发表版】z13076819 《中药口服配合灌肠治疗溃疡性结肠炎的临床观察及对肠粘膜il-6、il-10影响的研究》

2013-7-13 中药口服配合灌肠治疗溃疡性结肠炎的临床观察及对肠黏 膜 IL-6、IL-10 影响的研究* 18h，2013-10-11，临床研究 冯春霞 1，张强 2，陈晓蓉 3，穆桂萍 1，黄明河 1 （1 广东省深圳市中医院 ，广东 深圳 518033；2 广州中医药大学，广东 广州 510504；3 广东省深圳市第二人民医院 ，广东 深圳 518035） *基金项目：（深圳市科技计划项目）201003172 冯春霞 深圳中医院 中国广东省深圳市 518033 摘要：目的：观察理肠汤口服结合溃疡灵灌肠治疗溃疡性结肠炎（UC）的临床疗效，并 检测患者结肠黏膜组织中的 IL-6、IL-10 的表达情况，探讨其治疗机制。方法将 UC患者 60例，随机分为治疗组 30例与对照组 30例，治疗组给予理肠汤口服及溃疡灵灌肠；对照 组给予虎地胶囊口服，两组均治疗 2个月。治疗结束后进行临床疗效比较，并利用免疫组 化的方法，检测结肠黏膜组织中 IL-6、IL-10 在治疗前后的表达。结果 两组治疗后均能 改善腹泻、脓血便、腹痛等主要临床症状(P0.05)，治疗组优于对照组( P0.05)；治疗 组总有效率高于对照组(P0.05)；两组均能降低 IL-6的阳性表达率、提高 IL-10的阳性 表达量(P0.05)，治疗组优于对照组(P0. 05)。结论：理肠汤口服结合溃疡灵灌肠治 疗 UC有较好的临床疗效，能够明显改善患者症状，减轻肠黏膜炎症，降低肠黏膜 IL-6的 表达、升高 IL-10的表达。 关键词： 溃疡性结肠炎；中医药治疗；理肠汤；溃疡灵；IL-6；IL-10 The clinical observation of oral traditional Chinese medicine combined with enema for treating ulcerative colitis and the efficacy on intestinal mucosal IL-6、IL-10 【Abstract】Objective:To observe the clinical efficacy of orally taken Li-Chang decoction combined with Kui-Yang-Ling enema in treating ulc erative colitis，We detect the expression of colonic mucosa in patients with IL-6, IL-10, and explore its therapeutic mechanism.Method：60 cases of ulcerative colitis patients were randomly divided into 2 groups: treatment group and control group. Treatment group was given Li-Chang decoction orally and Kui-Yang-Ling enema; the control group was given Hu-di capsule; Both groups were treated for 2 months. The clinical ef fects were compared after treatments. By using immunohistochemistry, we detect two groups of patients with colonic mucosa tissue IL-6, IL-10 expression in the changes before and after treatment, and comparison. Result：The treatment group and the control group can improve clinical symptoms such as diarrhea, bloody mucopurulent stool and abdominal pain and other (P0.05),and the treatment group clinical curative effect (90%) better than the control group (73.33%) (P0.05), both