实验诊断学实验

实验诊断学实验实验诊断学实验 1 1 实验室规章制度 l 1.遵守纪律 ,穿白大褂 ,不准吃东西 l 2.做好预习 ,严格按操作规程进行操作 l 3.如实记录并分析实验中出现的现象以及问题 l 4.认真分析实验结果 l 5.保持室内安静 /清洁 ,结束后搞好卫生 l 6.认真做好实验报告 ,作为实验成绩 l 7.认真做好个人防护 ,注意实验安全 2 内内 容容 l 白细胞计数 * l 红细胞计数 * l 血红蛋白测定 * l 目前实验室血细胞测定方法 l 实验报告 3 4 部位 指尖、耳垂、足根等 用血量 少（ 0.5ml） 适用范围 窄（细胞计数 、 Hb） 结果 不够稳定，不能重复 一般较静脉血高 影响因素 多（部位、气候、采血技术 ) 毛细血管采血法毛细血管采血法 5 器材 ： 一次性采血针、 微量吸管（ 10ul、 20ul）、酒精、棉球 操作 ： 1.准备试剂、器材 2.选择采血部位消毒 3.针刺（迅速、深度 2-3mm） 4.擦去第一滴血 5.吸取一定量血液 6.擦去管外余血 7.加入试剂底部中，用上清液 冲洗 2-3次 毛细血管采血法毛细血管采血法 6 毛细血管采血法毛细血管采血法 l 注意事项 : A.对严重烧伤患者 ,可选择皮肤完整处采血 B.严格实行一人一针制 ,避免交叉感染 C.注意穿刺的深度 ,切忌用力挤压 ,以免混入组织液 ,影响检验结果 D.微量吸管应校正后使用 7 红细胞计数红细胞计数 (显微镜法显微镜法 ) l 试剂 (可用生理盐水 ) l 操作 l 取一小试管，加红细胞稀释液 1.99ml。 l 用微量吸管采血 10ul加入试管底部，用上清液 吸洗 23次，摇匀。 l 充池后静置 23分钟待红细胞下沉后用 高 倍镜 计数 5个中方格内的红细胞数。 l 计算 l 5个中方格内红细胞数 5 10 106 200=红细 胞数 /L l 注意事项 l 红细胞在计数池内分布不均匀时应重新冲池 8 . l l 白细胞计数 (显微镜法 ) l 试剂 冰醋酸 2.0ml,蒸馏水 98ml,10g/L亚甲蓝溶液 3滴 l 操作 l 取一小试管，加白细胞稀释液 0.38ml。 l 用微量吸管采血 20ul加入试管底部，用上清液吸洗 23 次，摇匀。 l 充池后静置 23分钟待白细胞下沉后用 低 倍镜计数 4个大 方格内的白细胞数。 l 计算 l 白细胞数 /L=4个大方格内的白细胞数 41020106 9 计数板计数板 10 血球计数板的结构血球计数板的结构 计数池深度 0.100mm 计数池大格 1mm 1mm 白细胞计数中方格 1/16mm 2 红细胞计数中方格 1/25mm 2 载玻片尺寸： 24200.6（ mm） 11 12 13 计数板下的红细胞形态 低倍 镜 下白 细 胞形 态 14 15 参考范围 成人： 4 10109/L（ 400010000/ul） 儿童： 5 12109/L（ 500012000/ul） 新生儿： 1520109/L（ 1500020000/ul） 临床意义 生物变异： 人体体液物质围绕体内环境稳定调节点的自然波动过程 ，包括日、月、季节的生物变异。 WBC 是 10.9% 增高：生理性：新生儿、剧烈运动、妊娠晚期、极度恐惧与疼痛。 病理性：大部分细菌性感染、尿毒症、烧伤、手术后、传染 性单核细胞增多症、白血病等。 减少：病毒性感染、伤寒、副伤害、疟疾、再生障碍性贫血、放疗 、 化疗、非白血性白血病。 注意事项 1.一些贫血患者血液中出现有核红细胞会影响白细胞计数，应校正 排除。 