毛细管等电聚焦【材料浅析】_第1页
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文档简介

1、Capillary Iso-Electric Focusing (CIEF) 毛细管等电聚焦,1,重点资料,等电点，pI 正负电荷相等时对应的pH,两性离子,2,重点资料,细胞色素C10.6 胰蛋白酶原9.2 鲸肌红蛋白7.6 马肌红蛋白6.6 Beta-乳球蛋白 5.2 转铁蛋白 4.3,3,重点资料,pI7的蛋白质在不同pH处的荷电情况,4,重点资料,等电聚焦的原理 具有一定pI的蛋白在电场中建立的pH梯度介质中，当所处位置的pH低于pI时带正电荷，向负极移动；在高于pI的pH位置时带负电，向正极移动；在等于pI处不动。不同等电点组分被聚焦在不同位置而达到聚焦和分离的目的。,5,重点资料,

2、Capillary Iso-Electric Focusing-CIEF,高分辨率（分辨率可达0.005 pH） 快速 微量 在柱检测,6,重点资料,如何在电场方向上产生pH梯度？ 如何维持建立的pH梯度的稳定？,毛细管中pH梯度的建立,7,重点资料,丙烯酸,乙烯氨,聚两性电解质,两性电解质的合成,8,重点资料,两性电解质的电荷与pH的关系,9,重点资料,两性电解质中的蛋白,10,重点资料,CIEF操作过程,11,重点资料,CIEF分辨能力取决于： 扩散系数 电场强度 pH梯度 淌度的pH梯度,12,重点资料,CIEF 中的谱带移动,正极移动：在正极加电解质如NaCl，使聚焦后分离的谱带向该极

3、移动 负极移动：在负极，加电解质如NaCl，使聚焦后分离的谱带向该极移动 压力移动，加电压的同时施加压力，实现移动的同时保持聚焦状态 扫描检测分离谱带，无需谱带移动,13,重点资料,14,重点资料,阳极移动示意图，阳极加入中性盐,15,重点资料,阴极移动示意图，阴极加入中性盐,16,重点资料,CIEF中加电加压转移方法,17,重点资料,CIEF分离蛋白混合物,18,重点资料,CIEF Analysis of anti-CEA MAb,CIEF测定等电点,19,重点资料,CIEF蛋白定量分析,20,重点资料,CIEF分析过程：载入，聚焦，迁移（检测）,21,重点资料,CIEF试验要点,内壁经处理的毛细管 两性电解质（1）和样品充入毛细管 电极液20 mM 磷酸为阳极液，20 mM NaOH为阴极液 加电压聚焦，46kV，聚焦稳态后电流下降到起始的1025 聚焦区带的转移和检测,22,重点资料,操作注意事项 浓缩沉淀：由于局部高度浓缩，有可能导致蛋白沉淀阻塞。需要加添加剂，如PVA等对蛋白质pI影响小的非离子表面活性剂。 检测：因为通常所用两性电解质在低U

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