丹参分散片中总丹参酮和丹参酮ⅱa的含量测定方法研究

丹参分散片中总丹参酮和丹参酮 A 的含量测定方法研究 钱佳华，宋崎*，马能溢 （上海市中药研究所，201203） 摘要：目的 建立丹参分散片的总丹参酮和丹参酮 A 的含量测定方法。 方法 采用 UV 测定丹参分散片中总丹参酮,以丹参酮 A 为对照品，检测波长： 268nm；采用 HPLC 法测定丹参分散片中丹参酮 A，流动相：甲醇水 （75：25） ；流速：1ml/min；柱温：25；检测波长： 270nm。 结果 总丹参 酮在 4.3221.60 g/ml 范围内，吸收度与溶液浓度线性关系良好， r0.9999 （n5） ，方法回收率为 98.25；丹参酮 A 在 0.020.20g 范围内 与其峰面积呈良好线性关系，r0.9998（n6） ，方法回收率为 99.64。 结论 该方法简便、准确，重复性好，可有效控制丹参分散片的质量。 关键词：丹参分散片 总丹参酮 丹参酮 A UV HPLC 所属专业药剂（药剂质量标准研究） 丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根，性微寒味 苦，具有活血化瘀、养血安神、凉血 消痈的功效，所以丹参制剂为治疗心 肌缺血性冠心病、心绞痛的常用中成 药 1，其有效成份主要为脂溶性的丹 参酮类和水溶性酚酸类物质，丹参酮 A是主要脂溶性有效成份 2，有明显 的药理活性。在临床心血管疾病的治 疗中，丹参酮 A具有抗动脉粥样硬 化、抑制心肌肥厚、抗心律失常和抗 心肌缺氧等多种作用，其在冠心病、 心绞痛治疗中可获得满意疗效。故本 文制备了丹参分散片，分别采用UV 和HPLC对总丹参酮和丹参酮 A进行 含量测定方法的研究，方法简单、准 确。 1 仪器与试药 1.1 仪器 岛津高效液相色谱仪： SCL10ATVP 化学工作站、SPD- 10AVP 紫外检测器；岛津 2401PC 型 紫外分光光度仪；CQ 型超声波清洗 器（上海沪超声波仪器有限公司）； 分析天平（十万分之一，Sartorius 公 *宋崎(1978) ,女,电话: E- mail:。 司）。 1.2 试药 丹参酮 A 对照品（中国药 品生物制品检定所，批号 110766200417） ；丹参分散片（自 制） ；甲醇（色谱纯、Fisher 公司） ； 丙酮（分析纯） ；甲醇（分析纯） ；氯 仿（分析纯） 。 2 方法与结果 2.1 总丹参酮的测定 2.1.1 溶液制备 对照品溶液制备：精密称取丹参酮 A 对照品适量，加氯仿制成每 ml 含 0.108mg 的溶液，即得。 供试品溶液制备：取丹参分散片 10 片，研细。取约 0.2g 粉末，精密 称定，加入 50ml 氯仿，超声 15min， 放冷，滤过，蒸干。残渣加 NaOH 溶液（pH=10）40ml 溶解，过滤，蒸 干。残渣加丙酮溶解，过滤，滤液 蒸干。残渣用氯仿溶解，过滤，用 氯仿定容至 25ml，摇匀。 2.1.2 最大吸收峰的波长确定 取 2.1.1 项制备的对照品溶液、供试品溶 液、阴性样品溶液。对照品溶液需稀 释：精密吸取对照品溶液 2ml，置于 10ml 容量瓶，加氯仿至刻度，摇匀， 即得。在 190400nm 波长范围内进 行扫描，结果对照品和样品均在 268nm 处有最 大吸收；阴性样品则在 260280nm 范围内无最大吸收。 （见图 1） 图 1 最大紫外吸收度的波长确定 1.对照品 2.样品 3 .阴性 2.1.3 线性关系考察 分别精密吸取 2.1.1 项下制备的对照品溶液 1、2、3、4、5ml，置于 25ml 容量瓶 中，加氯仿稀释至刻度，摇匀，即得。 以氯仿为空白，在 268nm 波长处测定 吸收度。以吸收度 A 为纵坐标、浓度 C（g/ml）为横坐标绘制标准曲线， 得回归方程： A0.128+0.028472C ，r0.9999，表 明总丹参酮在 4.3221.60g/ml 范围 内，吸收度与溶液浓度呈良好的线性 关系。 2.1.4 重复性试验 取丹参分散片 5 份， 按 2.1.1 项下方法制备供试品溶液， 测定吸收度，结果 RSD1.34，结 果表明本方法重复性好。 