急性白血病免疫分型ppt演示课件

.,1,急性白血病免疫分型,.,2,简介,白血病免疫分型是利用单克隆抗体（McAb）对骨髓或外周血中的白血病细胞进行免疫标记，检测其细胞膜及细胞浆抗原，分析其表型，以了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度，从而诊断白血病的类型。,.,3,原理,造血细胞分化抗原：造血细胞分化过程中由细胞核内染色体上的基因编码的镶嵌蛋白,存在于细胞表面和（或）细胞浆内，随着分化成熟过程不断发生改变。,.,4,原理,造血细胞分化抗原出现、增多、减少或消失与造血细胞所属系列和分化程度密切相关，因而可作为鉴别和区分造血细胞的标记。,.,5,原理,急性白血病细胞来自造血干/祖细胞的恶性克隆性增生，既保持造血细胞的部分性质，又有其独特的生物学和免疫学特性： （1）急性白血病主要表现在骨髓或外周血中原始幼稚细胞显著增多，正常细胞成分受抑制，因此免疫分型表现在带有某种抗原标志的细胞比例异常增多或减少，例如T-ALL时的CD7+细胞远远超过正常人的30%，而CD13+/CD33+细胞的比例降低，并可能同时伴有CD34+、TdT+细胞的异常增多；,.,6,（2）错位表达：即同一细胞出现异系列抗原混合表达，如AML细胞出现CD7、CD10抗原，ALL细胞出现CD33、CD14等；（3）抗原非同步化表达：如CD34与分化成熟较晚期的抗原不应该同步表达，但白血病细胞有时会出现CD34/CD56、CD34/CD20等同时表达的异常现象；（4）抗原丢失：如CD13、CD33是髓系最常见抗原，但少数AML却不表达或仅表达其中一项。,原理,.,7,如何进行免疫分型,选择良好的设门方法：FSC/SSC设门法,CD45SSC设门法；目的：排除正常细胞的干扰，将不正常的细胞群孤立出来便于重点分析。,.,8,CD45是所有白细胞的抗原，其表达量与细胞分化程度具有高度相关性，即细胞分化程度高的细胞，CD45表达量高；分化程度低的细胞，CD45表达量低。CD45表达量在成熟淋巴细胞最高，单核细胞、粒细胞、早期造血细胞依次减弱。红细胞(中、晚幼红细胞、成熟红细胞)不表达CD45。侧向角光散射(SSC)反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞SSC最高，依次为单核细胞、淋巴细胞、早期造血细胞、红细胞。,.,9,通过CD45SSC散点图即可获得初步印象。若同时加上一个或二个以上其它单抗进行二、三色甚至四色分析，则很容易识别非正常细胞群的表型。通常在CD45/SSC散点图上,白血病细胞群体多出现于由淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和红细胞围成的称为“白血病窗”的区域内。,根据骨髓细胞CD45/SSC 图中分布情况设门圈定各类细胞,R1 门为成熟淋巴细胞R2 门为正常单核细胞位置R3 门正常粒细胞位置R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置R6 门为幼稚髓细胞出现位置白血病细胞通常会在R4 R6 两门位置处出现,正常骨髓经CD45/SSC射门的散点图,CD45/SSC 图中可见CD45 强阳性SSC 低信号的细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体中等强度的CD45 表达SSC 信号最强的细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体CD45 表达与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体绿色细胞群体CD45 阴性SSC 信号最低的有核红细胞和细胞碎片,.,12,单克隆抗体的选择,白血病免疫分型时尽量选用系列特异性强的单抗作为一线单抗，目前较为公认系列特异性单抗有T系的CD3、CD2；B系的CD79a、CD22 、CD19和髓系的MPO、CD117、CD13等。一般说来胞浆比胞膜的标志特异性强。用这些特异性强的标志作为初筛，基本可确定T系、 B系或髓系，随后即以二线单抗（CD14,CD36,CD41,CD34,CyIg,SmIg等）做进一步的免疫分型，以确定最后亚型。