小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察

小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 姓名：高超 学号:201300140020 同组者：樊晓航 一、实验目的： 1掌握线粒体的超活染色原理及方法。 2观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。 二，实验原理： 1，活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害 的一种染色方法。它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不 影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死 亡。活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理 状态。活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主 要是染料的“电化学”特性起作用。碱性燃料的胶粒表面带阳离子， 酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离 子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。但不是任何染料 都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小 的染料配成稀的溶液来使用。一般以碱性染料最为常用，因为碱性 染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠 斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。其中詹钠斯绿和中性红 两种碱性染料是活体染色剂中最常用的染料，分别对线粒体和液泡 系有特异性的染色。詹纳斯绿 B 这种碱性染料是活体染色中重要的 材料，对线粒体的染色有专一性，可专一性地对线粒体进行活染， 这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧 化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这 些染料被还原成无色的色基。 2，线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。 细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供 的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内 某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色 素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染 料被还原，成为无色状态。 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显微镜下，线粒 体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与 细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺 盛的区域。 线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而 呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的 体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色 15min 后再盖上 盖玻片，以使材料充分氧化。 三，实验用品与仪器： 1.器材： 小白鼠，解剖盘，镊子，剪刀，载玻片，盖玻片，滴管，双凹片， 小烧杯，显微镜； 2.试剂 1/500 詹纳绿 B 染液；Ringer 试剂 四，实验步骤： 1，用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，取出肝脏， 选取边缘较薄的肝组织 0.5cm3，放入小烧杯中，用 Ringer 液冲洗去 血污。 2滴加 1/500 詹纳绿 B 溶液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净的肝 组织移入染液中，染色 2030min。以组织块边缘被染成蓝绿色为 准。 3吸去染液，将肝组织重置小烧杯中，滴加 Ringer 溶液 0.5ml，用 剪刀将组织充分剪碎制成悬液。 4取上述细胞悬液滴片，加上盖玻片，在高倍镜下观察。 五，实验及结果： 结果：小鼠肝细胞质中的线粒体被染成蓝绿色（理想状态下），且 分布均匀。 六，注意事项： 1在从小鼠体内取肝组织块时要尽量快，从而能够保证它更高的活 性。 2染色时要使组织块上面部分半露在染液外，不可完全淹没，以便 使线粒体酶系得到氧化。 3在选取肝组织片时要在处于边缘，且为由薄到厚的地方选取。 4染色结束后，加入的 Ringer 液的量不能太多，只需要刚盖过肝组 织块即可。如果量太多