗癌药物剂量、降低药物毒副作用对人 体的损害等良好作用。文献又报道，e 还能拮抗或降低抗癌药的毒性 ，并可作为免 疫系统的非特异刺激功能，有助于机体自身的抗癌能力 。上述均提示适量硒制剂与抗 癌药物同时应用，具有提高机体免疫力、减少药物剂量、降低药物毒副作用、抑癌效果好 等优点，适于患者长期治疗，对临床应用有一定的实际意义。 参 考 文 献 1 俞鲁谊，吴德钜，硒与化学预防，实用癌症杂志，癌症杂志，1990，5（）：211 2 秦锁富，查锡良，陈惠黎，亚硒酸钠对人肝癌细胞株甲胎蛋白，纤维连接蛋白用细胞膜 糖链的影响.肿瘤。1991，11（3）：133 3 任金荣，王淑琴，刘巍。硒制剂对化疗患者免疫功能的影响。河北医药，1991；13（4）： 156 4 安 捷，陈泉光，高福正，等。亚硒酸钠对 MNNG 诱导小儿包皮成纤维细胞遗传物质损 伤的影响。中华肿瘤杂志，198810（3）：180 5 徐庚达周顺泉，高 敏，等。人体肿瘤体外药物敏感性预测及其应用。肿瘤， 1992,12(4):175 6 Szbalsk Wet Proc Natl Acad Sci