,.,13,各系列造血细胞表达的主要相关抗原：T淋巴细胞系：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8；B淋巴细胞系：CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD79；粒、单核细胞系：CD11b/c，CD13，CD14，CD15，CD33、CD64、CD65w、CD117及MPO；巨核细胞系：CD41、CD42、CD61、CD62、CD36；红细胞系：CD71、CD36、血型糖蛋白A（Glycophorin）；其它：造血干祖细胞共同抗原CD34、CD38及末端脱氧核糖核苷酸转换酶（TdT），人类主要组织相容性抗原HLA-DR，白细胞共同抗原CD45等。,.,14,CD45/SSC设门中白血病细胞群表面标志阳性判断标准：阳性率阴性对照的20，对于MPO只需要3即可。,.,15,ANLL的免疫分型,急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）的分型主要依靠形态学（包括细胞化学染色）来区分，尤其是FAB分型中的M1、M2与M4、M5之间尚无明确的免疫标志划分，但对一些形态学难于分类或特殊类型的ANLL（如M0、M6、M7），细胞免疫学分析对临床确诊ANLL可提供重要信息。,.,16,ANLL的免疫分型,CD34是造血干细胞的特征性标记，与AML的分型有一定关系。CD34+的AML与低分化的FAB亚型M1及原始细胞比较高的M2a有明显的相关性。而在分化程度较成熟的M3、M2b及M5b等白血病细胞则缺乏或极少有CD34抗原的表达。且随着分化程度渐趋成熟，CD34的表达量逐渐减少。,.,17,ANLL的免疫分型特点,FAB-M1/M2的免疫表型特点：CDl3+、CD15+、CD33+、 HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中的表达强于M2，而CD15在M2的表达较强。,.,18,ANLL的免疫分型特点,FAB-M3典型的免疫表型是CDl3+、CD15+、CD33+、CD9+、 CD38+、CD34-/+、HLA-DR-，部分病人可能出现CD2+，CD56+。,.,19,ANLL的免疫分型特点,FAB-M4/M5的免疫表型特点：HLA-DR+、CD15+、CD14+、CD64+、 CD33+/-、CD13+/-、CD34-/+、CD11b/c+。,.,20,ANLL的免疫分型特点,FAB-M6免疫表型特征为HLA-DR-/+，CD36+,血型糖蛋白A或B（Gly-A/B）是阳性，CD34+/-，髓系抗原也可以表达。,.,21,ANLL的免疫分型特点,FAB-M7特征性的抗原表达是CD41，CD42，CD61，部分也可表达CD36。,.,22,ALL的免疫分型,从70年代开始进行免疫学分型,.,23,1986年前五分法,五分法：Common型 未分化型 T细胞型 前B细胞型 B细胞型表型 DR/CD9/CD10+ 复杂 CD2/CD5+ CyIg+ SmIg+发生率：国外 60-70% 30% 15-25% 2-3% 2-3% 国内 50% 30% 20% 0.5% 1.5%预后： 儿童 最好 次之 再次 最次 最次 成人 次之 再次 最好 最次 最次,.,24,1986年后两大类九分法,ALL免疫分型两类九型法: 非T亚型 HLA-DR CD9 CD10 CD20 链 SmIg 发生率% I + - - - - - 5 II + + - - - - 15 III + + + - - - 30 IV + + + + - - 50 V + + +/- +/- + - 5 VI + + - + - + 2,.,25,1986年后两大类九分法,T亚型 CD7 CD5 CD2 CD3 CD4 CD8 CD1a 发生率I + + + - - - - 55II + + + +(25%) +(90%) +(90%) + 25III + + + + +/- -/+ - 20,.,26,1994年四型21类法,4型21类法： 这是1994年法国国际白血病欧洲协作组在过去白血病分型的基础上，对ALL免疫学分型提出的新方法。首先，根据每个CD抗原特异性强弱，确定其相应的积分，并在此基础上将ALL分为4型:裸型：此型中每个系列（T淋巴细胞系、B淋巴细胞系、髓细胞系）积分均2。纯型：此型要求T、B、髓细胞某一系列积分2，而其它细胞系列积分为0。变异型：此型要求某一系列积分2，其它系列积分2。多表型：此型要求2个或2个以上系列积分2。,.,27,ALL的免疫学分类（EGIL，1994年）,1.B-ALL 早期前B-ALL（early Pre-B-ALL） 普通型B-ALL（common-B-ALL） 前B-ALL（Pre-