2.加全血时，应檫去吸管外周血液 ,先吹入试管底部，再吸上清液回洗几次。 3.滴入计数室内的混悬液，液量要适当，不得外溢或混有气泡；计数室内的细胞 分布均匀。 4.计数室边线的白细胞，可数上不数下，数左不数右，避免重复或漏计。 16 血红蛋白测定血红蛋白测定 (手工比色法手工比色法 ) l 试剂 血红蛋白稀释液 (文 -齐氏液 ) l 原理 血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白 ,再与氰结合成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白 ,在 540nm波长和液层厚度条件下 ,具有一定的吸光系数 ，根据吸光度，即可求得血红蛋白浓度。 l 操作 l 取一试管，加血红蛋白稀释液 5.0ml。 l 用微量吸管采血 20ul加入试管，用上清液吸洗 2-3 次，摇匀后静置 5-10分钟待比色。 l 计算 l 血红蛋白 g/L=吸光度 /44 64458251= 吸光度 367.7 17 参考范围 RBC 男： 4.0 5.51012/L 女： 3.5 5.01012/L HB 男：男： 120-160g/L 女：女： 110150 g/L ； 红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义 生理性增高：新生儿、高原居民、缺氧的应急反应等。生理性增高：新生儿、高原居民、缺氧的应急反应等。 病理性增高：真性红细胞增多症、心脏病、脱水等。病理性增高：真性红细胞增多症、心脏病、脱水等。 减少：临床各类贫血、白血病、手术后、产后、月经期等。减少：临床各类贫血、白血病、手术后、产后、月经期等。 18 嗜酸细胞 淋巴细胞 单核细胞 中性粒细胞 血小板 嗜碱细胞 19 Coulter系列血细胞分析仪系列血细胞分析仪 20 Sysmex 系列血细胞分析仪系列血细胞分析仪 21 Abbott系列血细胞分析仪系列血细胞分析仪 22 检测项目检测项目 (二十多个参数二十多个参数 ) l 白细胞 l 中性粒细胞百分数 l 淋巴细胞百分数 l 单核细胞百分数 l 嗜酸细胞百分数 l 嗜碱细胞百分数 l 红细胞 l 血红蛋白 l 平均红细胞体积 l 平均血小板体积 l 血小板 l 网织红细胞百分数 l 红细胞压积 l 平均血红蛋白量 l 平均血红蛋白浓度 l 中性粒细胞绝对数 l 淋巴细胞绝对数 l 单核细胞绝对数 l 嗜酸细胞绝对数 l 嗜碱细胞绝对数 l 红细胞分布宽度 l 血小板压积 23 库尔特原理库尔特原理 负压 血细胞 悬液 外电极 内电极 小孔 小孔管 小孔电流 样品杯 小孔近观 细胞悬液在负压的 驱使下恒定流经小 孔； 不良导体血细胞通 过小孔时引发瞬间 电阻变化； 将电阻变化转化为 脉冲记录。 脉冲的数量表示细 胞数量，脉冲的大 小表示细胞大小。 库尔特原理三要素：小孔、负压、电极 检测：细胞大小和数量 当一个不良导体颗粒，例如血细胞，通过两个电极之间时，导致电路的电阻抗 发生变化。 24 检测区域 白细胞 白细胞通过小孔白细胞通过小孔 库尔特原理库尔特原理 示波镜 25 三次计数三次计数 /延长计数延长计数 三次计数： 统计补偿；监控计数过程的稳定性 。 延长计数：针对低浓度的标本。 26 HGB 测定测定 (氰化高铁血红蛋白法氰化高铁血红蛋白法 ) l 库尔特的 HGB测定方法： 改良的氰化高铁血红蛋白试剂； l 溶血剂令红细胞破碎溶解，并将血红蛋白转换为氰