2.1.5 加样回收率试验 取已知含量的 丹参分散片样品 5 份，每份约取 0.1g，精密称定，分别精密量取丹参 酮 A 溶液 2ml（0.095mg/ml） ，加入 50ml 氯仿，超声 15min，放冷，滤过， 蒸干。残渣加 40mlNaOH 溶液 （pH=10）溶解，过滤，蒸干。残渣 加丙酮溶解，过滤。滤液蒸干，残渣 用氯仿溶解，过滤，用氯仿定容至 25ml，摇匀，即得。测定吸收度，根 据标准曲线计算样品中总丹参酮的含 量。结果见表 1。 表 1 加样回收率 样品 含量 (mg) 加入 量 (mg) 实测值 (mg) 回收 率 （ ） 平均 回收率 （） RSD （ ） 0.21 0.19 0.39 97.50 0.21 0.19 0.38 95.00 0.22 0.19 0.41 100.00 0.21 0.19 0.39 97.50 0.21 0.19 0.39 97.50 97.50 1.81 2.1.6 样品溶液制备及含量测定 取 3 批丹参分散片，按 2.1.1 项下方法制 备供试品溶液，测定吸收度。根据标 准曲线，计算样品中总丹参酮的含量。 结果见表 2。 表 2 总丹参酮含量测定结果 批号 总丹参酮含量（） 20071210 0.22 20071212 0.21 20071214 0.21 2.2 丹参酮 A 的测定 2.2.1 溶液的制备 对照品溶液制备：精密称取取丹参酮 A 对照品适量，加甲醇制成每 ml 含 0.2mg 的溶液，即得。 供试品溶液制备：取丹参分散片 10 1 2 3 片，研细。取约 0.2g 粉末，精密称定， 置于 25ml 容量瓶，加入 20ml 甲醇， 超声 15min，放冷，用甲醇定容至刻 度，摇匀。滤过，取续滤液，即得。 2.2.2 色谱条件 色谱柱：双子星 C18（150 4.6mm，5m） ；流动相： 甲醇水（75：25） ；流速： 1ml/min；柱温：25；检测波长： 270nm；进样量：10l。在此条件下， 丹参酮 A 分离保留时间为 25min， 分离情况良好；阴性无干扰，见图 2。 图 2 1. 丹参酮 A 对照品、阴性及样品 色谱图 A丹参酮 A 对照品 B阴性 C样品 2.2.3 线性关系考察 分别精密吸取 2.2.1 项下对照品溶液 0.5、1、2、3、4、5ml 置于 50ml 容 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。 按 2.2.2 项下色谱条件测定，以峰面 积为纵坐标，丹参酮 A 量为横坐标， 绘制标准曲线，得回归方程： Y5213853.906X18362.712，r0. 9998，表明丹参酮 A 在 0.020. 20g 范围内，进样量与峰面积呈良好 的线性关系。 2.24 精密度试验 取 2.2.1 项下对照 品溶液，按 2.2.2 项下色谱条件，连 续测定 5 次，结果 RSD1.28。表 明仪器精密度良好。 2.2.5 供试品的稳定性试验 取 2.2.1 项下供试品溶液于室温放置，分别于 0、1、2、4、6、8、12、24h，按 2.2.2 项下色谱条件测定， 结果 RSD0.89，即供试品溶液在 24h 内稳定。 2.2.6 重复性试验 取同一批号丹参 分散片，按 2.2.1 项下供试品溶液制 备方法平行制备 6 份，按 2.2.2 项下 色谱条件测定，测得丹参酮 A 平均 含量为 0.13，RSD1.01。 2.2.7 加样回收率试验 取已知含量的 丹参分散片粉末 5 份，每份约 0.1g， 精密称定，置于 25ml 容量瓶，加入 丹参酮 A 溶液 0.5ml（0.20mg/ml） ， 加入 20ml 甲醇溶解，超声 15min，放 冷，稀释至刻度，摇匀。过滤，取续 滤液。按 2.2.2 项下条件测定，结果 见表 3。 表 3 加样回收率 样品 含量 (mg) 加入 量 (mg) 实测 值 (mg) 回收 率 （ ） 平均 回收 率 （ ） RSD （ ） 0.14 0.10 0.23 95.83 0.15 0.10 0.24 96.00 0.14 0.10 0.23 95.83 0.14 0.10 0.24 100.00 0.14 0.10 0.24 100.00 97.53 2.31 2.2.8 样品的测定 取 3 批丹参分散 片，按 2.2.2 项下条件测定，结果见 表 4。 