of them can decreased the positive expression of IL-6, increase the rate of IL-10 positive expression. The treatment group decreased positive expression of IL-6 in colonic mucosa and improve positive expression of IL-10 was better than the control group (P0.05). Conclusion:Oral Li-Chang deco ction combined Kui-Yang-Ling enema has been proved a prominent clinical curative effect in treating ulcerative colitis, which could significan tly improve clinical symptoms, reduce the intestinal mucosal inflamma tory response, decrease the content of IL-6, and increase IL-10 content. Oral Li- Chang decoction combined Kui-Yang-Ling enema can adjust the immune function, inflammatory cytokines and inflammation cell inhibitor y factor, so as to achieve to the equilibrium state. Key words: ulcerative colitis; treatment of traditional Chinese Medicine ;Li-Chang decoction ;Kui-yang-ling ;IL-6 ;IL-10 溃疡性结肠炎（UC）是一种肠道炎症性疾病，其发病原因尚不十分清楚， 目前认为与免疫、环境、遗传等因素有关，其中与免疫因素关系最为密切。病 理条件下，肠壁对肠腔内微生物产生高敏状态,引起一系列由多种活性免疫细胞 参与的局部免疫反应,免疫细胞同时分泌多种细胞因子，包括炎性因子和炎性抑 制因子，炎性细胞因子，如 IL-6（IL-6）、白介素 8（IL-8）及肿瘤坏死因子 （TNF）等；和炎性抑制因子，如白介素 4（IL-4）、白介素 10（IL-10）等， 二者具有相互抗衡的作用。炎性细胞因子和炎性抑制因子的失衡状态是启动肠 道炎症反应的病理基础。理肠汤口服配合溃疡灵灌肠治疗 UC已在本科室应用近 10余年，成功解除了许多患者的病情，临床疗效确切，本研究通过对溃疡性结 肠炎病人治疗前后临床症状及结肠镜下表现进行对比，并通过结肠镜下采集标 本，通过免疫组化染色，观察其炎性细胞因子 IL-6和炎性抑制因子 IL-10在治 疗前后的变化。探讨该方对二者的影响作用。 1 资料与方法 1.1临床资料 选取 2011年 4月至 2012年 3月深圳市中医院脾胃病科门诊以及 住院患者，属于 UC活动期，诊断标准参考溃疡性结肠炎中西医结合诊治方案 1；中医辨证属脾胃气虚、湿热内蕴兼血瘀证患者 60例，临床上有腹痛、腹 泻、黏液脓血便、里急后重、大便不爽、乏力、舌淡暗，苔黄腻、脉滑数或濡 数等表现。年龄在 18-65岁之间，性别不限，签署知情同意书。随机分为治疗 组 30例与对照组 30例，（补充两组资料，性别，病程，年龄，合并症等，治 疗组男 17例，女 13例，平均年龄 368.3岁，平均病程 4.61.4年，对照组 男 15例，女 15例，平均年龄 349.6岁，平均病程 4.41.7年，两组患者均 无明显合并症。经统计，两组资料差异无统计学意义（P0.05）。 1.2治疗方法 治疗组给予理肠汤：党参 30g，炒白术 15g，椿根皮 30g，薏苡 仁 30g，徐长卿 30g，诃子 15g，赤石脂 30g，田七 10g，白及 15g，蒲黄 15g， 槐花 15g，甘草 10g。每日 1剂，水煎，分 2次空腹服用，并予溃疡灵灌肠，溃 疡灵组成：苦参 30 g，田七 10 g，白及 15 g，儿茶 15 g，青黛 10 g，蒲黄 15 g，槐花 15 g，五倍子 10 g，枯矾 10g。每日 1剂，水煎 1次，取汁 100 mL， 排便后保留灌肠，每日 1次；1 个月为 1疗程，共治疗 2个月。