中性粒细胞碱性磷酸酶染色

中性粒细胞碱性磷酸酶染色检查的标准操作程序(SOP) 实验室名称 项 目 编 号 制定日期 细胞室 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 * *年*月*日 【目的】 指导中性粒细胞碱性磷酸酶染色检查。 【该 SOP 变动程序】 本标准操作程序的改动可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人员 批准签字：专业主管、质控主管、科主任。 【用途】 1）鉴别白血病（低）和白血病样（高）反应。 2）鉴别淋巴瘤（高）和何杰金病。 3）鉴别细菌性感染（高）与病毒性感染。 【染色原理】 基质中 甘油磷酸钠在碱性磷酸酶与触媒剂镁离子的存在下，水解成磷酸钠 与甘油，磷酸钠再与氯化钙结合成不溶解的磷酸钙，再与硝酸钴形成磷酸钴， 最后与硫化铵成为黑色的硫化钴沉淀。 【分布】 血细胞的碱性磷酸酶（简称“碱酶” ）活性，主要见于成熟的中性粒细胞（故称 NAP） ，定位于胞浆中。但当碱酶的活性极强时，由于扩散作用常可使黑色沉淀 遮盖于胞核上。其他细胞系均为阴性反应。 【试剂配置】 1.作用液 3%甘油磷酸钠 10ml 2%巴比妥钠水溶液 10ml 蒸馏水 20ml 2%氯化钙 20ml 2%硫酸镁 2ml PH9.2-9.5 为适当。 2. 2%硝酸钴（冰箱保存可用 12 个月） 。 3. 1%硫化铵（用时新配，每 50ml 分装 1 瓶，冰箱保存） 。 4. 0.5%伊红、1% 藏红或 2%甲绿溶液。 【染色步骤】 a) 新鲜干燥的涂片固定于 95%酒精中 10 分钟。 b) 水洗数次，晾干。 c) 加入 37作用液中，孵育 46 小时（作用液事先预温 30 分钟） 。 d) 自来水缓缓冲洗数次，待干。 e) 2%硝酸钴 5 分钟。 f) 水洗，待干。 g) 1%硫化铵 5 分钟（此液只能用 4 小时） 。 h) 自来水冲洗，再用蒸馏水涮洗，待干。 i) 0.5%伊红复染 3 分钟或 2%甲绿复染 10 分钟。 j) 水洗，晾干，镜检。 【对照样本】 选择已知酶活性强的标本与被检标本同时染色，如所染阳性样本未呈现应有 的阳性反应，说明染色技术有问题。 【结果判断】 1.阳性颗粒呈棕黑色（与过氧化酶阳性颗粒相似，但粒小色淡） ，定位于成熟 中性粒细胞胞浆内。 2.计数方法，按碱酶活性强弱，分为 5 级。 0 级 胞浆呈原色，无颗粒。 级 胞浆呈浅棕色和浅灰色，小颗粒占胞浆面积 2550% 级 胞浆呈棕色片状沉淀，小到中等颗粒约占胞浆面积的 5075%。 级 胞浆充满棕黑色沉淀，分布均匀，中到大颗粒占胞浆面积的 75 100%。 级 胞浆充满深黑色致密的团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中到大颗粒占 胞浆面积的 100 每例的血片，均计数 100 个中性粒细胞，求出碱性磷酸酶阳性细胞的百分比 （阳性率） ，并按碱酶活性的强弱不同，求得阳性指数（积分） 。 【临床意义】 1.正常人：中性粒细胞的碱性磷酸酶活性较弱，阳性率为 50%左右（2080%） ， 阳性强度多为+ ，积分为 80 左右（60100） 。 2.炎症感染：各种化脓性感染，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性显著增加。病毒 感染，则变化较小。 3.白血病样反应：碱酶活性增高最显著，阳性率为 50100%。阳性强度全部为 +或+，积分为 200 左右（80380） 。 4.白血病 1）粒细胞性：急性、亚急性、慢性白血病和绿色瘤皆剧减，慢性之积分可降为 0。接受治疗缓解时可恢复正常，复发时可再度降低。 2）单核细胞：血涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶活性降低（积分多为 0） 。 3）淋巴细胞性：急性白血病、淋巴肉瘤、中性粒细胞的碱性磷酸酶活性增强。 5贫血：各种贫血，其中性粒细胞的碱性磷酸酶的活性皆增高，尤以再生障碍 性贫血最显著。 6. 其他疾患：如多发性骨髓瘤、原神经细胞瘤、风湿热、糖尿病、真性红细胞 增多症，以及外科手术后，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性都有所增高。 【注意事项】 1. 含有 甘油磷酸钠的基质作用液必须新鲜配置，置冰箱中待用，两天内 有 效。 2. 作用液的 PH 值，必须在 9.4 左右（以 1N 或 0.2mol/L NaOH 纠正） 。 3. 每次实验应同时作阳性标本为对照。 4. 中性粒细胞的碱性磷酸酶活性在不同状态下的改变： 年龄：1 岁以下的幼儿较高，60 岁以上的老人较低。 性别：女性较高。 时间：清晨到中午逐渐增高，到下午 6 时以后又开始降低。 当垂体、肾上腺皮质功能亢进时