选修1----21微生物的实验室培养

巴斯德 法国，微生物学家失败的原因：发酵物中混入了杂菌到目前为止， 几十项诺贝尔生理或医学奖，化学奖 都与微生物学有关微生物的类群原生生物：原核生物 :真菌 :病毒如酵母菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等无 细胞结构：真核细胞细菌、蓝藻 原核细胞有细胞结构课题 1 微生物的实验室培养1.提供营养和条件 2.防止污染一 .培养基： 微生物生存的环境和营养物质1.基本成分：思考：微生物 “吃 ”什么 ？碳源、氮源、水、无机盐 碳源 无机碳源：有机碳源： CO2、 CO32-、 HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物 氮源 无机氮源：有机氮源： NH4 、 NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含 C、 H、 O、 N的 有机物 是 异 养型微生物的：碳源 、 氮源 、 能源。一 .培养基： 微生物生存的环境和营养物质2.特殊营养 ： 维生素（如乳酸杆菌）、碱基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、 氧气的需求： 霉菌（ pH调至酸性）细菌（ pH调至中性或微碱性）厌氧生物需提供无氧条件。一 .培养基： 微生物生存的环境和营养物质4.培养基种类固体培养基 液体培养基有 无 凝固剂琼脂分离 鉴定工业 生产化学成分：物理性质：天然培养基 合成培养基划分标准 培养基种类 特点 用途物理性质化学成分 天然培养基合成培养基用途鉴别培养基培养基的种类不加凝固 剂加凝固 剂 ，如 琼 脂工 业 生 产观 察微生物的运 动、分 类鉴 定微生物分离、 鉴 定、活菌 计 数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质 工 业 生 产培养基成分明确 分 类 、 鉴 定在培养基中加入某种化学物质 ,以抑制不需要的微生物的生 长 ,促 进 所需要的微生物的生 长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示 剂或化学 药 品 ,用以 鉴别 不同种 类 的微生物鉴别 不同种 类 微生物液体培养基半固体体培养基固体体培养基选择培养基液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长 均匀混浊生长均匀混浊生长 沉淀生长沉淀生长back半固体培养基：半固体培养基：(是否运动是否运动 ) 无动力无动力有动力有动力 (弥散弥散 )固体培养基：菌落固体培养基：菌落分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞几种选择培养基几种选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基back牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基 。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至 1000mlNaCl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g琼脂 20.0g5. 配制原则 目的明确： 营养全面、浓度适宜、比例恰当 适宜的 pH值：有机碳源异养型：根据微生物的 种类、培养目的 选择原料自养型： 不 加碳源加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸（ CO2碳源）生产 科研耐高温需保持干燥的 物品， 160 170 1 2小时接种环、接种针等 金属用具7075 、 30min 80 、 15min100 、 56min消毒 灭菌定义方法较为 温和 理化方法，杀死 部分有害菌体（ 不 包括芽孢、孢子）强烈 的理化方法，杀死 所有微生物（包括 芽孢、孢子 ）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121 、 15 30min二 .无菌技术： 防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（ 1） 培养细菌用的培养基与培养皿（ 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管（ 3） 实验操作者的双手2.无菌范围： 实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程二 .无菌技术： 防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：酒精灯旁操作超净工作台单个或少数菌体2.特征： 大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：1.定义：三 .菌落鉴定菌种 的重要依据固体 培养基上大量繁殖 子细胞群体1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至 1000mlNaCl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g琼脂 20.0g四 .大肠杆菌的纯化培养 ： 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算： 培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 取纸 蛋白胨、 NaCl 琼脂 补水定容4.调 pH、 分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞 ,形成单个菌落倒平板倒平板约 50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基二 .大肠杆菌的纯化培养 ： 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌： 平板划线法：菌种划 3个 平板1个 不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。6支 试管，分别加入 9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106 稀释涂布平板法 ：a.梯度稀释菌液 ：菌液微量 移液器 稀释涂布平板法 ：a.梯度稀释菌液 ：b.涂布平板 ：不超过 0.1ml各 梯度分别涂布 3个平板1个 不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍 平板划线法：二 .大肠杆菌的纯化培养 ： 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：1.接种： 稀释涂布平板法 ：2.培养： 将 接种后 的培养基和一个 未接种 的培养基放入 37 恒温箱中培养 12h 24h后，观察并记录三 .菌种的保藏：1.