对照组给予口 服虎地胶囊(安徽古井集团九方制药有限公司，国药准字 Z20020035)，主要药 物组成：朱砂七、虎杖、地榆（炭）、北败酱、白花蛇舌草、二色补血草、白 及、甘草。每次 4粒，每日 3次，1 个月为 1疗程，治疗 2个月。每个疗程结 束后观察记录患者的相关症状、体征，治疗前及治疗 2个疗程后分别行电子结 肠镜检查及并取组织标本，通过免疫组化测定患者肠黏膜炎症因子 IL-6、IL- 10的表达。 1.3 标本采集 治疗前后行结肠镜检查，同时各取病变部位组织标本 3块，活检 标本用 4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，3m 厚连续切片，苏-伊染色，免疫组化 检查备用。 1.4实验材料 兔 IgG-免疫组化试剂盒（SABC 即用型，产品编号：SA1022，生 产批号：07L24CJ）、DAB 显色试剂盒(产品编号：AR1022)、兔抗 IL-10 多克 隆抗体(产品编号：BA1201，规格 0.2ml，生产批号：Y-B1-07D10A)均为博士德 生物技术有限公司产品，兔抗 IL-6多克隆抗体(生产批号：DA2178-0.1ml)为生 工生物工程（上海）股份有限公司产品， 操作按试剂盒说明书进行。 1.5实验步骤 载玻片防脱片剂处理；脱蜡、水化；滴加新鲜配置的 3%过氧化氢 甲醇溶液，以阻断内源性过氧化物酶的活性；抗原修复；滴加 5%BSA封闭液 1 滴，室温下封闭；滴加兔抗 IL-10（或兔抗 IL-6）稀释液（1：200 稀释）， 4过夜；滴加生物素化二抗（羊抗兔 IgG-Biotin）；滴加 SABC 液，室温下孵 育 20 分钟。滴加新鲜配制的 DAB 溶液，显微镜观察；苏木素染色，盐酸酒精 分化；脱水，透明，封片，显微镜观察。已知 IL-6/IL-10 染色阳性的切片作 为阳性对照，以 PBS 代替一抗作为阴性对照。IL-6 的阳性表达为细胞质和（或） 细胞膜被染色呈棕黄色，IL-10 阳性表达为细胞质被染成棕黄色。先作定性观 察，再于高倍镜下（400）随机选取 5 个互不重叠的视野，以 Image-Pro Plus 6.0软件测定每一视野中阳性染色物质的累积光密度值，取均值作为该切 片中 IL-6/IL-10 的相对表达量。 1.6疗效标准：综合疗效参照溃疡性结肠炎中西医结合诊治方案 1中的疗 效评定标准。两组患者治疗前、后主要症状及镜下肠黏膜量化积分：分别于治 疗前、后选取 UC典型症状腹泻、脓血便、腹痛进行积分，量化积分表参照 2002年中药新药临床研究指导原则制定。结肠黏膜病变积分采用 Baron评 分标准 2。 1.7统计学处理 采用 SPSS16.0软件进行统计学分析，计数资料采用 x2检验， 计量资料采用 t检验。P0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2.1两组综合疗效比较 见表 1。治疗组总有效率明显高于对照组 (P0.05)。 表 1 两组综合疗效比较 组别 n 完全缓解 显效 有效 无效 总有效（%） 治疗组 30 11 10 6 3 27（90.00） 对照组 30 5 7 10 8 22（73.33） 与对照组比较，P0.05。 2.2两组治疗前、后主要症状积分比较 见表 2。两组患者在治疗后腹泻、脓血 便、腹痛、肠镜下黏膜病变积分与治疗前比较有明显统计学意义（P0.05）， 治疗组均优于对照组（P0.05）。 表 2 两组治疗前后症状及肠镜黏膜病变积分（分， S） 组别 腹泻 脓血便 腹痛 肠镜下表现 治疗前 5.702.136 5.302.322 5.402.283 5.902.155治疗组 （n=30） 治疗后 3.001.762* 2.401.993* 2.202.074* 2.401.831* 治疗前 5.401.993 5.502.097 5.402.283 5.802.219对照组 （n=30） 治疗后 4.101.845* 4.102.295* 3.902.249* 4.002.233* 与本组治疗前比较，*P0.05；与对照组治疗后比较，P0.05。下同。 2.3 两组肠黏膜 IL-6、IL-10 表达比较 见表 3。两组治疗后肠黏膜 IL-6、IL- 10均明显改善（P0.05）；治疗组表达均明显优于于对照组（P0.05）。 