表 4 样品测定结果 批号 丹参酮 A 含量（） 20071210 0.13 20071212 0.14 20071214 0.13 3 讨论 3.1 本文曾考察了 3 种不同的总丹参 酮的取方法：（）法：取丹参分散 片粉末约 0.2g，精密称定，置于锥形 瓶中，加入乙醚 20ml，超声 15 分钟， 放冷，过滤，将滤液蒸干，残渣用乙 酸乙酯溶解，溶液置于 25ml 容量瓶， 稀释至刻度，摇匀即得。 （）法： 取丹参分散片粉末约 0.2g，精密称定， 加入 20ml 乙醇，水浴回流 1 小时， 滤过，滤液蒸干。残渣加 10ml 纯水 溶解，以等倍量氯仿萃取 3 次，收集 氯仿层，将氯仿溶液蒸干。残渣用甲 醇溶解，溶液置于 25ml 容量瓶，稀 释至刻度，摇匀即得 3。 （）法：取 丹参分散片粉末约 0.2g，精密称定， 置于锥形瓶中，加入甲醇 20ml，超声 15 分钟，放冷，过滤，滤液置于 25ml 容量瓶，稀释至刻度，摇匀即得。 在这 3 种方法中， （）法杂质 干 扰很小，但总丹参酮提取率较低。 （）法提取率较好，但操作繁琐， 回收率很低。 （）法操作简单，但 杂质很多，对测定有很大的干扰。故 综合了（）法和（）法的优点， 得出了本文所采用的方法，既提高了 总丹参酮的提取率，又大大较少了杂 质的干扰，快速、有效。 3.2 本文同时考察了不同提取时间对 丹参分散片中丹参酮 A 含量测定的 影响，结果，丹参酮 A 在 15min 时 已提取完全，故将超声提取定为 15min。 （见表 5） 表 5 超声提取不同时间丹参酮 A 含量的比 较 超声提取时间（min） 丹参酮 A 含量（） 15 0.14 30 0.14 45 0.13 3.3 总丹参酮为丹参分散片中的脂溶 性有效部位，本文所采用的 UV 法快 速，简便。丹参酮 A 是丹参脂溶性 有效部位中含量最高的有效成份，所 以丹参酮 A 含量的高低影响丹参分 散片的疗效。因此，对总丹参酮和丹 参酮 A 同步检测，能全面体现丹参 分散片的内在质量。 参考文献 1 刘燊，宋阳，李玫.丹参的药理作用研究 及临产应用.中国误诊学杂志， 2006，6（24）：47324733. 2 石远，姜同英，王思玲.丹参酮及其制 剂开发.世界临床药物，2007,28(7)： 439443. 3 杜敏，黄湘.不同提取方法测定丹参药材 中丹参酮 A 含量的比较研究.现代中药 研究与实践，2005，19（3）：3334. Determinations for Total Tanshinones and Tanshinone A in Salviae Solid Dispersible Tablets Qian Jiahua，Fan Minwei，Ma Nengyi （Shanghai Instsute of Chinese Materia Medice） ABSTRACT: Objective: To establish the methods for the determinations of Total tanshinones and Tanshinone A in Salviae solid dispersible tablets. Methods: Total tanshinones were determined by UV at the wavelength 268 nm, with Tanshinone A as standard control. Tanshinone A was determined by HPLC at the wavelength 270 nm.The mobile phase was methanol-water(75:25). The column temperature was kept at 25The flow -rate was 1.0ml/min. Results: The linear range for total tanshinones was 4.3221.60 g/ml and r = 0.9999（n5）. The average recovery was 98.25%. The linear range for tanshinone A was 0.020.20