表 3 两组肠黏膜 IL-6、IL-10 表达比较（分， S） 组别 IL-6积分 IL-10积分 治疗前 176.5718.452 148.6312.530治疗组 （n=30） 治疗后 139.0713.936* 185.2011.427* 治疗前 183.0314.836 150.1012.324对照组 （n=30） 治疗后 162.4716.479* 166.379.960* 3 讨论 UC患者多以脾胃气虚为本，湿热瘀阻肠络为标，脾胃气虚、湿热内蕴兼血 瘀是 UC的一个常见证型。我科黄明河教授根据多年的临床经验，认为本病治疗 上宜健脾益气治本，清热化湿、活血化瘀治其标，标本兼治才能中其病机要害。 导师自拟理肠汤口服治疗 UC，其中党参、白术益气健脾；椿根皮、薏苡仁、徐 长卿清热祛湿、解毒消肿；诃子、赤石脂涩肠止泻；田七、蒲黄、白芨、槐花 活血化瘀、止血生肌。全方共奏健脾益气、清热化湿、活血生肌之功。对于有 乙状结肠和（或）直肠糜烂、溃疡者，加用溃疡灵灌肠治疗，方中以苦参、青 黛清热解毒燥湿；田七、蒲黄、白及、儿茶、槐花、五倍子、枯矾活血敛疮、 止血生肌。通过灌肠的方法治疗，可以使药直达病所。 UC是一种肠道炎症性疾病。病理条件下，肠壁对肠腔内微生物产生高敏状 态,引起一系列由多种活性免疫细胞参与的局部免疫反应,免疫细胞同时分泌多 种细胞因子，包括炎性因子和炎性抑制因子，炎性因子驱使大量中性粒细胞、 淋巴细胞、巨噬细胞聚集于局部肠道，产生大量的组织降解酶和细胞毒性氧代 谢产物，引起肠道粘膜的炎症、糜烂及溃疡等损伤，炎性抑制因子则抑制免疫 细胞合成炎性因子，抑制炎症等损伤的形成。因此，由活性免疫细胞分泌的多 种细胞因子在肠道炎症的发生、发展过程中具有重要的调控作用 3。根据细胞 因子对肠道炎症的不同影响作用,分为炎性细胞因子，如 IL-6（IL-6）、白介 素 8（IL-8）及肿瘤坏死因子（TNF）等；和炎性抑制因子，如白介素 4（IL- 4）、IL-10（IL-10）等，二者具有相互抗衡的作用。在生理条件下，炎性细胞 因子与炎性抑制因子处于相对平衡状态，在病理条件下，UC 患者肠道内炎性抑 制因子表达水平下降，炎性细胞因子表达水平升高，且升高水平与疾病的严重 程度呈正相关，大量的炎性细胞因子可趋化中性粒细胞、自然杀伤细胞等炎性 细胞进入肠道病变部位，引起一系列肠道炎症反应和组织破坏，因此炎性细胞 因子和炎性抑制因子的失衡状态是启动肠道炎症反应的病理基础。 IL-6和 IL-10分别是目前研究比较深入的炎性因子和炎性抑制因子。IL-6 与炎症程度呈正相关 4-5，而且活动期 UC患者病变黏膜 IL-6 mRNA和蛋白表达 较非病变黏膜、正常黏膜对照明显升高，并和炎症分级呈正相关。IL-6 主要由 活化的巨噬细胞、淋巴细胞、及上皮细胞分泌，是一种作用广泛的促炎症因子, 其促炎性作用包括：促时 B细胞活化、增生并分化为浆细胞，增加免疫球蛋白 的合成；促时 T细胞增殖，刺激细胞毒性 T细胞反应；激活造血干细胞，使粒 细胞、单核细胞、巨噬细胞增殖等；一系列研究发现 UC患者血清 IL-6浓度明 显升高，且与炎症范围、相关 6，总之，IL-6 与疾病的严重程度呈正相关，可 用于监测疾病的活动和治疗效果。 IL-10又名细胞因子合成抑制因子，是典型的抗炎与免疫抑制性细胞因子， 主要由活化的单核细胞和巨噬细胞产生，主要通过抑制激活的单核细胞、巨噬 细胞、粒细胞和 T淋巴细胞发挥有效功能，在稳定肠道粘膜内环境中发挥重要 作用。已知，UC 患者 T淋巴细胞中的 IL-10mRNA水平呈显著性降低,IL-10 阳性 细胞在结肠中出现的频率也明显减少,即使非炎性反应的回肠,T 淋巴细胞中的 IL-10mRNA水平也有所降低，并且无论在结肠和回肠中，IL-10mRNA 水平都和疾 病的活动度有关 7。 本研究表明，UC 患者经口服理肠汤及溃疡灵灌肠治疗后，炎性细胞因子和 炎性抑制因子的失衡状态得到改善，从而使炎症反应减轻。可见理肠汤口服配 合溃疡灵灌肠治疗 UC，不论是从患者症状及肠镜下表现等宏观方面，还是从患 者肠黏膜炎症因子等微观方面都有明显的好转。 参考文献 1 中国中西医结合学会消化系统疾病专业委员会.溃疡性结肠炎中西医结合诊治方案J. 中国中西医结合消化杂志,Vol .19 No.1 P.61Feb.2011. 2 Koppetal.inhibition of NF-KB By sodiam salicylate and aspirin.Science 1944; 265:956-959. 3 Lshiguro Y.Mucosal proinflammatory cytokine production correlates with endoscopic activity of ulcerative colitis. J Gas